金關片對小鼠高尿酸血癥的藥效作用研究

史琳莉 楊芳炬 鄭焱江 梁 楠 植茂輝

［1.華潤三九（雅安）藥業有限公司，四川 雅安 625000；2.四川大學，四川 成都 610042；3.成都醫學院，四川 成都 610083］

金關片是由雷公藤、續斷、山藥、細辛、附子（制）、茯苓、桑枝、桂枝、鹿角霜、秦艽、丹參、枸杞子、牛膝、雞血藤、黃精、淫羊藿、薏苡仁、黃芪共18味中藥經加工制成的片劑，具有補益肝腎、祛寒止痛、活血通絡的功效，增強腎上腺皮質功能，調整免疫等作用［1］。臨床上主要用于治療類風濕性關節炎、強直性脊柱炎，對痛風所致的關節疼痛、腫脹等癥狀有顯著改善效果［2］。本實驗從動物實驗角度，通過飼喂小鼠酵母膏建立高尿酸血癥模型［3］，觀察金關片對該模型的血清中尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）的含量影響，對金關片治療高尿酸血癥作用進行藥效學評價，為金關片的臨床運用提供理論基礎和實驗依據。

1 材料

1.1 實驗動物

健康昆明種小鼠，SPF級，雄性，體質量20～22 g，四川大學實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（川）2009-09。

1.2 藥物與試劑

金關片［華潤三九（雅安）藥業有限公司，國藥準字Z20054153，規格：0.3 g/片］用時研磨成極細粉末溶于0.5%的CMC-Na溶液制成混懸液備用，高、中、低劑量的質量濃度分別為120、60、30 mg/mL。別嘌醇片（江蘇方強制藥廠，國藥準字H20033683）用0.5%CMC-Na配制成質量濃度2 mg/mL藥液。酵母粉（成都云鴻科技發展有限公司，進口分裝，500 g/瓶）用0.5%CMCNa配制成質量濃度1.5 g/mL溶液。尿酸試劑盒（南京建成生物工程研究所提供）。尿素氮試劑盒（脲酶法）（南京建成生物工程研究所）。肌酐試劑盒（除蛋白法）（南京建成生物工程研究所提供）。TG16G臺式高速離心機（湖南凱達科學儀器科學有限公司）。

1.3 統計學處理

應用SPSS20.0統計軟件。計量資料以（）表示，采用t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 方法與結果

2.1 造模給藥同時進行組實驗

2.1.1 分組與造模［3］小鼠隨機分為6組，每組10只，分別為：陰性對照組（5%CMC-Na溶液20 mL/kg）、模型組（酵母膏20 mL/kg）、陽性藥對照組（酵母膏+別嘌醇40 mg/kg，相當于1倍臨床等效劑量）、金關片高劑量組（酵母膏+金關片2.4 g/kg，相當于4倍臨床等效劑量）、中劑量組（酵母膏+金關片1.2 g/kg，相當于2倍臨床等效劑量）、低劑量組（酵母膏+金關片0.6 g/kg，相當于1倍臨床等效劑量）。除陰性對照組外，各組造模方法參照文獻［3］執行。各組每天給予酵母膏30 g/kg灌胃，每天1次，連續7 d，第3日時開始灌胃相應藥液，每日1次，連續4 d。

2.1.2 標本采集與檢測 于第7日末次給藥30 min后，各組動物經眼眶后靜脈叢取血，按照試劑盒說明書測定小鼠血清中UA、BUN、Scr的含量。

2.1.3 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較 見表1。造模后，與陰性對照組比較，模型組小鼠的UA、BUN、Scr含量均顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，各給藥組均顯著降低BUN水平（P<0.05或P<0.01），同時，除金關片低劑量組外，高、中劑量組及陽性藥對照組均顯著降低UA、Scr水平（P<0.05或P<0.01）；與陽性藥對照組比較，金關片各劑量組降低BUN水平無明顯差異，高劑量組降低UA水平亦無明顯差異，但高劑量組降低Scr水平較陽性藥對照組顯著（P<0.05）；金關片各劑量組間比較，高劑量組降低UA水平較中、低劑量組顯著（P<0.05），高、中劑量組降低Scr水平較低劑量組顯著（P<0.05），其余各組指標無明顯差異（P>0.05）。說明金關片對高尿酸血癥形成過程中BUN水平升高有明顯的降低作用，并對高尿酸模型小鼠誘發的Scr、UA升高也有明顯降低作用，尤其是金關片高、中劑量效果更為顯著。

表1 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較（±s）

表1 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較（±s）

與陰性對照組比較，◆◆P<0.01；與模型組比較，?P<0.05，??P<0.01；與陽性給藥組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與金關片高劑量組比較，#P<0.05；與金關片低劑量組比較，●P<0.05。下同

組別陰性對照組模型組陽性藥對照組金關片高劑量組金關片中劑量組金關片低劑量組n 10 10 10 10 10 10 UA（μmol/L）168.17±20.93 230.55±34.90◆◆158.26±7.09**175.25±23.85**202.16±29.03*▲▲#214.20±21.26▲▲#BUN（mg/L）189.49±26.08 272.09±52.16◆◆209.82±28.02**204.34±41.74**219.93±41.74**232.26±52.14*Scr（μmol/L）208.54±30.58 276.09±60.86◆◆232.03±21.82**198.80±29.34**▲224.58±31.70**260.68±26.22#

2.2 造模后給藥組實驗

2.2.1 分組與造模［3］小鼠隨機分為6組，每組10只，分別為：陰性對照組（0.5%的CMC-Na溶液20 mL/k）、模型組（酵母膏20 mL/kg）、陽性對照藥組（酵母膏＋別嘌醇40 mg/kg，相當于1倍臨床等效劑量）、金關片高劑量組（酵母膏＋金關片2.4 g/kg、相當于4倍臨床等效用量）、中劑量組（酵母膏＋金關片1.2 g/kg，相當于2倍臨床等效用量）、低劑量組（酵母膏＋金關片0.6 g/kg，相當于1倍臨床等效用量）。除陰性對照組外，各組造模方法參照文獻［3］執行。各組每天給予酵母膏30 g/kg灌胃，每天1次，連續7 d。造模結束后再灌胃相應藥液，每日1次，連續3 d。

2.2.2 標本采集與檢測 末次給藥30 min后，各組動物眼眶后靜脈叢取血，按照試劑盒說明書測定小鼠血清中UA、BUN、Scr的含量。

2.2.3 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較 見表2。表2數據可見，與陰性對照比較，模型組UA、BUN水平顯著升高（P<0.01），但Scr水平無明顯差異（P>0.05）；與模型組比較，金關片高劑量組顯著降低UA、BUN水平（P<0.05），陽性藥對照組亦顯著降低UA、BUN（P<0.01）；金關片各劑量組間比較，高劑量組降低UA作用較低劑量組顯著（P<0.05），其余各指標無明顯差異（P>0.05）。說明金關片在小鼠高尿酸模型形成后給藥，也具有降低血清UA水平作用，且高劑量組對高尿酸模型所致的BUN升高也具明顯降低作用。

表2 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較（±s）

表2 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較（±s）

組別陰性對照組模型組陽性藥對照組金關片高劑量組金關片中劑量組金關片低劑量組n 10 10 10 10 10 10 UA（μmol/L）168.17±20.93 202.04±21.98◆◆165.89±9.56**177.38±15.15*192.25±16.69 200.04±35.30#BUN（mg/L）189.49±26.08 248.76±29.83◆◆206.21±27.25**215.26±45.23*223.31±40.52 232.28±39.53 Scr（μmol/L）208.54±30.58 222.18±34.71 206.82±57.32 196.51±22.92 204.53±29.48 219.43±38.01

2.3 造模同時給藥實驗與造模后給藥實驗結果比較見表3。兩組試驗對尿酸、尿素氮、肌酐水平的影響比較結果表明：兩組均有降低模型小鼠血清UA、BUN、Scr含量作用，但造模同時給藥試驗組中金關片各劑量降低UA、BUN水平均較造模后再給藥組顯著（P<0.05或P<0.01）；造模同時給藥試驗組中，金關片高、中劑量降低UA水平均比造模后再給藥組顯著（P<0.01），而兩試驗組低劑量降低Scr水平無明顯差異。說明金關片在模型形成過程中給藥較模型形成后給藥療效更為顯著，提示金關片在高尿酸形成過程中給藥具有良好對抗UA升高作用。

表3 各組造模時與造模后給藥實驗比較（±s）

表3 各組造模時與造模后給藥實驗比較（±s）

與高劑量組比較，?P<0.05，??P<0.01；中劑量組間比較，▲▲P<0.01；低劑量組間比較，#P<0.05

組別金關片高劑量組（n=10）金關片中劑量組（n=10）金關片低劑量組（n=10）Scr（μmol/L）77.29±37.64 25.67±16.22**77.29±35.70 17.65±9.35▲▲15.41±34.60 2.75±13.04時間造模時造模后造模時造模后造模時造模后UA（μmol/L）54.76±11.60 24.67±15.45**27.85±7.30 9.80±9.16▲▲15.81±14.56 2.01±17.51#BUN（mg/L）67.72±40.90 33.50±20.35*52.17±21.69 25.45±18.96▲▲39.84±24.14 16.47±17.69#

3 討 論

人體在正常嘌呤飲食狀態下，非同日兩次空腹血UA水平無論男性還是女性高于420 μmol/L，即稱為高尿酸血癥［4］。長期的高尿酸血癥，在體內可形成尿酸鹽沉積。尿酸鹽沉積在不同部位即產生不同的臨床表現，當尿酸鹽沉積于關節處，引起關節炎癥表現時，即稱為痛風［5］，臨床表現為高尿酸血癥、反復發作的痛風性關節炎、痛風石沉積及痛風性腎病等［6］。隨著生活水平的提高和飲食結構的改變，高尿酸血癥和痛風的發病率呈逐年上升趨勢。痛風和高尿酸血癥現已成為僅次于糖尿病的第二大代謝性疾病，嚴重危害人們的身心健康［7］。流行病學調查顯示，近20年來美國痛風患病率達3.9%，而歐洲的痛風患病率為3.2%［8］。在我國痛風發病率逐年上升，目前已超過5 000萬人，部分沿海城市人群的痛風患病率達1.14%，而高尿酸血癥的患病率高達13.19%［9］。高尿酸血癥患者中約10%左右會出現臨床痛風癥，而多數人雖有持續血UA水平增高但無痛風發作，稱之為特發性高尿酸血癥。但需要注意的是，UA水平越高、高UA持續的時間越長，發生痛風的可能性就越大，可以說高尿酸血癥是痛風發生發展最重要的生化基礎［10］。近年來越來越多臨床研究表明，高尿酸血癥與高血壓、腎臟疾病、糖尿病、心血管疾病的發生、發展密切相關［11］。因此，早期發現尿酸升高、高尿酸血癥，降低尿酸水平是預防與治療高尿酸血癥、痛風，以及高血壓、腎臟疾病、糖尿病、心血管等相關疾病的關鍵。

現代藥理研究表明，金關片處方中多味藥物具有降低UA的作用。其中山藥的甲醇提取物可顯著抑制黃嘌呤氧化酶，從而抑制UA的生成［12］；附子可顯著降低血清中Scr、UA水平，降低腎UA，由此起到較好的腎臟保護作用［13］；秦艽能降低高尿酸血癥模型大鼠的UA值，增加大鼠24 h尿量和UA排泄量［14］；楊彩鳳等通過研究中藥治療高尿酸血癥組方規律發現，牛膝、薏苡仁組合是治療高尿酸血癥的常見組合及常見核心用藥［15］，這個組合也使用在金關片的處方中。金關片治療高尿酸血癥可能與其處方中多種成分協同發揮降低UA生成，增加UA排泄等作用有關。

本試驗通過大量酵母膏（20 mL/kg）灌胃建立高尿酸血癥模型，1周后，小鼠血清中UA水平顯著升高，Scr、BUN水平也顯著升高。給予金關片后，UA、BUN、Scr水平均顯著降低，且在高尿酸血癥形成過程中給藥較病癥形成后給藥療效更為顯著，提示金關片對臨床高尿酸血癥患者具有良好的治療并控制癥狀發展的應用價值。