脂必泰聯合低劑量他汀對冠心病病人HDL功能的影響

王旭蘭 ，劉齊元，王群讓，王 毅

冠心病(coronary heart disease，CHD)的發病率逐年增加，發病機制十分復雜，其中脂代謝紊亂、脂肪沉積是冠心病發生、發展的重要原因之一[1]。目前降膽固醇脂在冠心病的治療中有著不可或缺的地位。他汀類藥物通過抑制肝臟羥甲基戊二酰輔酶A(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme A，HMG-CoA)還原酶，進而阻礙甲羥戊酸中間體的合成而發揮降膽固醇作用。越來越多的臨床試驗發現，強化降低低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、強化降脂(即將LDL-C降至<1.8 mmol/L或在原有基線水平降低50%以上)能有效減少冠心病病人心血管事件的發生率和死亡率[2]。然而大劑量他汀的“6%效應”和隨之而來的不良反應(轉氨酶升高、肌溶解等)又限制了他汀的應用[3]。脂必泰是由紅曲、澤瀉、白術、山楂4味中藥提取物配伍組成的純中成藥制劑，因其可降低總膽固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白(LDL)，且副作用較少，還能升高高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)和抗動脈粥樣硬化作用而逐漸被臨床醫師接受[4]。有研究提示HDL在冠心病、瓣膜病等疾病和手術狀態下失去原有的抗炎、抗凝、抑制動脈粥樣硬化、保護內皮功能、促進血管新生等心血管保護作用而變為趨炎HDL，而他汀可以部分改善趨炎HDL的功能[5-6]。本研究探討脂必泰聯合小劑量他汀治療對冠心病病人血脂及HDL功能的影響及其可能的機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年1月—2018年7月就診于陜西中醫藥大學附屬醫院心內科的冠心病病人60例作為試驗組，年齡42～65(48.75±11.82)歲，同時排除患有未控制的高血壓、嚴重感染性疾病等病人。將病人隨機分為他汀組(阿托伐他汀20 mg，治療8周)和脂必泰組[脂必泰(1粒，2次/日)聯合阿托伐他汀(10 mg)，治療8周]，每組30例。另選取同期于陜西中醫藥大學附屬醫院體檢的志愿者30名作為對照組，年齡45～60(49.72±12.31)歲。所有參與者簽署知情同意書，本研究通過陜西中醫藥大學附屬醫院倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 HDL提取 采集60例冠心病病人用藥前、對照組人群體檢時及各組試驗終點時的空腹靜脈血，依據文獻[7]采用超高速離心提取HDL。BCA蛋白濃度測定試劑盒(美國，Thermo Scientific公司)測定HDL濃度后放4 ℃冰箱(中國，海爾公司)保存備用，提取的HDL可存放3周。

1.2.2 抗氧化力檢測 依據文獻[6]通過血漿游離(cell-free)法檢測各組HDL抗氧化力：各組取等量(100 μg/mL)的HDL，分別加入10 μL CuCl2(21.7 μmol/L)避光孵育1 h，在孵育30 min時再加入10 μL 2.0 mg/mL 二氯熒光素二乙酸酯(Dichlorofluorescein-diacetate，DCFH-DA)孵育30 min。孵育結束后用酶標儀(美國，Thermo Scientific 公司)連續12 h讀取HDL的相對熒光強度值(relative fluorescence units，RFU)，RFU越高提示抗氧化能力越弱。

1.2.3 血管新生功能檢測 采用轉基因斑馬魚細胞株TG ，由The Zebrafish Information Network (ZFIN，美國)提供，這一基因型細胞株的內皮細胞表達增強綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)。待斑馬魚長至3～12個月時，讓其自然交配產卵(胚胎)，收集和挑選處于1～4細胞期的健康胚胎進行實驗。將挑選好的斑馬魚胚胎接種于24孔板內，分別用各組HDL孵育96 h，96 h后用0.05%的苯氧乙酸將胚胎麻醉，然后將每3個胚胎移入一個96孔板的微孔內置熒光顯微鏡下拍照，通過檢查每個胚胎在腸下靜脈血管(subintestinal vein，SIV)異位血管生長的多少對血管新生能力進行評價。

1.3 統計學處理 采用SPSS 13.0統計軟件進行數據分析。多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。采用Graph pad prism 5 作圖。

2 結 果

2.1 3組臨床資料比較 3組年齡和性別比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。3組血脂指標比較，差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 3組臨床資料比較

注：TG為三酰甘油；與對照組比較，①P<0.05。

2.2 各組HDL抗氧化能力比較 與對照組(374.23±57.35)比較，試驗組治療前HDL抗氧化能力(999.30±79.62)明顯減弱；治療后他汀組(742.73±87.75)和脂必泰組(687.20±98.64)HDL抗氧化能力較治療前均改善。詳見圖1。

與對照組比較，＊ P<0.05；與試驗組(治療前)比較， # P<0.05。

2.3 HDL對斑馬魚胚胎SIV異位血管新生的影響 與對照組比較，試驗組(治療前)HDL抑制斑馬魚胚胎SIV異位血管的血管新生，他汀組和脂必泰組HDL促進斑馬魚胚胎SIV異位血管新生。詳見圖2。

圖2 HDL對斑馬魚胚胎SIV異位血管新生的影響

3 討 論

本研究顯示，冠心病病人的HDL抗氧化能力較正常HDL減弱，其促進斑馬魚胚胎SIV異位血管新生的能力也較正常HDL減弱，常規劑量他汀治療及低劑量

他汀聯合脂必泰治療均可一定程度改善冠心病病人HDL抗氧化能力及促進斑馬魚胚胎SIV異位血管新生能力，且常規劑量他汀治療與低劑量他汀聯合脂必泰治療比較差異無統計學意義(P>0.05)。提示就分子生物學層面，脂必泰聯合低劑量他汀與常規劑量他汀在冠心病病人的應用中療效接近。

多項關于他汀的大規模臨床試驗均證實，膽固醇水平的降低程度與冠心病病死率及總死亡率呈負相關[8]。他汀類通過降低LDL-C水平，降低脂核巨噬細胞數和斑塊脂質含量，進而減小斑塊體積、降低斑塊硬度和增大血管腔。此外，有研究顯示他汀還具有促進內皮細胞生成一氧化氮(NO)和改善內皮功能；抑制血管平滑肌細胞和巨噬細胞增殖；抗炎、抗氧化、抗凝和促進血管新生等作用[9-11]。隨著研究的深入，他汀類藥物廣泛應用于臨床，但是與中、低劑量他汀治療比較，大劑量他汀并沒有顯著降低膽固醇(他汀類藥物的“6 規則”， 即他汀類劑量加倍，LDL-C只降低 6%)，但其肝損傷、肌痛等副作用發生率增加[12]。

脂必泰是由紅曲、山楂、澤瀉、白術4味中藥提取物配伍組成的純中成藥制劑，因其副作用較少，且具有降低TC、TG、LDL-C、載脂蛋白B100，升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白A1等調脂和抗動脈粥樣硬化作用，脂必泰聯合低劑量他汀治療逐漸被臨床醫生接受[13]。本研究結果顯示，脂必泰聯合低劑量他汀可以部分改善冠心病病人HDL抗氧化能力和促進斑馬魚胚胎SIV異位血管新生的能力，而且脂必泰聯合低劑量他汀與常規劑量他汀治療效果比較差異無統計學意義(P>0.05)。

綜上所述，在分子生物學機制上，脂必泰聯合低劑量他汀在冠心病病人中的應用是有效的，但尚待大型的臨床研究進一步驗證脂必泰聯合他汀治療的有效性和安全性。