阿昔莫司聯合氯吡格雷對高血脂大鼠血脂及頸動脈粥樣硬化的改善作用

姜愛雯　杜佩珊　王淑珍　石金錚　劉云寧　李方江

[摘要] 目的 通過建立高脂血癥大鼠模型考察阿昔莫司聯合氯吡格雷對高血脂大鼠血脂及頸動脈粥樣硬化的改善作用。 方法 從45只大鼠中選取10只大鼠作為正常組給予普通飼料喂養，剩余35只大鼠給予高脂飼料造模，連續造模4周，隨機選取其中5只以總膽固醇（TC）水平升高且與正常組比較差異有統計學意義來判斷造模成功與否。將剩余30只造模成功大鼠隨機分成模型組、阿昔莫司組（32 mg/kg）、聯合組（阿昔莫司32 mg/kg+氯吡格雷10 mg/kg），每組10只。檢測大鼠體重、血脂指標、血液血流變相關參數及血清炎性因子水平，小動物超聲儀檢測大鼠頸動脈血管內膜厚度（IMT）和頸動脈血管中膜厚度（MT）。 結果 阿昔莫司組血脂中三酰甘油（TG）、TC、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平低于模型組而高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平高于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）;兩組體重比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。聯合組血脂中TG、TC、LDL-C水平明顯低于模型組，同時TC、LDL-C水平低于阿昔莫司組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。阿昔莫司組全血黏度、血漿黏度和紅細胞聚集指數明顯低于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。聯合組全血黏度、血漿黏度和紅細胞聚集指數明顯低于模型組且全血黏度指標（切變率5和1）、血漿黏度及紅細胞聚集指數低于阿昔莫司組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。阿昔莫司組血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）水平低于模型組而IL-10水平高于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。聯合組血清中TNF-α、IL-6水平低于模型組及阿昔莫司組，IL-10水平高于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。模型組、阿昔莫司組及聯合組IMT、MT均高于正常組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。阿昔莫司組IMT、MT低于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）;聯合組MT明顯低于模型組及阿昔莫司組，IMT低于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。 結論 阿昔莫司有效改善高脂飲食導致的大鼠血脂升高及頸動脈粥樣硬化，合用氯吡格雷保護作用更加顯著。

[關鍵詞] 阿昔莫司;氯吡格雷;高血脂;頸動脈粥樣硬化

[中圖分類號] R743? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2020）06（c）-0019-05

[Abstract] Objective To investigate the effect of the improvement of serum lipids and carotid atherosclerosis in hyperlipidemia rats by Acipimox combined with Clopidogrel in a hyperlipidemia rat model. Methods Ten rats from 45 rats were given normal feed as the normal group. The remaining 35 rats were given high-fat feed to model for 4 consecutive weeks， and 5 of them were randomly selected to judge whether the model was successful or not with increased total cholesterol （TC） level and statistically significant difference compared with the normal group. After successful modeling， the remaining 30 rats were randomly divided into the model group， the Acipimox group （32 mg/kg）， and the combined group （32 mg/kg Acipimox + 10 mg/kg Clopidogrel ）， with 10 rats in each group. The body weight， blood lipid index， hemorheology relevant parameters and serum inflammatory factors of the rats were measured. The carotid artery intimal thickness （IMT） and carotid artery? media? thickness （MT） were measured by small animal ultrasound. Results The levels of triglyceride （TG）， TC and low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C） in blood lipid of the Acipimox group were lower than those of the model group， while the levels of high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C） were higher than those of the model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. There was no significant difference in body weight between the two groups （P > 0.05）. The levels of TG， TC， and LDL-C in serum lipids in the combined group were significantly lower than those in the model group， while the levels of TC and LDL-C in the combined group were lower than those in the Acipimox group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. The whole blood viscosity， plasma viscosity and erythrocyte aggregation index in Acipimox group were significantly lower than those in model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. The whole blood viscosity， plasma viscosity and erythrocyte aggregation index in the combined group were significantly lower than those in the model group， and the whole blood viscosity index （shear rate 5 and 1）， plasma viscosity and erythrocyte aggregation index in the combined group were significantly lower than those in the Acipimox group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Serum levels of tumor necrosis factor-α （TNF-α） and interleukin-6 （IL-6） in the Acipimox group were lower than those in the model group， while IL-10 were higher than those in the model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. The serum levels of TNF-α and IL-6 in the combined group were lower than those in the model group and the Acipimox group， and the level of IL-10 in the combined group was higher than that in the model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. IMT and MT in the model group， the Acipimox group and the combined group were all higher than those in the normal group， and the differences were statistically significant （P < 0.05）. IMT and MT in Acipimox group were lower than that in model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. MT in the combined group was significantly lower than that in the model group and the Acipimox group， and IMT was significantly lower than that in the model group， and the differences were statistically significant （all P < 0.05）. Conclusion Acipimox can effectively improve the hyperlipidemia and carotid atherosclerosis in rats induced by high-fat diet， and the protective effect is more significant when combined with Clopidogrel.

[Key words] Acipimox; Clopidogrel; Hyperlipidemia; Carotid atherosclerosis

隨著我國社會經濟的高速發展，人民生活水平的不斷提高，生活節奏的不斷加速，伴隨而來的是飲食結構的改變，富含高脂食物的攝入量逐步增加，引發的動脈粥樣硬化性心血管疾病（arteriosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）成為了威脅人類健康的主要疾病[1]。心腦血管疾病的發病率和死亡率呈逐年上升的趨勢，其中以動脈粥樣硬化為病理基礎的冠心病和缺血性腦卒中占主要部分[2-3]。

高脂飲食導致機體血脂明顯高于正常狀態，主要體現在機體總膽固醇（TC）和/或三酰甘油（TG）過高，高密度脂蛋白（HDL）過低等，而脂代謝的紊亂可以導致機體氧化應激反應的發生，機體過多的活性氧（ROS）無法被抗氧化酶消除，導致機體中的低密度脂蛋白（low density lipoproteins，LDL）在動脈壁被ROS氧化修飾形成氧化型低密度脂蛋白（oxidized low densitylipoprotein，ox-LDL）[4-5]。ox-LDL是導致血管內皮損傷的重要因素。ox-LDL可增加內皮細胞對LDL的通透性，引起胞漿發生空泡變性，漿膜皺縮，并導致內皮細胞凋亡發生并最終壞死[6]。血管內皮損傷的發生是誘發動脈粥樣硬化的關鍵因素之一，此外血小板的凝聚也是誘發動脈粥樣硬化的關鍵因素之一，其中頸動脈粥樣硬化又是腦卒中的主要因素[7-8]。因此有效的降低血脂水平，改善血小板凝聚是治療高脂血癥誘發動脈粥樣硬化的關鍵。阿昔莫司屬于煙酸類新型血脂調節藥物，可以顯著降低機體血脂水平[9]。氯吡格雷屬于血小板聚集抑制劑，臨床中主要用于介入手術后的動脈硬化的治療及預防，有研究顯示氯吡格雷與他汀類合用可以顯著改善機體血脂及動脈粥樣硬化[10-11]，但是氯吡格雷與阿昔莫司合用后對高脂血癥大鼠血脂及動脈粥樣硬化的保護作用還有待探究。因此本研究采用高脂飼料喂養的大鼠，考察阿昔莫司及其與氯吡格雷合用對高脂血癥大鼠血脂及動脈粥樣硬化的改善作用。

1 資料與方法

1.1 資料

阿昔莫司（魯南貝特制藥有限公司，20160812）;氯吡格雷（賽諾菲制藥公司，20161011）;高脂飼料（南通特洛菲生物科技有限公司，TP26001，其中每公斤含：酪蛋白195 g、淀粉150 g、蔗糖342 g、脂肪210 g、膽固醇1.5 g、纖維素50 g，20170106）。SPF級雄性SD大鼠，體重180～220 g，45只，購自北京華阜康生物科技有限公司，飼養于溫度18～26℃，相對濕度40%～70%，SPF級動物實驗室，動物許可證號：SCXK（京）2014-0008，實驗通過河北北方學院附屬第一醫院倫理委員會審批（批件編號：201801-23號）。

1.2 試劑

TC（南京建成科技有限公司，批號：20170316）;TG測定試劑盒（南京建成科技有限公，批號：20170403）;TC測定試劑盒（南京建成科技有限公司，批號：20170 327）;低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）測定試劑盒（南京建成科技有限公司，批號：20170412）;高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測定試劑盒（南京建成科技有限公司，批號：20170611）。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素（IL）-6、IL-10酶聯免疫吸附試驗試劑盒（碧云天生物技術公司，批號：PT512、PI328，PI525）。

1.3 儀器

賽多利斯分析天平（法國賽多利斯公司，CPA225D，精度0.001 g）;全自動酶標儀（瑞士Tecan公司，InfiniteMPr200型）;全自動血流變分析儀（德國美創，Coatron 1800）。

1.4 動物模型建立及分組

45只大鼠適應性喂養1周后，選取10只大鼠作為正常組給予普通飼料喂養，剩余35只大鼠給予高脂飼料造模，連續造模4周，隨機選取其中5只大鼠以TC水平升高且與正常組比較差異有統計學意義來判斷造模成功與否。將剩余30只造模成功大鼠隨機分成3組，每組10只。模型組、阿昔莫司組（32 mg/kg）、聯合組（阿昔莫司32 mg/kg+氯吡格雷10 mg/kg）。各給藥組按相應劑量灌胃給藥，1次/d，連續灌胃4周，正常組和模型組給予體積相同的生理鹽水。正常組繼續給予普通飼料，其余各組均繼續給予高脂飼料。

1.5 血清中血脂、炎性因子及血液流變學測定

采用酶聯免疫法檢測TC、HDL-C、LDL-C、TG、TNF-α、IL-6指標，實驗方法參照試劑盒說明書。采用全自動生化分析檢測血液流變學指標。

1.6 大鼠頸動脈超聲檢測

將大鼠仰臥位固定于平板上，采用SD-1700彩色超聲儀測量頸動脈血管內膜（IMT）、頸動脈血管中膜（MT）。頸部側伸45°，取頸動脈長軸切面測量頸總動脈、頸內和頸外動脈起始端管腔內膜交界面到內膜與外膜交界處之間的垂直距離，位置為雙側頸總動脈、頸動脈分叉處，連續測量3個心動周期，取其平均值為IMT、MT。

1.7 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件對所得數據進行分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 阿昔莫司聯合氯吡格雷對大鼠血脂水平及體重的影響

模型組大鼠體重及TG、TC、LDL-C水平明顯高于正常組，但HDL-C水平明顯低于正常組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。阿昔莫司組TG、TC、LDL-C水平低于模型組而HDL-C水平高于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05），兩組體重比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。聯合組血脂中TG、TC、LDL-C水平明顯低于模型組，同時TC、LDL-C水平低于阿昔莫司組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。見表1。

2.2 阿昔莫司聯合氯吡格雷對高脂血癥大鼠血液流變學的影響

造模8周后，模型組全血黏度、血漿黏度和紅細胞聚集指數明顯高于正常組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。阿昔莫司組全血黏度、血漿黏度和紅細胞聚集指數明顯低于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。聯合組全血黏度、血漿黏度和紅細胞聚集指數明顯低于模型組且全血黏度指標（切變率5和1）、血漿黏度及紅細胞聚集指數低于阿昔莫司組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。見表2。

2.3 阿昔莫司聯合氯吡格雷對高脂血癥大鼠血清炎性因子水平的影響

高脂飼料喂養8周后，模型組血清中TNF-α、IL-6水平高于正常組，而IL-10水平低于正常組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。阿昔莫司組血清中TNF-α、IL-6水平低于模型組，而IL-10水平高于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。聯合組血清中TNF-α、IL-6水平低于模型組及阿昔莫司組，IL-10水平高于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。見表3。

2.4 阿昔莫司聯合氯吡格雷對大鼠頸動脈超聲檢測結果的影響

模型組、阿昔莫司組及聯合組大鼠IMT、MT高于正常組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。阿昔莫司組大鼠IMT、MT低于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）;聯合組大鼠MT明顯低于模型組及阿昔莫司組，IMT低于模型組，差異均有統計學意義（均P < 0.05）。見表4。

3 討論

高脂血癥是誘發心血管疾病的重要因素之一，高血脂可以導致血管內皮損傷的發生，繼而影響心血管功能導致心血管疾病的發生[12-15]。血清TG、TC是評價機體血脂水平的關鍵指標[16]。本研究結果顯示，大鼠給予阿昔莫司后可以顯著改善高脂飼料喂養導致的大鼠TC、TG水平升高，當聯合氯吡格雷給藥后，大鼠血脂水平與模型組比較，差異有統計學意義，且TG水平與阿昔莫司組比較，差異有統計學意義（P < 0.05）。血清TC與動脈粥樣硬化、冠心病、腦卒中等心腦血管疾病關系密切，而機體中的脂蛋白分為LDL及HDL，其中LDL和TC結合而成的LDL-C，是導致動脈硬化的關鍵因素，而HDL和TC結合形成HDL-C，可將TC從組織轉移到肝臟中去，具有防治動脈粥樣硬化的作用[17-18]。實驗結果顯示阿昔莫司可以降低血脂LDL-C水平，同時升高HDL-C水平，具有顯著的保護作用，而聯合氯吡格雷后，相較于單一給予阿昔莫司可以進一步降低機體LDL-C水平。

血脂水平與血液流變學具有一定相關性[19-20]，血液流變學實驗檢測顯示阿昔莫司可以顯著改善高脂飼料喂養導致的小鼠血液流變學指標變化，明顯降低全血黏度、血漿黏度和紅細胞聚集指數，同時合用氯吡格雷后大鼠全血黏度指標（切變率5和1）、血漿黏度及紅細胞聚集指數較單一應用阿昔莫司有顯著性差異。高血脂可以導致血管中炎性因子的釋放[21-22]，本研究顯示給予阿昔莫司后，大鼠血清炎性因子水平顯著降低，同時阿昔莫司與氯吡格雷聯合使用后，可以進一步降低TNF-α、IL-6水平。通過超聲檢測表明阿昔莫司發揮顯著改善頸動脈損傷的作用，可以明顯降低IMT、MT，合并氯吡格雷后可以進一步降低大鼠MT。

本研究結果顯示，阿昔莫司具有顯著改善大鼠血脂，及改善大鼠頸動脈損傷的作用，而合并氯吡格雷后可以進一步提高其保護作用。氯吡格雷為血小板聚集抑制劑，對血脂沒有顯著的臨床改善作用。目前美國及歐洲心血管疾病的診療指南中已將該藥物用于急性冠心病患者的治療用藥，與他汀類合用用于患者血脂的調節，但是目前該藥物與他汀類合用的作用機制尚不清楚，本研究結果提示其與阿昔莫司聯合使用也顯著升高阿昔莫司對血脂的調節作用，但兩藥合用改善大鼠頸動脈損傷的分子機制還有待進一步探究。

[參考文獻]

[1]? Oikonomou E，Siasos G，Tousoulis D. Atherogenesis and hyperlipidemia a notstraightforward association：We really need a novel biomarker？ [J]. Int J Cardiol，2016，202：586-588.

[2]? Xi B，Liu F，Hao Y，et al. The growing burden of cardiovascular diseases in China[J]. Int J Cardiol，2014，174（3）：736-737.

[3]? Kowalczyk E，Krzesiński P，Kura M，et al. Anthocyanins in medicine [J]. Pol J Pharmacol，2003，55（5）：699-702.

[4]? 李思源，周杰，張鷗，等.冠狀動脈鈣化的影響因素[J].中華老年多器官疾病雜志，2018，17（3）：228-232.

[5]? 安冬青，吳宗貴，梁春，等.血脂異常中西醫結合診療專家共識[J].中國全科醫學，2017，20（3）：262-269.

[6]? 鄧蘭蘭，潘玉華，馮金玉，等.頸動脈粥樣硬化與血壓及血脂的相關性分析[J].中國繼續醫學教育，2017，9（4）：129-131.

[7]? Casanova F，Wood AR，Yaghootkar H，et al. A Mendelian Randomization Study Provides Evidence that Adiposity and Dyslipidemia Lead to Lower Urinary Albumin Creatinine Ratio，a Marker of Microvascular Function [J]. Diabetes，2020，69（5）：1072-1082.