早期口腔鱗狀細胞癌中異常表達PDCD4/eIF4A1的預后價值

楊 艷，陳 盛，張 磊，葉傳進，黃曉峰

口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)的發病率占頭頸部腫瘤的24%，術后局部復發是影響早期OSCC患者5年生存率的主要原因[1]，因此尋找有效的生物學標志物有望改善早期OSCC患者的預后。PDCD4是位于人類染色體10q24的抑癌基因[2]。與正常組織相比，PDCD4在結直腸癌、食管鱗狀細胞癌和甲狀腺髓樣癌等多種癌癥中的表達較低[3-4]。PDCD4可以與eIF4A1結合，從而抑制腫瘤細胞的增殖[5-6]。然而，PDCD4/eIF4A1信號在OSCC中的臨床意義尚不清楚。本實驗通過免疫組化檢測早期OSCC中PDCD4/eIF4A1信號在腫瘤中的分布，并分析PDCD4/eIF4A1信號表達與臨床病理特征的關系，探討其對于早期OSCC患者預后的影響。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集南京大學醫學院附屬口腔醫院2007～2014年診斷的50例早期OSCC(T1/T2N0M0)。根據國際癌癥控制聯盟(UICC)腫瘤TNM分期系統對患者臨床分期進行分類。所有患者均未在手術前接受化療或放療；并對50例OSCC患者進行隨訪，隨訪日期截至2019年1月。本實驗經南京大學醫學院附屬口腔醫院倫理委員會批準，所有患者均獲得知情同意書，所收集標本均按照倫理和法律標準處理。

1.2 免疫組化anti-PDCD4(1∶200；ab80590；Abcam公司);anti-eIF4A1(1∶200；ab31217；Abcam公司)。所有標本經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，3 μm厚連續切片，常規脫蠟，免疫組化行SP法染色，DAB顯色。然后在PBS中清洗所有切片。蘇木精襯染，鹽酸乙醇分化，藍化后梯度乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹膠封固。以PBS緩沖液代替一抗作陰性對照，用已知陽性標本作陽性對照。

1.3 結果判定PDCD4、eIF4A1染色結果由兩名高級病理醫師對每種表達進行定量評價，根據陽性細胞百分比和染色強度對免疫組化染色進行綜合評分[7-8]。PDCD4、eIF4A1鏡下以細胞核或細胞質呈棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。采用半定量積分法判斷結果：陽性細胞數占1%～5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分；細胞染色強度：無陽性著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將兩項得分結果相乘，PDCD4和eIF4A1高、低表達由評分的中位數確定。

1.4 統計學分析采用SPSS 16.0和Prism軟件進行統計學分析。采用Pearson χ2檢驗和Fisher精確檢驗比較與患者臨床病理特征的關系。采用Kaplan-Meier曲線分析PDCD4、eIF4A1表達與總生存期之間的關系。在多變量分析中，采用Cox回歸模型檢驗不同預后因素之間的相互關系。

2 結果

2.1 早期OSCC中PDCD4和eIF4A1的表達及其相關性免疫組化結果顯示，腫瘤細胞中可見廣泛分布的PDCD4和eIF4A1(圖1)。PDCD4高表達24例，低表達26例，eIF4A1高表達26例，低表達24例。由于PDCD4與eIF4A1之間的相互作用已經得到證實，本實驗發現在腫瘤的相同區域中PDCD4和eIF4A1的表達具有相反的趨勢(P=0.022)，當PDCD4高表達時，同一區域的eIF4A1表達有降低趨勢(表1)。50例標本連續切片的染色結果顯示，PDCD4和eIF4A1的染色強度在同一樣本的同一區域具有相反的趨勢(圖2)。

表1 OSCC中PDCD4與eIF4A1表達的相關性

2.2 OSCC中PDCD4/eIF4A1表達與臨床病理特征的關系考慮到PDCD4/eIF4A1信號與OSCC進展相關，本實驗進一步分析了不同信號表達模式與早期OSCC患者臨床病理特征的相關性(表2)。結果顯示：PDCD4和eIF4A1表達與患者性別、年齡、吸煙和T分期無關(P>0.05)，但本研究發現腫瘤細胞中低表達PDCD4和腫瘤分化程度較低(P<0.000 1)、WPOI較差(P=0.001)有關，而高表達eIF4A1和腫瘤分化程度低(P=0.005)、WPOI較差(P=0.005)也密切相關。上述結果提示，腫瘤細胞來源的PDCD4可能負性調節eIF4A1的功能以促進OSCC的惡性表型。

2.3 PDCD4、eIF4A1表達與OSCC預后的關系本實驗將50例OSCC患者分為PDCD4高、低表達組和eIF4A1高、低表達組，對PDCD4/eIF4A1信號表達與總生存率之間的關系進行評估，結果表明：腫瘤細胞中PDCD4低表達與總生存時間較短相關(P=0.000 3)，而eIF4A1高表達與總生存時間較短相關(P=0.001 1，圖3)。上述結果表明，PDCD4和eIF4A1對OSCC預后的影響呈相反的趨勢。

2.4 OSCC預后的影響因素本實驗采用單變量和多變量分析OSCC各臨床病理特征對預后的影響及意義。結果顯示，患者年齡、吸煙、分化、WPOI和eIF4A1在腫瘤細胞中的表達不是患者總生存期的預后指標。腫瘤細胞中PDCD4低表達(P<0.001)、T分期(P=0.002)是OSCC的重要獨立危險因素。eIF4A1表達并不是早期OSCC的獨立危險因素(P=0.923，表3)。

3 討論

PDCD4/eIF4A1信號在腫瘤的發生、發展過程中具有重要的病理學意義，因此有必要研究PDCD4/eIF4A1信號在早期OSCC中表達的臨床意義。本實驗對早期OSCC中PDCD4/eIF4A1信號的不同表達模式進行了綜合分析，發現腫瘤細胞中PDCD4低表達和eIF4A1的高表達具有促癌作用。本實驗發現，在OSCC腫瘤細胞中PDCD4/eIF4A1信號的表達模式與以往在其他腫瘤細胞的研究結果一致。

表3 Cox風險回歸模型對口腔鱗狀細胞癌無瘤生存率預后因素的預測

圖3 PDCD4(A)、eIF4A1(B)的表達與口腔鱗狀細胞癌患者預后的的關系

前期研究發現，結腸癌中PDCD4表達缺失與患者較差的生存率和較低的無瘤生存率相關，eIF4A1也被發現可以預測乳腺癌的不良預后[9]。然而，目前對它們在同一腫瘤中的共表達模式的預后價值知之甚少，而本實驗發現PDCD4與eIF4A1在腫瘤組織相同部位具有相反的表達模式。同時，在腫瘤細胞中高表達PDCD4或低表達eIF4A1與更高的總生存率相關。Cox比例風險模型顯示，腫瘤細胞低表達PDCD4是OSCC生存率的重要獨立危險因素。

綜上所述，早期OSCC中PDCD4/eIF4A1信號表達水平與反映原發性腫瘤進展的病理參數有關，包括最初診斷時的分化程度和WPOI，同時異常的PDCD4/eIF4A1信號表達水平也可預測早期OSCC的不良預后。