手足口病患者手足口病腸道病毒核酸及血清學檢測診斷價值評價

劉 瑋，袁慧敏

（合肥市疾病預防控制中心微生物檢驗科，安徽 合肥 230061）

手足口病是因為腸道病毒所導致的一種傳染疾病，兒童則是該疾病的主要發病人群，特別是年齡小于3歲的兒童[1]。手足口病患兒的臨床表現主要為發熱、四肢末端以及口腔的皰疹、斑丘疹，如果患兒病情危重則可能出現循環障礙、腦脊髓炎、腦炎以及腦膜炎等。手足口病感染的病原體主要為柯薩奇病毒A組16型（CA16）以及腸道病毒71型（EV71）[2]。本研究主要分析評價了手足口病患者手足口病腸道病毒核酸及血清學檢測診斷價值，希望能為手足口病的預防和診治提供指導。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年2月～2019年10月收治的手足口病患兒1500例，均滿足手足口病的相關診斷標準[3]，患兒家屬簽署知情同意書。全部1500例患兒中，7男72例，女728例；其年齡3～72個月，平均（34.2±3.8）個月。

1.2 方法

選擇北京萬泰生物藥業股份有限公司的CV-A16IgM抗體檢測試劑盒以及EV-A71IgM抗體檢測試劑盒；選擇友康恒業生物科技北京有限公司的病毒采樣管；選取上海之江生物科技股份有限公司的腸道病毒通用型核算測定試劑盒、CV-A16核酸測定試劑盒、EV-A71核酸測定試劑盒；選擇山東高密彩虹分析儀器有限公司的酶標儀和洗板機；選擇美國ABI公司的RT-PCR試劑盒。

同時采集研究對象的肛拭子或者糞便標本、靜脈血標本。靜脈血標本在凝固后進行離心處理，于當天選擇ELISA法檢測；肛拭子或糞便標本放置在病毒采樣管內，及時保存在零下20℃的冰箱內，于次日開展RT-PCR檢測。

嚴格遵循試劑盒說明書開展ELISA檢測操作，主波長、次波長分別設置為450 nm、630 nm，對吸光度（A）值進行測定，cut off值為0.1+A陰性對照均值，如果A陰性對照值＜0.05則應根據0.05計算；嚴格遵循試劑盒說明書開展RTPCR檢測操作，提取核酸；PCR反應條件為：50℃30分鐘，95℃10分鐘；然后95℃10秒，55℃40秒，共循環45次。Ct＜43則判斷為陽性；Ct為43～45則應進行1次復檢，如果復檢結果依然為43～45則判斷為陰性；Ct＞45或者樣本小于檢測限，則判斷為陰性。

1.3 統計學方法

本實驗相關數據運用SPSS 21.0軟件做統計學處理，計數資料以百分率（%）表示，組間數據比較進行x2檢驗，計量資料以均值±標準差（）表示，組間數據比較進行t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 RT-PCR與ELISA檢測結果觀察

EV-A71IgM的陽性率為14.27%，EV-A71RNA的陽性率為1.87%，CV-A16IgM的陽性率為12.47%，CV-A16RNA的陽性率為3.53%，EV-RNA的陽性率為88.73%；CV-A16IgM和EV-A71IgM雙陽性共78例，無患者為CV-A16RNA和EVA71RNA雙陽性；如表1。

表1 RT-PCR與ELISA檢測結果觀察（n=1500，n，%）

2.2 RT-PCR與ELISA檢測結果配對列表

在EV-A71的臨床診斷方面，RT-PCR與ELISA的一致性較差，差異有統計學意義（Kappa=0.168，P＜0.05）；與RT-PCR檢測相比（1.87%），ELISA檢測陽性率（14.27%）明顯提高，差異有統計學意義（P＜0.05）。在CV-A16的臨床診斷方面，RT-PCR與ELISA的一致性較差，差異有統計學意義（Kappa=0.159，P＜0.05）；與RT-PCR檢測相比（3.53%），ELISA檢測陽性率（12.47%）明顯提高，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討 論

現階段臨床中在對手足口病進行檢測時，RT-PCR以及ELISA是最常用的檢測方法。本研究中，EV-A71IgM的陽性率為14.27%，EV-A71RNA的陽性率為1.87%，CV-A16IgM的陽性率為12.47%，CV-A16RNA的陽性率為3.53%，EVRNA的陽性率為88.73%；ELISA檢測EV-A71、CV-A16的陽性率均明顯高于RT-PCR，差異有統計學意義（P＜0.05）。在對病毒進行檢測時，RT-PCR檢測的優點主要為特異性好、敏感度高，然是在采集、保存以及運輸標本時，對RNA提取具有較高要求，如果未按要求對RNA進行提取，則可能導致RNA降解，而且在對病毒RNA進行檢測時，糞便并不是最理想的標本，進而讓檢測結果出現假陰性。在對手足口病病毒進行檢測時，檢查方法、標本類型不同，檢測陽性率也會出現差異，對糞便、皰疹液等類型的標本進行規范采集，能讓陽性率明顯提高，讓RT-PCR的檢測假陰性結果明顯減少。

總之，ELISA檢測方法的成本較低，周期較短，可以將其作為手足口病的常規檢測方法；在檢驗設備以及檢測方法不斷完善的過程中，聯合應用RT-PCR、ELISA檢測方法，能明顯提升手足口病的診斷能力。