梅毒螺旋體感染的檢測現(xiàn)狀分析

汪夢 許娜 趙鐵

梅毒螺旋體（Treponema pallidum，Tp）是密螺旋體屬蒼白亞種，是一種小而纖細(xì)的螺旋狀微生物。Tp是多階段性傳播疾病——梅毒的病原體。梅毒目前仍然是重要的公共衛(wèi)生問題，影響全球近600萬人。自2003變至今，我國梅毒發(fā)病率呈顯著增長趨勢，年均增長達(dá)13.37%。梅毒感染后7～10周或硬下疳出現(xiàn)6～8周后，梅毒螺旋體即可經(jīng)淋巴進(jìn)入全身血液循環(huán)，幾乎侵犯全身各個(gè)器官——引起心血管、神經(jīng)、生殖等多個(gè)系統(tǒng)嚴(yán)重并發(fā)癥，甚至促進(jìn)HIV的感染和傳播，還可由母體經(jīng)胎盤垂直傳播給胎兒，嚴(yán)重影響出生人口質(zhì)量。

梅毒的診斷及臨床判愈目前主要依靠血清學(xué)診斷。而在梅毒早期沒有免疫反應(yīng);梅毒晚期 （TP往往遷徙到免疫相對薄弱的區(qū)域，眼，脊髓等）;兔感染實(shí)驗(yàn)作為金標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)闀r(shí)間成本及價(jià)格，在臨床應(yīng)用并不現(xiàn)實(shí);梅毒不同階段各重組蛋白檢測結(jié)果并不一樣;PCR用于早期梅毒檢測。所以，及時(shí)、準(zhǔn)確、可靠的診斷及臨床判愈方法對于梅毒的管理來說尤為重要。近年來，以微小RNA（microRNA，miRNA，miRs）為基礎(chǔ)的PCR法因其獨(dú)到的優(yōu)勢（客觀、準(zhǔn)確、耗時(shí)短，易于自動(dòng)化和數(shù)字化等），在各種病原體診斷及腫瘤診斷中得到了一定的應(yīng)用。miRNA是一類內(nèi)源性的非編碼小分子RNA，廣泛參與調(diào)節(jié)多種生命體活動(dòng)。早先的研究發(fā)現(xiàn)miRNA可在血清或者血漿中穩(wěn)定存在，不受反復(fù)凍融或者PH變化的影響。更重要的是，臨床應(yīng)用中，通過抽血檢測其中物質(zhì)的變化就能指示患者的健康狀況是一種微創(chuàng)的方法，因此檢測血中miRNA的含量可作為一種較好的篩查或者輔助診斷的方式。

為明確梅毒患者體內(nèi)miRNA的變化規(guī)律，并探討其在梅毒血管炎癥發(fā)病過程真的作用和機(jī)制，我們對文獻(xiàn)進(jìn)行前期分析，通過比對分析二期梅毒患者和正常人miRNA芯片，發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的miRNA中，潛在的診斷靶標(biāo)包括hsa-mir-21-5p， hsa-miR-19b-3p， hsa-miR-16-5p和hsa-miR-142-3p。盡管這些miRNA在梅毒血清中低于正常人，但目前沒有數(shù)據(jù)確切表明哪一種miRNA或者多重miRNA的診斷價(jià)值最好;且以上miRNA為基礎(chǔ)的PCR等特異性方法尚不能評(píng)價(jià)梅毒的治療和愈后。而臨床以非Tp為基礎(chǔ)的血清學(xué)試驗(yàn)（RPR、TRUST等）主要原理是基于反應(yīng)素。它們的滴度變化通常與疾病的活躍程度有著密切的關(guān)系，因此可作為梅毒的判愈實(shí)驗(yàn)。但是由于反應(yīng)素在其它疾病如SLE、瘧疾、單核細(xì)胞增多癥等也會(huì)存在，所以假陽性率較高。因此，有必要闡明miRNA與梅毒病期之間的關(guān)系，最好是能結(jié)合傳統(tǒng)TPPA、基于Tp膜脂蛋白的ELISA試驗(yàn)和RPR/TRUST試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)，進(jìn)一步提高對梅毒的診斷及判愈價(jià)值。

應(yīng)用miRbase和MIRTARBASE數(shù)據(jù)庫分析hsa-miR-21-5p， hsa-miR-19b-3p， miR-16-5p，和miR-142-3p序列保守性和所在基因組特征;應(yīng)用TargetScan、PicTar及miRanda預(yù)測他們的靶基因，并對其進(jìn)行功能富集分析和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路富集分析。以上miRNA可能通過調(diào)控多個(gè)信號(hào)通路，多階段參與梅毒的病例損傷。目前發(fā)現(xiàn)，由于單個(gè)的miRNA的診斷效率還不是很高，所以我們將多個(gè)miRNA通過二元Logistic回歸方程進(jìn)行組合，探討組合后的模型對梅毒的診斷效率。

深入研究Tp誘導(dǎo)的血清源性miRNA在梅毒病期中的差異表達(dá)。從大樣本臨床病例分析中總結(jié)各miRNA表達(dá)與疾病發(fā)展的關(guān)系，收集各期梅毒患者血清中、皮損組織，RT-PCR檢測上述組織中miRNA的表達(dá)水平，闡明miRNA在梅毒病患中的表達(dá)規(guī)律及與現(xiàn)有診斷試劑表達(dá)之間的關(guān)系，揭示miRNA表達(dá)水平與臨床分期與病程、臨床表現(xiàn)、生化指標(biāo)等梅毒診斷指標(biāo)之間的關(guān)系。深入了解miRNA在梅毒病程中的作用及機(jī)制，建立基于這些Tp感染相關(guān)miRNA的PCR法，評(píng)價(jià)篩選出的Tp感染相關(guān)miRNA在梅毒診斷中的應(yīng)用價(jià)值，尋找可替代傳統(tǒng)Tp診斷的新型診斷靶標(biāo)，為miRNA作為梅毒感染病程和預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物提供理論依據(jù)具有非常重要的意義。

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