IL-6 和IL-8 在慢性前列腺炎患者精液中的表達(dá)及臨床意義

甘進(jìn)，王曉榮

（南昌大學(xué)第四附屬醫(yī)院泌尿外科，南昌 330006）

慢性前列腺炎(Chronic Prostatitis, CP)是臨床前列腺炎中最常見的類型，是50 歲以下男性患者中最常見的泌尿系統(tǒng)疾病。 以排尿異常及慢性盆腔疼痛為主要臨床表現(xiàn)，伴有性功能障礙、精神神經(jīng)癥狀的一類綜合征[1-3]。 其病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，探討慢性前列腺炎的生物學(xué)特性，尋找潛在的治療靶點(diǎn)可能為臨床治療開辟新的途徑。

細(xì)胞因子介導(dǎo)免疫細(xì)胞之間的相互刺激、彼此約束， 在免疫應(yīng)答的全過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[2,3]。 例如，在免疫應(yīng)答細(xì)胞擴(kuò)增階段，IL-6 等促炎性因子輔助T、B 細(xì)胞的增殖和分化。 在免疫應(yīng)答的效應(yīng)階段，IL-8 等趨化因子吸引炎癥細(xì)胞進(jìn)入組織部位，激活巨噬細(xì)胞和增強(qiáng)殺傷活性。 從理論上說，任何免疫相關(guān)疾?。òǜ腥拘约膊。[瘤，移植排斥和自身免疫性疾?。┒伎梢酝ㄟ^人為控制（補(bǔ)充，添加，阻斷或拮抗）細(xì)胞因子的作用加以治療。

本研究旨在探討精液中IL-6、IL-8 等細(xì)胞因子表達(dá)與CP 診斷的關(guān)系，為慢性前列腺炎的診斷及治療效果評估提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)收集從2017 年9 月-2019 年9 月南昌大學(xué)第四附屬醫(yī)院泌尿外科門診就診的符合美國國立衛(wèi)生研究院 （National Institutes of Health，NIH）前列腺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]的75 例慢性前列腺炎患者的精液標(biāo)本， 通過詳細(xì)詢問患者病史，并進(jìn)行慢性前列腺炎癥狀指數(shù)評分 （the national institutes of health chronic prostatitis symptom index，NIH-CPSI）、常規(guī)尿液檢查和細(xì)菌培養(yǎng)、前列腺液檢查及細(xì)菌培養(yǎng)。 具體診斷分組標(biāo)準(zhǔn)：患者均有臨床癥狀，主要表現(xiàn)為下腹部、會(huì)陰、盆腔區(qū)域的疼痛和不適，伴有各種排尿異常、性功能障礙和精神癥狀，病程大于三個(gè)月，并排除尿道炎、附睪炎以及精索靜脈曲張、直腸及肛周病變等可能引起類似癥狀的其他疾病。 所有患者均告知病情、檢測項(xiàng)目和收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)，患者及家屬均知情同意。

對就診患者除系統(tǒng)體格檢查外，以“二杯法”[5]進(jìn)行尿液常規(guī)檢查及細(xì)菌培養(yǎng)、前列腺液常規(guī)檢查及細(xì)菌培養(yǎng)。根據(jù)檢查結(jié)果將慢性前列腺炎病人及健康對照分為4 組。第一組：Ⅱ型組（慢性細(xì)菌性前列腺炎）18 例， 前列腺按摩后尿液檢查WBC＞10個(gè)/HP，細(xì)菌培養(yǎng)（+）；第二組：Ⅲa 型（炎癥性）組25 例，按摩前尿液鏡檢WBC(—)，按摩后尿液鏡檢WBC＞10 個(gè)/HP，細(xì)菌培養(yǎng)(—)；第三組：Ⅲb 型（非炎癥性）組32 例，按摩前、后尿液鏡檢WBC＜10 個(gè)/HP，細(xì)菌培養(yǎng) (—)；第四組：健康對照組 20 例，前列腺按摩前后尿液檢查WBC＜5 個(gè)/HP， 細(xì)菌培養(yǎng)(—)。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟和方法

1.2.1 樣本收集、 處理和保存 手淫法收集精液標(biāo)本后置離心機(jī)上1000rpm 離心10min，提取精漿并置于干燥試管中，-20℃冰箱內(nèi)保存。使用時(shí)先在室溫下解凍并確保樣本均勻地充分解凍。 復(fù)溫液化后取上清液使用試劑盒中提供的樣本稀釋液處理樣本。

1.2.2 細(xì)胞因子IL-6 檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法測定精液中IL-6 表達(dá)水平。 使用兩株識別不同部位的抗IL-6 單克隆抗體， 一株用以識別和結(jié)合待檢標(biāo)本中的IL-6， 另一株作為酶標(biāo)抗體， 與結(jié)合于包被抗體的IL-6 的另一表位結(jié)合，并催化底物顯色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-6 的表達(dá)水平。

1.2.3 細(xì)胞因子IL-8 檢測 采用ELISA 方法測定精液中IL-8 表達(dá)水平。 使用兩株識別不同表位的抗IL-8 單克隆抗體，一株作為包被抗體，以識別和結(jié)合待檢標(biāo)本中的IL-8，另一株作為酶標(biāo)抗體，與結(jié)合于包被抗體的IL-8 的另一表位結(jié)合， 并催化底物顯色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待檢標(biāo)本中IL-8 的表達(dá)水平。

1.3 結(jié)果分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 全部數(shù)據(jù)分析均采用SPSS11.5 軟件完成。各數(shù)據(jù)用()表示，組間比較采用方差分析，P<0.05 認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組對象的年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

各組研究對象精液中IL-6、IL-8 表達(dá)水平如表 1 所示。 Ⅱ型組、Ⅲa 和Ⅲb 型組精液中 IL-6 表達(dá)水平明顯高于對照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；Ⅱ型組和Ⅲa 型組患者精液中IL-6 表達(dá)水平高于Ⅲb 型組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示Ⅱ型組、 Ⅲa 和Ⅲb 型組精液中IL-8 表達(dá)水平明顯高于對照組， 差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；Ⅱ型組和Ⅲa 型組患者精液中IL-8表達(dá)水平高于Ⅲb 組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

除對照組外，各組精液中白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、IL-6、IL-8 和 NIH-CPSI 進(jìn)行相關(guān)性分析 （r 值）。NIH-CPSI 與白細(xì)胞計(jì)數(shù)無明顯相關(guān)（r=-0.26,P>0.05），NIH-CPSI 評分與 IL-6 和 IL-8 表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.429,P＜0.05）,各組 IL-6 和 IL-8 呈顯著相關(guān)性（P＜0. 01）。

表1 各組間精液中細(xì)胞因子IL-6、IL-8水平()pg/ml

表1 各組間精液中細(xì)胞因子IL-6、IL-8水平()pg/ml

分組 N IL-6 IL-8Ⅱ型組Ⅲa 型組Ⅲb 型組對照組18 25 32 20 389.16±37.11 371.40±63.51 249.00±11.42 105.91±83.41 F=64.98 P=0.000 334.72±61.05 300.80±45.17 211.50±44.63 112.18±72.21 F=38.86 P=0.000

3 討論

慢性前列腺炎(CP)是泌尿外科臨床上最常見的前列腺疾病，它的特點(diǎn)是臨床癥狀復(fù)雜多樣，診斷步驟繁瑣，且缺乏相對特異性的方法。 對該病的認(rèn)識有許多困惑之處， 臨床治療效果難以有一個(gè)客觀的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[6]。 探索慢性前列腺炎的診斷標(biāo)志物、研究慢性前列腺炎的發(fā)病機(jī)制，具有重要的臨床意義。

IL-6 參與免疫調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答： 誘導(dǎo)B 細(xì)胞分化和產(chǎn)生抗體；誘導(dǎo)T 細(xì)胞表達(dá)IL-2 受體和產(chǎn)生IL-2；誘導(dǎo)T 細(xì)胞活化增殖和分化等。 IL-6 參與急性相蛋白反應(yīng),誘導(dǎo)多種急性相反應(yīng)蛋白的合成和分泌。 IL-6 生物學(xué)功能廣泛，可通過旁分泌、自分泌和內(nèi)分泌3 種方式發(fā)揮作用。 Drannik 等[9]研究報(bào)告慢性前列腺炎患者的免疫應(yīng)答中，IL-6 誘導(dǎo)T、B 細(xì)胞分化和增殖， 誘導(dǎo)神經(jīng)生長因子（Nerve growth factor， NGF）和 IL-10 的表達(dá)，并且與它們協(xié)同作用，共同促進(jìn)細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答。

IL-8 是一種趨化因子,在炎癥刺激后由巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和其他細(xì)胞大量產(chǎn)生。 它是中性粒細(xì)胞的趨化因子，并能激活中性粒細(xì)胞的其他功能，如粘附和殺菌, 對活化的T 淋巴細(xì)胞亦有趨化活性。 Celik 等[10]在慢性阻塞性肺疾病的研究中發(fā)現(xiàn)，慢性阻塞性肺疾病患者血清和痰液中IL-8、TNF-a的表達(dá)水平明顯高于正常人,且與慢性阻塞性肺氣腫的類型和是否急性發(fā)作有關(guān)，進(jìn)一步證明IL-8、TNF-a 參與了慢性炎癥的發(fā)病及進(jìn)展過程。

本研究中促炎性細(xì)胞因子IL-6，趨化因子 IL-8 含量在慢性前列腺炎（CP）中顯著升高。 表明 IL-6 和 IL-8 在CP 的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，有可能成為CP診斷分型的參考指標(biāo)之一。CP 患者精液中IL-6 水平、IL-8 水平和NIH-CPSI 疼痛癥狀評分之間呈正相關(guān)性(r=0.429，P＜0.01)，推測 IL-6 和 IL-8 可能參與患者疼痛癥狀的產(chǎn)生，IL-6 及IL-8 水平可能作為患者療效評估的一個(gè)指標(biāo)。 因此，精液可以部分替代前列腺液進(jìn)行細(xì)胞因子的檢測， 避免了病人前列腺按摩時(shí)引起的不適感和前列腺液標(biāo)本量獲取不足的問題。