VEGF及sFIT-1血管相關(guān)因子與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)性研究①

李愛(ài)香

(河南省人口和計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究院，河南 鄭州 450000)

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是指連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)，目前國(guó)內(nèi)外研究表明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與胎盤組織中血管增生平衡、內(nèi)皮細(xì)胞增殖和胎兒血液供應(yīng)不足有密切的關(guān)系[1]，而促進(jìn)血管形成的增生調(diào)節(jié)因子最重要的因素就是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)，它是促進(jìn)血管新生的最重要角色，它主要通過(guò)其受體來(lái)促進(jìn)血管的形成[2]，VEGF受體的可溶性形式sFIT-1具有明顯的抗血管生成作用，而目前VEGF、sFIT-1在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中的如何發(fā)揮作用尚不清楚[3]。本研究通過(guò)比較復(fù)發(fā)性流產(chǎn)婦女及對(duì)照組的血清及絨毛組織中VEGF和sFIT-1水平情況，探討其與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018-01～2019-01就診于計(jì)劃生育門診的孕期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者100例為研究組，年齡22～35歲，平均(27.5±2.6)歲，孕周5～16周，平均(9.5±3.5)周，排除標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)遺傳、感染、免疫等其他因素；流產(chǎn)次數(shù)大于2次者。對(duì)照組為正常健康流產(chǎn)婦女100例，年齡24～34歲，平均(28.5±2.9)歲，孕周4～15周，平均(8.5±2.5)周，所有對(duì)照組及研究組是至少有一次妊娠史，且胚胎發(fā)育正常的妊娠、分娩的婦女，其均無(wú)不良妊娠史，兩組孕婦的年齡、孕期分布均衡。

1.2 研究方法

1.2.1 主要試劑：VEGF ELISA試劑盒(Thermo Fisher #BMS268-3TEN)、sFIT-1 ELISA試劑盒(Thermo Fisher #BMS227-6TEN)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法：抽取研究組及對(duì)照組在清晨空腹時(shí)的非抗凝靜脈血2mL，然后室溫靜置15min，1000rpm離心，將上層血清移至1.5mL EP管中，放置于-70℃的溫度中保存，采用酶聯(lián)免疫法嚴(yán)格按照ELISA試劑盒中的操作部說(shuō)明書檢測(cè)所有血清中的VEGF和sFIT-1的濃度水平。流產(chǎn)手術(shù)時(shí)采集所有研究對(duì)象的新鮮絨毛組織，使用無(wú)菌的生理鹽水漂洗去除絨毛組織中所有的血細(xì)胞后，放在4%的甲醛液中24～48h至脫水狀態(tài)，石臘包埋，切片后烤片脫臘，然后采用免疫組織化學(xué)二步法染色，觀察所有標(biāo)本組織中的VEGF和sFIT-1的的表達(dá)與分布情況。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果測(cè)定

當(dāng)VEGF呈陽(yáng)性時(shí)其表現(xiàn)為黃色、棕色；當(dāng)sFIT-1呈陽(yáng)性時(shí)其表現(xiàn)棕黃色顆粒狀。免疫組織化學(xué)評(píng)分(IHS)=陽(yáng)性細(xì)胞百分比×陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度，當(dāng)在顯微鏡下觀察時(shí)，陽(yáng)性細(xì)胞染色判定標(biāo)準(zhǔn)是：不顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比判定標(biāo)準(zhǔn)是：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞顯色為0分，陽(yáng)性細(xì)胞顯色<25%為1分，25%～50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞顯色>50%為3分。免疫組織化學(xué)評(píng)分(IHS)判定：HIS在0～2分判定為陰性(-)；HIS在3～5分判定為弱陽(yáng)性(+)；HIS在6～8分判定為中度陽(yáng)性()；HIS>9分判定為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象血清中VEGF及sFIT-1的表達(dá)

與對(duì)照組相比，研究組血清中的VEGF及sFIT-1的表達(dá)水平顯著增高，且差異具有一定統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組研究對(duì)象血清中VEGF及sFIT-1的表達(dá)

2.2 兩組研究對(duì)象絨毛組織中的VEGF及sFIT-1的表達(dá)

研究組絨毛組織中的VEGF及sFIT-1的陽(yáng)性表達(dá)比例明顯高于對(duì)照組(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 兩組研究對(duì)象絨毛組織中的VEGF及sFIT-1的表達(dá)(n=100)

2.3 復(fù)發(fā)性流產(chǎn)婦女血清中VEGF及sFIT-1的相關(guān)性

Pearson相關(guān)性分析顯示，孕期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)婦女血清中，與VEGF及sFIT-1的表達(dá)水平具有明顯相關(guān)性(r=0.870、r=0.003，P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 復(fù)發(fā)性流產(chǎn)婦女血清中VEGF及sFIT-1的相關(guān)性

3 討論

復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(RSA)是一種常見(jiàn)的妊娠并發(fā)癥，發(fā)生率為10%～15%的孕婦。據(jù)估計(jì)，大約1%～2%的夫婦經(jīng)歷過(guò)三次或三次以上連續(xù)流產(chǎn)，大約5%的夫婦經(jīng)歷過(guò)兩次流產(chǎn)，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的病因這些因素包括宮因素、染色體異常、內(nèi)分泌功能障礙、血栓性疾病、免疫性疾病和獲得性母體感染[4]。然而，在高達(dá)50%的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中，潛在的致病因素仍不確定。正常妊娠的發(fā)生和維持依賴于母體胎盤細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞之間的多方面關(guān)系和相互作用，這些因素轉(zhuǎn)化為多種有助于囊胚植入的調(diào)節(jié)因子[5]。

新生血管的形成是形成絨毛膜絨毛的關(guān)鍵步驟，胎兒早期的生命依賴于絨毛膜絨毛。任何影響這一重要步驟或影響內(nèi)膜內(nèi)皮活性的因素都可能導(dǎo)致血栓阻塞，如果機(jī)體本身清除血栓的能力降低，則可能導(dǎo)致胎兒早期死亡。妊娠是一種高凝狀態(tài)，細(xì)胞因子、血管生成介質(zhì)、激素以及促凝因子和抗凝因子之間的微妙平衡是在生殖各個(gè)階段起關(guān)鍵作用的主要介質(zhì)[6]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是一種強(qiáng)有力的血管生成因子，被認(rèn)為是內(nèi)皮細(xì)胞增殖的主要調(diào)控因子，其對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、胚胎血管系統(tǒng)乃至胎兒宮內(nèi)循環(huán)的生長(zhǎng)都至關(guān)重要。據(jù)報(bào)道，在自然流產(chǎn)的蛻膜內(nèi)皮細(xì)胞中存在胎盤滋養(yǎng)層VEGF的減少，VEGF是由包括胎盤在內(nèi)的多種細(xì)胞類型產(chǎn)生的一種多功能細(xì)胞因子[7]。VEGF調(diào)節(jié)生理和病理生理血管發(fā)育。多項(xiàng)研究表明，VEGF的生物學(xué)活性受可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-1(sFIT-1)調(diào)控，sFIT-1是VEGF的內(nèi)源性抑制劑，可能在內(nèi)皮功能障礙中發(fā)揮重要作用。過(guò)量循環(huán)的sFIT-1與VEGF具有高親和力。三分之二流產(chǎn)的孕婦被認(rèn)為是由于胎盤缺陷導(dǎo)致的，而胎盤缺陷與母體螺旋動(dòng)脈缺乏生理變化有關(guān)。最近的一些研究表明，血管生成因子VEGF及其溶質(zhì)受體sFIT-1的失調(diào)可能參與了流產(chǎn)的病理生理學(xué)。有趣的是，最近的其他研究表明，高水平的sFIT-1與子癇前期有關(guān)。在妊娠后期，循環(huán)sFlt-1在子癇前期和其他妊娠并發(fā)癥中明顯增加[8]。

本研究通過(guò)比較兩組研究對(duì)象的血清絨毛組織中VEGF、sFIT-1的表達(dá)結(jié)果表明：研究組患者血清中的VEGF、sFIT-1表達(dá)水平大于對(duì)照組，研究組患者絨毛組織中的VEGF、sFIT-1陽(yáng)性比例大于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與相關(guān)的研究結(jié)果相一致。研究組的血清及絨毛組織中sFIT-1、VEGF水平顯著高于對(duì)照組，Pearson相關(guān)性分析顯示，VEGF、sFIT-1在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者血清中的表達(dá)具有顯著相關(guān)性(P<0.05)。在絨毛組織中sFIT-1 對(duì)VEGF的生物活性具有抑制作用。機(jī)體血管促進(jìn)因子與抑制因子間表達(dá)及調(diào)節(jié)的失衡、細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解的失衡，最終致機(jī)體血管生成紊亂，胎盤絨毛血供異常，導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生。綜上所述，在孕期發(fā)生復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與VEGF、sFIT-1呈正相關(guān)的關(guān)系，VEGF、sFIT-1水平升高可能是孕早期胎停孕的原因之一。