HPLC法測定腦力寶丸中遠志皂苷元含量

高 晗 李 哲

神威藥業集團有限公司，河北 石家莊 051430

腦力寶丸由遠志、地黃、五味子、菟絲子、地骨皮、茯苓、石菖蒲、川芎、維生素B1、維生素E組成，載于《部頒標準中藥成方制劑第十四冊》，為中西復方制劑，具有滋補肝腎、養心安神之功效[1]，主要用于肝腎陰虛所致的健忘失眠、煩躁夢多、潮熱盜汗、神疲體倦等證。遠志為君藥之一，具有寧心安神之功效[2]。其主要活性成分——遠志皂苷元，為遠志總皂苷堿水解的產物。本實驗以遠志皂苷元為指標成分，建立腦力寶丸HPLC含量測定質量控制方法。

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀(美國安捷倫科技公司),檢測器G7115A 進樣器G7129C；METTLER-ALC-210.4電子分析天平(上海梅特勒托利多儀器有限公司)。

1.2 試藥 腦力寶丸，神威藥業集團有限公司(批號：1101231、1101232、1101241)；遠志皂苷元對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111572-200702，)；甲醇，色譜純(Thermo Fisher)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 檢測波長的選擇 取遠志皂苷元對照品溶液，在200～400 nm范圍內掃描，結果在210 nm處有最大吸收，故選擇210 nm作為檢測波長。

2.2 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：ACCHROM xAqua -C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱；流動相：甲醇-0.05% H3PO4(70：30)；檢測波長：210 nm；流速1.0 mL·min-1；柱溫35 ℃，進樣量10 μL；理論板數按遠志皂苷元峰計算應不低于3500。

A 遠志皂苷元對照品

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取遠志皂苷元對照品(經減壓干燥)7.5 mg，至25 mL量瓶中，加流動相溶解，稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL含0.3 mg的對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液4 mL于10 mL量瓶中，流動相將其稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備 取腦力寶丸30丸，除掉包衣，研細，取約2.5 g，精密稱定，加入50 mL甲醇，水浴加熱回流30 min，濾過，甲醇洗滌濾渣3次，每次10 mL，合并濾液與洗液，減壓蒸干，殘渣加入10% 鹽酸溶液50 mL，采用水浴加熱回流1 h，放冷，濾過，濾渣用水洗滌至中性，連同濾紙置錐形瓶中，加入甲醇40 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液放置50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.5 專屬性 制作缺少遠志的陰性樣品(取除遠志外其余藥材，按法定工藝進行制備)，采用供試品溶液制備方法制備成陰性對照溶液，并進行含量測定，結果顯示，遠志陰性對照溶液在與遠志皂苷元對照品相同保留時間處未見明顯色譜峰，證明該方法專屬性良好。如圖1所示。

2.6 線性關系考察 精密吸取遠志皂苷元對照品儲備液各2、3、4、6、10 mL于10 mL量瓶中，加流動相稀釋得濃度分別為59.68、89.52、119.36、179.04、298.40 μg·mL-1的對照品溶液，分別以2.2所示色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標，相應的對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y=8.629x-45.925(r=0.9999)，結果表明，遠志皂苷元在59.68～298.4 μg ·mL-1范圍內線性關系良好。

2.7 精密度試驗 取同一對照品溶液，以2.2所示色譜條件，連續進樣6次，記錄峰面積，結果RSD=0.80%。

2.8 重現性試驗 取同一批樣品，6份，以2.4所示方法分別制備供試品溶液，以2.2所示色譜條件測定，測得遠志皂苷元平均含量為每丸0.47 mg，RSD= 1.41%。

2.9 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h進樣，以2.2所示色譜條件測定遠志皂苷元含量，結果RSD= 0.85%，說明供試品溶液在12h內可基本穩定。

2.10 回收率試驗 取同一批已知含量的樣品(遠志皂苷元含量：每丸0.47 mg)6份，各1.25 g，采用加樣回收法，精密加入一定量遠志皂苷元對照品，照2.4所示方法和2.2所示色譜條件進行含量測定，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果統計

2.11 樣品測定 按上述HPLC含量測定法，對3批腦力寶丸(批號：1101231、1101232、1101241)進行測定，并計算遠志皂苷元含量，結果分別為每丸0.47 mg、0.48 mg、0.48 mg，RSD=1.21 %。

3 討論

腦力寶丸標準中遠志皂苷元含量測定方法采用薄層掃描法，得出的結果精密度較低、誤差較大，筆者通過建立遠志皂苷元HPLC含量測定方法，提高了測定結果的準確度，減小了測量誤差。實驗中分別考察了甲醇-水、乙腈-水-冰醋酸(40∶60∶0.2)[3]、甲醇-0.05%磷酸[4-5]3種不同的流動相體系，結果發現甲醇-0.05%磷酸(70∶30)作為流動相，遠志皂苷元峰的峰形對稱，達到分離度的要求，該方法操作簡便、專屬性強，可為腦力寶丸中遠志皂苷元的含量測定方法。