血清miR-34a表達在結腸癌診治中的臨床意義

楊愈剛 姚開源 薛嚇娟 鄭枝忠 郭銀樅

(福建醫科大學附屬漳州市醫院肛腸外科,漳州 福建 363000)

結腸癌是中國最常見的惡性腫瘤之一,占2013年所有腫瘤死亡人數的6%～8%[1-2]。結直腸癌的早期診斷可顯著提高患者的生存率，降低該惡性腫瘤患者的死亡率，但仍有不足40%的患者存在局限性[3-5]。microRNA(miRNA)是一類小的非編碼RNA，通過轉錄后水平調控基因表達[6-7]。 隨著miRNA和癌癥之間的聯系在2002年首次被報道[8],此后越來越多的證據表明異常表達的miRNA可以影響癌癥的發展，并發揮抑癌或致癌基因的作用。2008年P.S.Mitchell等報道[9]，血清或血清中miRNA可作為生物標志物預測患者預后。miR-34a在多種腫瘤中發揮抑瘤基因的功能，如食管鱗狀癌、肝細胞癌、結腸癌和神經母細胞瘤[10-13]。但miR-34a在結腸癌中的臨床意義尚不清楚。本研究旨在探討miR-34a在結腸癌血清中的表達情況和診斷價值。

1 材料與方法

1.1患者及采血情況 本研究共納入2010年1月至2013年5月在我院就診行手術治療的結腸癌患者126例，患者信息見表1。并招募了同期在我院健康體檢的66名志愿者作為健康對照組。結腸癌組中，男76例，女50例，年齡25～74(54.7±13.3)歲,術前均未接受化療或放療；健康對照組中，男39例，女27例，年齡21～73(51.2±12.9)歲。兩組年齡和性別等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究得到了福建醫科大學附屬漳州市醫院倫理委員會的批準。每位受試者簽署了書面知情同意書，按照相應倫理和法律標準對所有標本進行匿名處理。樣本均在清晨從所有參與者靜脈血中抽取5 mL全血。所有血液樣本在12 000 rpm離心20 min在12000 rpm離心10 min,在4°C收集上層清液，隨后儲存在-80°C待進一步分析。

表1 結腸癌患者血清miR-34a表達與臨床指標之間的相關性

1.2RNA 抽提和實時定量聚合酶鏈反應 RNA 抽提和實時定量聚合酶鏈反應(Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction，qRT-PCR)依照參考文獻[16]，用2-ΔΔCt計算miR-34a在血清中的相對表達水平，cer-miR-39作為內參基因。

1.3統計學方法 采用SPSS 20.0軟件進行數據統計分析，計量資料以(Mean±s)表示，行t檢驗，計數資料行χ2檢驗，采用Kaplan-Meier曲線法進行患者生存率的單因素分析，組間的總體生存率和無瘤生存率的比較采用Logrank檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1miR-34a在血清中的表達水平 miR-34a在結腸癌患者術前血清水平(0.428±0.027)明顯比健康對照組(0.774±0.039)表達低(P<0.001,圖1A)。此外,無遠處轉移的結腸癌患者術前血清miR-34a表達水平(0.494±0.042)明顯高于有遠處轉移的結腸癌患者術前血清(0.375±0.035)(P=0.031,圖1B)。無淋巴結轉移的結腸癌患者術前血清miR-34a表達水平(0.521 ± 0.041)明顯高于有遠處轉移的結腸癌患者術前血清(0.354±0.034) (P=0.002,圖1C)。

注：A.在結腸癌患者中，miR-34a表達顯著低于對照組；B.miR-34a在遠處轉移的結腸癌患者中的表達明顯低于未轉移的結腸癌患者；C.miR-34a在有淋巴結轉移的結腸癌患者中的表達明顯低于無轉移的結腸癌患者。圖1 miR-34a在血清中的表達水平

2.2miR-34a在結腸癌患者術前和術后血清中表達水平 術后血清樣本miR-34a的相對表達水平(0.676 ± 0.028)顯著高于術前血清樣本(0.428 ±0.027)，差異有統計學意義(P<0.01)。

2.3術前血清miR-34a表達與結腸癌臨床病理指標的關系 將126例結腸癌患者術前血清miR-34a表達的中位數分為高/低組。術前血清miR-34a的低表達與結腸癌的遠處轉移(P=0.032)、淋巴結轉移(P<0.001)、TNM分期(P=0.004)密切相關。而術前血清miR-34a的表達與年齡、性別、術前癌胚抗原(CEA)水平、組織學分級、腫瘤大小等指標無顯著差異(P>0.05)。

2.4術前血清miR-34a表達與結腸癌患者預后關系Kaplan-Meier生存分析顯示，術前血清miR-34a低表達組的患者總體生存時間和無瘤生存時間顯著較術前miR-34a高表達組的患者總體生存時間和無瘤生存時間短(總體生存：P=0.033，圖2A；無瘤生存：P= 0.004，圖2B)。

注：A.126例結腸癌患者總生存率Kaplan-Meier曲線；B.126例結腸癌患者無瘤生存率Kaplan-Meier曲線。圖2 術前血清miR-34a表達與結腸癌患者預后關系

3 討 論

本研究首先探討了血清miR-34a作為結腸癌患者無創生物標志物的潛在臨床應用價值。首先，結腸癌患者術前血清miR-34a水平明顯低于健康對照組。其次，有淋巴結轉移或遠處轉移的結腸癌患者術前miR-34a水平低于無淋巴結轉移或無遠處轉移患者。第三， 結腸癌患者術前血清miR-34a低表達與臨床惡性指標密切相關。最后，術前低miR-34a表達的結腸癌患者OS和DFS較差。以上研究數據表明，結腸癌患者術前血清中低表達的miR-34a預后不良。

研究[10-12]表明，miR-34a廣泛表達于各種組織和器官，在多種惡性腫瘤中下調表達。miR-34a已被證實是一種可以抑制許多關鍵癌基因的腫瘤抑制因子[13]。以往研究證實miR-34a可通過下調HMGB1基因表達抑制結直腸癌細胞的增殖、遷移和侵襲[14-15]。在本研究中，我們的結果顯示miR-34a在結腸癌患者中高度下調并與預后不良相關，這些結果與上述的報道一致。本研究首次報道了結腸癌患者血清中低表達的miR-34a可作為預測結腸癌預后的血清標志物和新的潛在治療靶點。然而，本研究仍然存在一些局限性，例如：樣本量相對較小和單中心回顧性設計。因此，需要更大規模、隨訪時間更長的前瞻性研究來驗證本研究結果的準確性。此外，miR-34a在結腸直腸癌中的潛在分子機制仍然尚未完全明確。還需要進一步的實驗來闡明miR-34a在結直腸癌中進展的分子學機制。

本研究首次證實了結腸癌患者中術前血清miR-34a的表達水平低于正常對照組,且血清中低表達的miR-34a與結腸癌患者的不良預后密切相關,暗示miR-34a可能在結腸癌進展中扮演關鍵的角色。