動物尿液中克倫特羅殘留酶聯(lián)免疫篩選疑似陽性樣品與LCMS檢測結(jié)果的比較

江雪強(qiáng)

（深圳市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測中心，廣東深圳 518118）

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

某品牌克倫特羅檢測試劑盒（附相關(guān)檢測說明書）

Waters，Xevo TQ-S三重四級桿串聯(lián)超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、固相萃取裝置、Oasis? MCX 6cc（150mg）、eppendorf高速冷凍離心機(jī)5804R、美國Organomation Associates氮吹儀、酶標(biāo)儀。

1.2 方法

1.2.1 試劑盒方法。加50μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣品液到相應(yīng)的微孔中，然后各加50μL酶結(jié)合物工作液和抗體工作液到微孔中，用蓋板膜蓋好，26℃下避光反應(yīng)30分鐘；將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300ml/孔，充分洗滌4～5次，吸水紙拍干；各加50uL顯色劑A 和顯色劑B 微孔中，混勻，在26℃下避光反應(yīng)15分鐘；加入50μL終止液。最后450nm波長下酶標(biāo)儀讀取OD值，計(jì)算樣品濃度。

表1 尿樣克倫特羅檢測結(jié)果

1.2.2 LC-MS法。取5mL尿液至于50mL離心管中，加入克倫特羅D9內(nèi)標(biāo)物，用5mol/LNaOH調(diào)節(jié)PH值至9～10，加提取液（乙酸乙酯：異丙醇=6：4）10mL，收集上清液。重復(fù)提取一次，合并上清液。氮吹后過殘留物用0.2%甲酸水溶解，經(jīng)過MCX（活化后）柱子后，氮吹干，殘留物用0.2%甲酸水溶解，經(jīng)濾膜過濾后用LCMS進(jìn)行檢測。

2 檢測結(jié)果

2.1 兩種方法檢測結(jié)果詳見表1

陽性結(jié)果判斷表示為“+”，陰性結(jié)果判斷表示為“-”

2.2 檢測結(jié)果譜圖

樣品中克倫特羅標(biāo)樣譜圖

3 分析與討論

實(shí)驗(yàn)的48份樣本均為經(jīng)ELISA篩選后判定為疑似陽性動物尿液樣品，再進(jìn)行LC-MS方法處理后進(jìn)行檢測的。ELISA為半定量檢測與LC-MS定量檢測結(jié)果存在一定的差異性，但篩選定性判斷結(jié)果與LC-MS結(jié)果符合率為96%，因此在使用ELISA篩選出尿液樣品出現(xiàn)疑似陽性結(jié)果時(shí)，檢測結(jié)果是可信任的。

ELISA檢測試劑盒靈敏度可達(dá)0.3ng/mL甚至更高，檢測條件要求較低，費(fèi)用少，前處理操作簡單，實(shí)驗(yàn)時(shí)間短（一般為1.5h），且特異性強(qiáng)，與檢測步驟繁雜、檢測時(shí)間長的LC-MS定量檢測結(jié)果的符合率高達(dá)96%，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)為監(jiān)督執(zhí)法提供判斷依據(jù)。

樣品中克倫特羅內(nèi)標(biāo)物譜圖

4 結(jié)束語

ELISA檢測結(jié)果與LC-MS檢測結(jié)果符合度高，成本低，操作簡便，效果明顯，能夠?yàn)閳?zhí)法判斷提供依據(jù)，可作為基層瘦肉精篩查的選擇。