骨髓細胞形態學聯合細胞化學染色檢測在神經母細胞瘤診斷中的應用①

周明曉

(河南省鄭州市第二人民醫院檢驗科，河南 鄭州 450006)

神經母細胞瘤是一種常見的兒童惡性實體腫瘤，在新生兒時期就可發病，在發病早期就可能會出現轉移，對于患病兒童的生命安全具有嚴重威脅，近年來，臨床上其發病率表現為逐年增加的趨勢，分析其臨床特點，其轉移部位與原發灶大小沒有直接關系，常會出現皮膚、眼眶、骨髓、淋巴結、骨等部位的轉移，由于其發病早期存在一定的隱匿性特點，導致其早期診斷工作面臨著較大難度[1]。其中神經母細胞瘤的骨髓轉移非常常見，這會對其預后產生嚴重影響，隨著臨床上強化其治療方法，最終取得的臨床療效也進一步提升，很多病例在接受標準化治療之后，骨髓辨病逐漸消失，取得明顯療效，但是還有一些患者雖然在經過治療之后骨髓神經母細胞瘤已經消失，但是最終還是導致骨髓復發，這可能是因為診斷及治療過程中的檢測方法靈敏度不能滿足實際需求，這也提示，保證神經母細胞瘤診斷方法的準確性、靈敏度非常必要[2]。骨髓細胞形態學檢查是神經母細胞瘤最為直觀、基礎的檢查方法，是血液病臨床診斷時不可或缺的診斷方法，但是對于很小的病灶還是會存在誤診現象。鑒于此，本文就主要對骨髓細胞形態學聯合細胞化學染色檢測在神經母細胞瘤診斷中的應用價值予以探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取我院2018-02～2018-07收治的神經母細胞瘤患者40例為觀察組，并選擇同期在我院開展治療的非神經母細胞瘤患者40例為對照組。其中對照組中包含男女患兒各為14例、26例，年齡0.5～12歲，平均(3.2±0.8)歲，所有患兒均為F3抗體陰性；觀察組所選40例患兒均為F3抗體陽性，男女患兒各為16例、24例，年齡0.6～11歲，平均(3.6±0.7)歲。兩組患兒一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

兩組患兒均開展骨髓細胞形態學聯合細胞化學染色檢測。骨髓細胞是通過骨髓穿刺的方法獲得，采用淋巴分層液分離細胞制作血細胞涂片，并借助于甩片機甩片。應用常規的瑞氏染色法進行檢測，具體方法為：(1)嚴格參照骨髓細胞形態學檢查質量控制要求，選用經驗豐富的檢驗人員開展顯微鏡檢，開展染色過程中由陽性、陰性質控涂片作為對照，原始細胞在油鏡下進行觀察，所得結果要結合胞質中的顏色與顆粒來進行劃分；(2)糖原(PAS)染色，應用乙醇將新鮮干燥的涂片進行10min固定之后水洗處理，待干之后應用過碘酸液水洗20min，待干之后應用雪夫液染色30min，之后采用亞硫酸液進行沖洗，再應用水沖洗待干，復染水洗待干之后實施鏡檢[3]；(3)堿性磷酸酶(NAP)染色，采用濃度為10%的甲醛甲醇固定液處理30秒之后進行水洗，待干之后將涂片浸入到基質孵育液當中，水洗待干之后實施鏡檢；(4)過氧化物酶(POX)染色，采用戊二醛-丙酮進行固定，水沖之后加入反應液，室溫下放置10min，水洗之后再實施染色，并在水洗干燥之后實施鏡檢；(5)單克隆抗體與神經母細胞瘤細胞反應法，借助于單克隆F3熒光標記對羊抗屬免疫球蛋白實施免疫熒光染色處理[4]。

1.3 觀察指標

細胞化學染色的陽性判定標準為：(1)PAS染色，主要判定標準為油鏡下觀察200個原始細胞胞質中的顏色與顆粒數，若顆粒表現為紫紅色塊狀或者是紅色粗大顆粒則為強陽性；若顆粒染色較深表現為紫紅色則為陽性；若顆粒表現為彌散性淺粉色則為弱陽性；若是沒有顆粒則為陰性[5]；(2)NAS染色，若是沒有顆粒則為陰性，若是稍有顆粒則為弱陽性，若是存在略粗密集的顆粒則為陽性，若是存在粗大顆粒且布滿整個胞質當中則為強陽性；(3)POX染色，若是沒有顆粒則為陰性，若是存在比較小、分布稀疏的顆粒則為弱陽性；若是存在藍黑色或者是藍色顆粒則為陽性[6]。

骨髓細胞形態學檢測時，將200個細胞形態計數換算成為百分率，計算瘤細胞陽性所占比例，其中細胞表現為菊花團樣、典型成團細胞、砌墻樣排列、條索狀纖維絲樣物質都是按陽性計數。

1.4 統計學方法

采用SPSS21.0處理相關數據，計數資料實施χ2檢驗，計量資料實施t檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

比較兩組骨髓細胞形態學及細胞化學染色檢測陽性率：觀察組骨髓細胞形態學及細胞化學染色檢測陽性率明顯高于對照組(P<0.05)，差異有統計學意義；能夠在顯微鏡下看到紫紅色條索狀纖維樣物質及瘤細胞為呈菊花團排列。見表1。

表1 兩組骨髓細胞形態學、細胞化學染色檢驗陽性率比較[n(%)]

3 討論

在神經母細胞瘤的篩查當中，最為準確有效的檢驗方法就是單克隆F3抗體，其不光檢測結果準確，還具有很高的特異度與靈敏度，除了單克隆F3抗體檢測之外，骨髓細胞形態學聯合細胞化學染色檢測也是神經母細胞瘤檢測中常用的檢測方法。其中骨髓細胞形態學檢測是一種非常重要檢查方法，神經母細胞瘤細胞形態學有別于其他瘤細胞的一個典型特點就是其瘤細胞表現為菊花式、成團聚集排列，在為其開展細胞形態學檢查過程中，能夠看到瘤細胞間存在嗜酸性粉紅色纖維絲狀物，其原粒細胞及淋巴細胞都沒有這一特征，并且神經母細胞瘤還存在伴隨有粒系、紅、巨三系不受抑制的特點，在神經母細胞團周圍以及散在神經母細胞間能夠看到紫紅色粗細不等的條索樣纖維物質，該形態特征是區分神經母細胞瘤與急性粒細胞白血癥、急性淋巴細胞白血病的重要依據，臨床上一旦發現患者存在疑似神經母細胞瘤癥狀，應將骨髓涂片細胞學檢查作為常規檢查項目[7]。在細胞化學染色檢查中，NAP染色能夠對粒細胞當中的NPA活性予以反應，一些腫瘤患者的NAP增高可能與機體的炎癥反應有關，該種染色方法在神經母細胞瘤的篩查當中并不具備特異性；POX染色主要是對細胞當中的過氧化物酶活性予以反應，這主要是血細胞當中所包含的過氧化物酶，作為粒細胞當中含量最多的一種蛋白質本文中兩組檢測結果均為陰性，這也可以看出所有瘤細胞當中都沒有包含此酶，那么在實際應用中，就需要保證檢驗人員具備豐富的經驗，對檢測結果予以準確計數；PAS主要是對細胞當中的黏蛋白、黏多糖、糖原含量予以準確反映，結合胞質當中糖原含量及種類的不同，表現為粗細不等的塊狀物質、紅色顆粒或者是表現為均勻紅色，本文中觀察組中出現1例弱陽性，可能是因為藥物、發熱或者是機體感染的影響。總的來說，本文中所提及幾種化學染色方法，其靈敏度及特異性最高的為POX，最低的為NAP，臨床上可以將化學染色作為骨髓細胞形態學檢測的輔助診斷方法，以便于進一步提升診斷準確率[8]。

綜上所述，本文研究結果顯示觀察組骨髓細胞形態學及細胞化學染色檢測陽性率明顯高于對照組(P<0.05)差異有統計學意義；能夠在顯微鏡下看到紫紅色條索狀纖維樣物質及瘤細胞為呈菊花團排列。由此可見，骨髓細胞形態學聯合細胞化學染色檢測應用于神經母細胞瘤的診斷當中，具有較高的診斷準確率，其中一個非常重要的鑒別方法就是在形態學中看到紫紅色條索狀纖維樣物質及瘤細胞為呈菊花團排列。