動物尿液中克倫特羅殘留酶聯免疫篩選疑似陽性樣品與LCMS檢測結果的比較

江雪強

（深圳市農產品質量安全檢驗檢測中心，廣東深圳 518118）

1 材料與方法

1.1 實驗材料

某品牌克倫特羅檢測試劑盒（附相關檢測說明書）

Waters，Xevo TQ-S三重四級桿串聯超高效液相色譜質譜聯用儀、固相萃取裝置、Oasis? MCX 6cc（150mg）、eppendorf高速冷凍離心機5804R、美國Organomation Associates氮吹儀、酶標儀。

1.2 方法

1.2.1 試劑盒方法。加50μL標準品或樣品液到相應的微孔中，然后各加50μL酶結合物工作液和抗體工作液到微孔中，用蓋板膜蓋好，26℃下避光反應30分鐘；將孔內液體甩干，用洗滌工作液300ml/孔，充分洗滌4～5次，吸水紙拍干；各加50uL顯色劑A 和顯色劑B 微孔中，混勻，在26℃下避光反應15分鐘；加入50μL終止液。最后450nm波長下酶標儀讀取OD值，計算樣品濃度。

表1 尿樣克倫特羅檢測結果

1.2.2 LC-MS法。取5mL尿液至于50mL離心管中，加入克倫特羅D9內標物，用5mol/LNaOH調節PH值至9～10，加提取液（乙酸乙酯：異丙醇=6：4）10mL，收集上清液。重復提取一次，合并上清液。氮吹后過殘留物用0.2%甲酸水溶解，經過MCX（活化后）柱子后，氮吹干，殘留物用0.2%甲酸水溶解，經濾膜過濾后用LCMS進行檢測。

2 檢測結果

2.1 兩種方法檢測結果詳見表1

陽性結果判斷表示為“+”，陰性結果判斷表示為“-”

2.2 檢測結果譜圖

樣品中克倫特羅標樣譜圖

3 分析與討論

實驗的48份樣本均為經ELISA篩選后判定為疑似陽性動物尿液樣品，再進行LC-MS方法處理后進行檢測的。ELISA為半定量檢測與LC-MS定量檢測結果存在一定的差異性，但篩選定性判斷結果與LC-MS結果符合率為96%，因此在使用ELISA篩選出尿液樣品出現疑似陽性結果時，檢測結果是可信任的。

ELISA檢測試劑盒靈敏度可達0.3ng/mL甚至更高，檢測條件要求較低，費用少，前處理操作簡單，實驗時間短（一般為1.5h），且特異性強，與檢測步驟繁雜、檢測時間長的LC-MS定量檢測結果的符合率高達96%，能夠在較短的時間內為監督執法提供判斷依據。

樣品中克倫特羅內標物譜圖

4 結束語

ELISA檢測結果與LC-MS檢測結果符合度高，成本低，操作簡便，效果明顯，能夠為執法判斷提供依據，可作為基層瘦肉精篩查的選擇。