貝伐單抗聯合FOLFIRI治療晚期大腸癌療效與循環內皮細胞相關性分析

吳芳 劉忠 黎軍和 盧致輝 史克志 李璇

（南昌大學第一附屬醫院腫瘤科 江西 南昌 330006）

大腸癌嚴重危害人類健康的主要腫瘤之一，我國大腸癌的發病率和病死率呈現逐年上升趨勢。晚期大腸癌治療以靶向藥物聯合化療為主。貝伐珠單抗(bevacizumab，BEV)是一種重組的人源化IgGl單克隆抗體，其通過抑制人類血管內皮生長因子的生物活性而起作用。2004年美國食品和藥物管理局(FDA)批準將BEV聯合化療用于轉移性結直腸癌的一線治療[1]。目前貝伐單抗治療晚期大腸癌還沒有公認的，特異性的療效預測指標。循環內皮細胞(circulating endothelial cells，CEC)是指從血管壁上脫落至循環外周血中的一類成熟的、終末分化的內皮細胞[2]。此類細胞在正常人外周血中數量極少。CEC計數增加反映了血管新生狀態[3]。腫瘤患者體內的CEC計數與健康人群比較有明顯的差異。多項研究結果表明CEC計數能夠作為腫瘤患者的預后情況與治療反應的預測因子[4]。本研究探討貝伐單抗聯合化療治療晚期大腸癌療效與循環內皮細胞的相關性。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月—2018年1月在我科住院的40例Ⅳ期大腸癌患者，所有患者均經組織學病理確診為大腸癌，其中結腸癌24例，直腸癌16例，出現局部復發或有不同程度肝臟、肺、淋巴結等器官的轉移。血常規、肝腎功能、心電圖正常，EC0G評分≤2分，估計生存期在3個月以上。年齡30～78歲，平均年齡為57歲，男26例，女14例。本研究20例建康志愿者，來自本院體檢人群。均簽署知情同意書。

1.2 治療方法

全部患者使用貝伐單抗聯合FOLFIRI方案，貝伐單抗的用量為5mg/kg，FOLFIRI方案：伊立替康180mg/m2靜脈滴注d，四氫葉酸注射液200mg/m2，靜脈滴注2h，dl-2，5-FU 400mg/m2靜脈推注d1-2；600mg/m2，持續靜脈輸注46h。2周重復用藥。至少完成4個周期。每四個周期后，即評定療效。患者用藥前及用藥2周期后，4周期后檢查患者CECs計數。

1.3 療效評價評估

近期療效評價參照實體瘤客觀療效評定標準(RECIST)1.1版分為完全緩解(complete response，CR)、部分緩解(partial response，PR)、疾病穩定(stable disease，SD)和疾病進展(progressive disease，PD)。有效率(RR)為CR+PR,疾病控制率(DCR)為CR+PR+SD。

1.4 CEC檢測

采用流式細胞檢測計數的方法，于化療前、42周期后、4周期后檢測外周血中CEC的含量，晨起空腹時采血2m1，取2個進樣管分別標上對照管和CEC管；將CD45 15ul分別加入對照管和CEC管，實驗管加入CD45-PE。大鼠CD146- FITC。重懸細胞，每管中加入0.5ml含1%多聚甲醛的PBS固定細胞，低速混勻，固定30min，上機檢測。上機前以標準熒光微球調整儀器的變異系數并穩定在2以內，以目標細胞群設門，上機后選取1萬個細胞，根據細胞發出的熒光測定表達率并計算CD45-CD146+細胞(aCECs)數。見圖。

圖 大腸癌患者外周血CEC計數流式細胞檢測

1.5 統計學分析

兩組間有效率的比較采用Fisher的確切概率法。定量資料比較采用成組t檢驗。P≤0.05為有統計學意義。

2.結果

2.1 40例晚期大腸癌患者的基線CEC的情況

40例晚期大腸癌患者，均完成8至少4周期化療。患者外周血CEC為(248.32±176.02)個，高于20例健康志愿者的(82.84±58.35)個，差異有統計學意義(P＜O.05)。

2.2 40例晚期大腸癌化療療效表1。

表1 40例晚期大腸癌化療療效

2.3 大腸癌患者化療前后CEC含量變化

40例晚期大腸癌患者化療前，CEC計數為(248.32±176.0)個；2個周期后CEC計數為(176.52±107.46)個，4個周期后CEC計數(165.24±102.22)個。化療后患者外周血中的CEC含量較化療前降低，差異有統計學意義(P=0.024；0.022)，化療前：2周期后、2周期后：4周期后、化療前：4周期后P分別為0.024、0.825、0.022.而化療過程中CEC含量變化不大(P=O.825)(表2)。

表2 大腸癌患者的基線CEC計數（±s）

表2 大腸癌患者的基線CEC計數（±s）

CEC P化療前 248.32±176.0 0.024化療2周期后 176.52±107.46 0.825化療4周期后 165.24±102.22 0.022

2.4 大腸癌患者化療后臨床獲益組和臨床進展組CEC含量比較

臨床獲益患者31人，化療前外周血CEC含量為256.23±152.20；臨床進展患者9人，化療前外周血CEC含量為199.58±122.22。取得臨床獲益的患者化療前外周血中CEC含量高于臨床進展患者，差異有統計學意義(P=O.039)(表3)。

表3 臨床獲益組和臨床進展組化療前CEC含量比較

在化療過程中，臨床獲益患者外周血中CEC含量是逐漸降低的，其差異有統計學意義(P=0.015：P=0.006)。進展患者化療前和化療2周期后相比，外周血CEC含量變化不大(P1=0.723)，化療4周期后CEC含量升高，與化療前相比差異具有統計學意義(P2=0.046)(表4)。

表4 臨床獲益組和臨床進展組化療過程中CEC含量比較

3.討論

在我國，大腸癌發病率為所有腫瘤第三位。貝伐單抗用于晚期大腸癌治療后，患者生存時間明顯延長，但仍有部分患者耐藥。目前貝伐單抗治療晚期大腸癌還沒有公認的、特異性的療效預測指標。循環內皮細胞(CEC)取材方便，而流式細胞技術操作簡易，CEC計數增加反映了血管新生狀態，本研究探討CEC能否預測貝伐單抗療效。1994年Barden等提出CDl46標記是血管內皮細胞的免疫標志，且目前公認CDl46是內皮細胞特異性最強的免疫標志。特異性的表達于所有血管內皮細胞，同時在活化的T淋巴細胞中也有表達。因此用CD45(造血系統來源細胞的標記)將其與活化的T淋巴細胞加以區別，即可定義CEC：CDl46+CD45-。本研究采用了CDl46+CD45-這種免疫標記。本研究探討貝伐單抗聯合化療治療晚期大腸癌療效與循環內皮細胞的相關性。

本研究顯示40例晚期大腸癌患者使用貝伐單抗聯合FOLFIRI方案，部分緩PR32.5%,SD45%,與文獻報道一致。大腸癌患者的外周血CEC計數，高于20例健康志愿者的，差異有統計學意義。這與國內外文獻報道一致[5]。患者經治療后外周血CEC計數逐漸下降。取得臨床獲益的患者治療前外周血中CEC含量高于臨床進展患者，差異有統計學意義。在化療過程中，臨床獲益患者外周血中CEC含量是逐漸降低的，其差異有統計學意義。進展患者治療前和治療2周期后相比，外周血CEC含量變化不大，治療4周期后CEC含量升高，與治療前相比差異具有統計學意義。研究結果初步說明CEC在治療中的變化趨勢可以反映療效，CEC含量降低提示取得療效的可能性大，反之CEC升高則有進展的可能。臨床獲益患者治療前CEC含量高于臨床進展患者，提示治療前CEC含量高的患者更易臨床獲益。

本研究顯示，CEC與貝伐單抗治療晚期大腸癌療效具有相關性。我們觀察到晚期大腸癌患者在治療有效的患者中CEC含量是下降的。與一些文獻報道結果一致[6]。目前也有一些文獻并不支持CEC與腫瘤客觀反應率相關。這可能與CEC檢測或標記方法不同有關。目前科研和臨床上較常應用的是流式細胞計數法和免疫磁珠分離法。免疫磁珠分離法靈敏度高，對細胞破壞小，然而成本過高，僅局限于少數科研領域的應用。采用流式細胞檢測計數的方法來檢測CEC，結果可靠且方法簡單易行，易在臨床上推廣。但是如何檢測標記CEC，尚未統一，值得我們進一步研究。我們還觀察到臨床獲益患者治療前CEC含量高于臨床進展患者，提示治療前CEC含量高的患者更易臨床獲益。有研究表明貝伐單抗聯合化療治療腦膠質瘤，治療后CEC數值明顯升高，與患者預后相關，而貝伐單抗單藥治療后CEC數值與預后無關。CEC數值是否可成為貝伐單抗等抗血管生成藥物的療效預測指標還值得進一步探討。