右美托咪定對重度燒傷SD 大鼠肝損傷的影響＊

萬昊 ，徐琳 ，羅佛全 ，張學康 ，吳飛翔 ，胡真真

（南昌大學第一附屬醫院，1.肝膽外科；2.麻醉科，南昌 330006）

多器官功能障礙綜合征 （multiple organ dysfunction syndrome，MODS）是嚴重燒傷患者死亡的主要原因之一[1]。 肝臟是人體最重要的代謝器官，可保護其他臟器免受損傷[2]。 因此修復燒傷后肝損傷，對MODS 的防治尤其重要。 右美托咪定是一種新型高選擇性α2 腎上腺素受體激動劑，具有鎮靜、鎮痛[3-5]、一定的肝保護作用[6-8]。 目前有關右美托咪定對燒傷后肝損傷的影響尚無相關報道。本研究將右美托咪定用于燒傷SD 大鼠，探討其對燒傷引起的肝損傷的修復作用及其作用機制，為臨床麻醉工作找出一種既有麻醉作用，又起肝保護作用的方案，為嚴重燒傷患者的治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 健康成年雄性SD 大鼠30 只（南昌大學醫學院動物實驗中心），右美托咪定（江蘇恒瑞醫藥股份有限公司），TNF-α 檢測試劑盒(上海依科賽科技實業有限公司)，TUNEL 反應液 （Roche，美國），DAB 顯色劑 （福州邁新生物技術開發有限公司），光學顯微鏡(上海光學儀器廠)，血生化自動分析儀（HITACHI 公司，日本）。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗分組 采用隨機數字表法，將30 只成年雄性 SD 大鼠分為 3 組(n=10)：空白對照組（C 組）、燒傷組（B 組）和右美托咪定組（D 組）。 參照文獻[9]介紹的方法制備大鼠重度燒傷模型。 腹腔注射10%水合氯醛0.4ml/kg 麻醉，將大鼠背部浸入98℃熱水中10s， 造成大鼠30%體表面積燒傷模型。 C組浸入 37℃溫水中10s。D 組燙傷后即刻腹腔注射右美托咪定 30μg/kg。 C 組不補液， 其余組大鼠按Parkland 公式腹腔注射等滲鹽水補液抗休克治療，D 組根據腹腔注射右美托咪定的容量相應減少補液量。 大鼠單籠飼養，自由進食、飲水。 燒傷后24 h 采用10%水合氯醛0.4ml/kg 腹腔內注射麻醉各組大鼠，抽取腹主動脈血液10ml，室溫靜置15min后，3000r/min 離心20min，收集血清行肝功能指標的檢測分析。 采血后，收集各組大鼠的肝組織，4%多聚甲醛固定，待檢測。

1.2.2 血生化自動分析儀檢測肝功能學指標 使用血生化自動分析儀（日立，HITACHI7170）進行檢測分析各組大鼠血清標本， 各組大鼠谷丙轉氨酶(alanine transaminase， ALT)、 谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase，AST)的水平。

1.2.3 HE 染色檢測肝組織的病理學變化 取4%多聚甲醛固定的肝組織，常規脫水、石蠟包埋，5μm厚連續切片3 張，HE 染色， 光學顯微鏡下觀察肝臟病理學結果。

1.2.4 ELISA 法檢測肝組織中 TNF-α 水平 將采集的各組大鼠肝組織標本， 在4℃下進行組織勻漿， 按照ELISA 試劑盒的說明測定勻漿上清中TNF-α 水平。

1.2.5 TUNEL 染色檢測肝細胞的凋亡情況 常規石蠟切片脫蠟,蛋白酶K 抗原修復15 min，3%過氧化氫溶液室溫孵育10 min, TUNEL 反應液37℃ 孵育60 min, Converter-POD 37℃孵育30 min,DAB顯色，蘇木精復染、弱氨水返藍，乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片。 每張切片選擇10 個高倍鏡視野計數，光鏡下正常肝細胞核為藍色，凋亡肝細胞核為棕黃色或含有棕黃色顆粒。 細胞凋亡率＝凋亡細胞數／總細胞數 × 100%。

1.3 統計學分析 采用SPSS 17．0 統計軟件對數據進行分析。所有數據均為計量數據，以()表示，組問比較采用單因素方差分析，P<0．05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠肝功能水平 與C 組相比，B 組、D組中 AST、ALT 水平顯著升高，而 D 組中 AST、ALT水平則較B 組顯著下降，但仍高于C 組，差異有統計學意義 (P<0．05)，見表 1。

表1 各組大鼠肝功能水平的比較

2.2 各組大鼠肝組織病理形態學 C 組肝細胞呈正常結構，未見肝細胞變性壞死。 但B 組肝小葉結構不清，肝索排列紊亂，肝細胞濁腫、胞質疏松、脂肪變性，部分肝板結構及血竇消失，散在淋巴細胞浸潤，偶見小灶性聚集。 D 組大鼠肝組織的病理學改變則較燒傷組顯著減輕，見圖1。

圖1 各組大鼠肝組織病理形態學觀察（HE，×400倍）

2.3 各組大鼠 TNF-α 水平 B 組、D 組中 TNF-α 水平均較 C 組顯著升高，D 組 TNF-α 水平則較 B 組顯著下降，但仍高于C 組，差異有統計學意義(P<0．05)，見表 2。

表2 各組大鼠TNF-α 的比較

2.4 各組大鼠肝細胞凋亡率 C 組大鼠肝組織僅可見少量細胞凋亡，細胞凋亡率為(16.32±4.19)%，B 組、D 組大鼠肝組織出現較多的凋亡細胞， 核質濃縮、邊緣化，核膜裂解；B 組大鼠肝細胞凋亡率約為 （54.89±10.26）%顯著高于 D 組 （36.72±8.25）%（P＜0.05），見圖 2。

3 討論

有研究[10]發現，大面積的重度燒傷患者在燒傷數小時后，便出現了肝損傷，表現為黃疸、轉氨酶升高，嚴重者還可誘發急性肝衰竭、甚至MODS，影響了燒傷患者的存活和預后。 因此，對于大面積的重度燒傷患者，早期積極抗休克救治的同時，肝保護也是極其重要的。

圖2 各組大鼠肝組織細胞凋亡形態學（TUNEL，×400倍）

本研究結果顯示，大面積重度燒傷SD 大鼠的肝組織中TNF-α 含量和肝細胞凋亡率顯著增高，而右美托咪定的使用可明顯減少炎癥因子的生成和肝細胞凋亡率，可有效改善重度燒傷SD 大鼠的肝組織的結構和功能。 Sezer 等[11]發現右美托咪定可減輕肝細胞的凋亡。 還有研究[12,13]顯示右美托咪定可抑制炎癥因子減輕肝臟的缺血再灌注損傷。由此可見， 右美托咪定發揮的肝保護作用可能與其能夠抑制炎癥反應，降低細胞凋亡有關。 而嚴重燒傷易出現MDOS 可能與機體失控性炎癥反應有關[14]。 已有研究證實右美托咪定可通過激活PI3K/Akt/GSK-3β 通路抑制心肌凋亡、 降低炎癥因子TNF-α 水平對嚴重燙傷大鼠起到心肌保護[15,16]。 因此， 我們推測右美托咪定對嚴重燒傷后肝臟同樣可發揮類似的抗炎和抑制細胞凋亡的保護作用。

綜上所述，右美托咪定可減輕重度燒傷SD 大鼠肝臟炎癥因子的生成和肝細胞凋亡， 具有一定能的肝保護作用。