下調(diào)miR-27a表達(dá)對(duì)三陰乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的 影響研究

齊正

摘 要：目的 分析下調(diào)miR-27a表達(dá)對(duì)三陰乳腺癌（TNBC）細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響。方法 選取我院自2018年4月～2020年4月收治的85例三陰乳腺癌患者，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)患者癌組織miR-27a表達(dá)進(jìn)行分析，并分析該表達(dá)與患者臨床特征之間的關(guān)系。結(jié)果 CCK-8檢測(cè)結(jié)果，在接種后3、4和5 d，miR-27a inhibitor組細(xì)胞增殖活性較NC組明顯降低（P<0.05）;Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-27a 抑制物 48 h 后穿膜細(xì)胞數(shù)明顯少于NC 組（P<0.05），而 NC 組 與 control 組相比穿膜細(xì)胞數(shù)無明顯差異。結(jié)論 miR-27a在TNBC組織中表達(dá)升高，將miR-27a表達(dá)下調(diào)可有效抑制TNBC細(xì)胞中MDA-MB-453的增值、遷移與侵襲能力，對(duì)控制患者病情具有極為重要的作用。

關(guān)鍵詞：miR-27a 三陰乳腺癌 細(xì)胞增殖 細(xì)胞遷移 細(xì)胞侵襲

中圖分類號(hào)：R737.9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1003-9082（2020）06-0-01

三陰乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是指孕激素受體（（progesterone receptor，PR）與人類表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2，HER2）表達(dá)為陰性的乳腺癌，在所有乳腺癌患者中占約15%～25%，且具有特殊生物表達(dá)及臨床病理特征的疾病。與非三陰乳腺癌（non-triple-negative breast cancer，non-TNBC）相比，TNBC具有更高的復(fù)發(fā)率與轉(zhuǎn)移性，對(duì)患者的生存周期造成了極為顯著的影響[1]。因此，在對(duì)TNBC發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制進(jìn)行探討，尋找有效的治療靶點(diǎn)成為當(dāng)前對(duì)乳腺癌研究中的重要課題。本此研究針對(duì)下調(diào)miR-27a表達(dá)對(duì)TNBC細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道入下。

一、資料與方法

1. 一般資料

選取我院自2018年4月～2020年4月收治的85例三陰乳腺癌患者，年齡42～65歲，平均年齡（53.52±3.25）歲，所有患者均行病理學(xué)診斷為非特殊型浸潤性導(dǎo)管癌，且行免疫組化學(xué)法染色ER、PR、HER2均為陰性。同時(shí)，根據(jù)行熒光測(cè)定量PCR結(jié)果，miR-27a表達(dá)與癌旁組織對(duì)比升高大于50%則為miR-27a高表達(dá)組，而miR-27a表達(dá)與癌旁組織對(duì)比不升高過升高<50%則為miR-27a低表達(dá)組。所有患者術(shù)前均接受放化療。

2. 方法

TNBC細(xì)胞MDA-MB-453采用RPMI-1640培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，而MCF-10A細(xì)胞則采用DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)。在所有培養(yǎng)基中均加入10%胎牛血清、100U/L請(qǐng)每組與100U/L鏈霉素，培養(yǎng)條件為37℃、95%飽和溫濕度以及5%CO2。并根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)2～3d進(jìn)行1次換液。細(xì)胞生長至70%融合時(shí)，0.25%胰酶細(xì)胞消化液消化穿戴，取第3代對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞接種于6孔板，使用Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑，參考說明書分別向MDA-MB-453細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-27a抑制物（miR-27a inhibitor組）和miR-27a陰性對(duì)照片段（NC 組），未轉(zhuǎn)染組作為空白對(duì)照（control組）。熒光顯微鏡下檢查轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染成功后培養(yǎng)板置37℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，48h后收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。miR-27a抑制物序列為5-GCGGAACUUAGCCCACUGUGAA-3。

3.觀察指標(biāo)

轉(zhuǎn)染miR-27a抑制物對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞增殖的影響。

轉(zhuǎn)染miR-27a抑制物對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞遷移和侵襲的影響。

4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用（%）和x2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（x±s）和t檢驗(yàn)，以（P<0.05）具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1.轉(zhuǎn)染miR-27a抑制物對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞增殖的影響

CCK-8 檢測(cè)結(jié)果，在接種后3、4和5 d，miR-27a inhibitor組細(xì)胞增殖活性較NC組明顯降低（P<0.05），表明下調(diào)MDA-MB-453細(xì)胞中miR27a表達(dá)可顯著抑制細(xì)胞增殖能力。

2.轉(zhuǎn)染miR-27a抑制物對(duì)MDA-MB-453細(xì)胞遷移和侵襲的影響。

Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-27a抑制物48h后穿膜細(xì)胞數(shù)明顯少于NC組（P<0.05），而 NC 組 與 control 組相比穿膜細(xì)胞數(shù)無明顯差異;同樣， Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)呈現(xiàn)出一致的結(jié)果。表明下調(diào) miR-27a表達(dá)可抑制TNBC細(xì)胞MDA-MB-453的遷移和侵襲能力。

三、討論

乳腺癌是女性患者中極為常見的惡性腫瘤之一，具有較高的發(fā)病率與死亡率。TNBC是臨床中特殊的乳腺癌，具有發(fā)病年齡低、家族史明顯、惡性程度高等特點(diǎn)，因此其發(fā)展機(jī)制受到了醫(yī)學(xué)界的重視[2]。

臨床研究中表示，miR-27a作為致癌因子已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)了在多種實(shí)體腫瘤中表達(dá)升高，并且與細(xì)胞的增值、遷移以及侵襲有著極為密切的關(guān)系。本此研究通過對(duì)此進(jìn)行研究表明，下調(diào)MDA-MB-453細(xì)胞中miR27a表達(dá)可顯著抑制細(xì)胞增殖能力，并且下調(diào) miR-27a表達(dá)可抑制TNBC細(xì)胞MDA-MB-453的遷移和侵襲能力[3]。

綜上所述，通過對(duì)下調(diào)miR-27a表達(dá)對(duì)三陰乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響進(jìn)行研究，能準(zhǔn)確地對(duì)患者病情進(jìn)行評(píng)價(jià)，從而為患者后續(xù)治療提供可靠的參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]蔣雪梅，權(quán)毅.上調(diào)miRNA-27a-3p對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2019，54，（02）：136—140.

[2]李繼勇，解榮，喻遠(yuǎn)航等.微小RNA-26a對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的調(diào)控作用[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2019，36，（2）：245—247.

[3]王偉淋，王海波，張潤澤等.KIF3A基因沉默和過表達(dá)對(duì)人三陰性乳腺

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