促甲狀腺激素受體與TTF-1、Pax-8在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及意義

柳 林 王麗哲 張永慶 李如江 莊寶祥

1 濰坊市人民醫院內分泌科，261041 山東 濰坊; 2 濰坊醫學院內科學教研室，261053 山東 濰坊;3 濰坊市人民醫院甲狀腺外科，261041 山東 濰坊; 4 濰坊醫學院組織與胚胎學教研室，261053 山東 濰坊;5 濰坊醫學院形態學教研室，261053 山東 濰坊

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)占所有甲狀腺惡性腫瘤的80%左右[1]，不同甲狀腺組織表達的TSHR不同，TTF-1、Pax-8作為TSHR的特異性轉錄因子，對TSHR的表達起關鍵作用[2]。橋本氏病(Hashimoto thyroiditis，HT)是一種器官特異性甲狀腺自身免疫性疾病，常合并甲狀腺乳頭狀癌[3]。本文探討上述目標蛋白在不同甲狀腺組織中的表達及其相關關系，揭示甲狀腺乳頭狀癌的發生發展規律，并為治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年9月至2019年6月在某院內分泌科確診、并在甲狀腺外科行手術治療的單純PTC組織16例(A組)、HT合并PTC組織24例(B組)、癌旁正常甲狀腺組織40例(C組)，以及同期確診并接受手術的結節性甲狀腺腫(NG)組織32例(D組)。全部甲狀腺乳頭狀癌病例中，男性8例，女性32例；年齡>45歲的29例，≤45歲的11例，平均(49.6±11.34)歲；腫瘤直徑>1 cm的10例，≤1 cm的30例，平均(0.73±0.66)cm；有淋巴結轉移的17例，無淋巴結轉移的23例；單純PTC 16例，合并HT的PTC 24例。在NG組中，男性7例，女性26例；年齡>45歲的22例，≤45歲的10例，平均(48.72±10.28)歲；合并HT的12例，單純NG 20例。4組患者的年齡、性別、種族等基本情況無差異。手術指征依據中華醫學會《甲狀腺結節和分化型甲狀腺癌診療指南》[4]，本實驗獲該醫院倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

排除標準：(1)臨床病理資料不完善者；(2)其他類型的甲狀腺癌，如甲狀腺髓樣癌、未分化癌等；(3)合并其他惡性腫瘤；(4)術前行其他治療的患者。

1.2 實驗方法

術中取得甲狀腺組織后，半小時內置入10%福爾馬林溶液中，并在3日內行脫水、透明、包埋處理。將石蠟包埋后的標本進行切片，每例切6張石蠟切片，4張分別行TSHR、TTF-1、Pax-8的免疫組織化學染色，1張行HE染色，1張滴加PBS溶液進行陰性對照，在顯微鏡下觀察染色結果。

1.3 結果判讀

TSHR判讀采用Tanaka定量積分法[5]，TTF-1與 Pax-8判讀參考文獻[6]。

1.4 統計學方法

應用SPSS 21.0軟件對數據進行統計學分析，定性資料采用χ2檢驗及Fisher確切概率法，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 TSHR與TTF-1、Pax-8在PTC組、HT合并PTC組、癌旁正常組織組、NG組中的表達情況

研究發現，TSHR、TTF-1、Pax-8在甲狀腺組織的陽性表達4組間差別均無統計學意義(P>0.05)。TSHR、TTF-1在甲狀腺組織的強陽性表達在4組間的差別均有統計學意義(P<0.001,P=0.004)；Pax-8強陽性表達在4組間的差別無統計學意義(P=0.642)，見表1。

表1 TSHR、TTF-1、Pax-8在4組甲狀腺組織的表達

對TSHR、TTF-1進一步兩兩比較見表2，結果表明：TSHR在PTC組的強陽性表達低于NG組與癌旁正常組織(P<0.001，P=0.002)，在HT合并PTC組的強陽性表達低于在NG組(P=0.001)；TTF-1在HT合并PTC組的強陽性表達低于在NG組(P=0.002)；其他組兩兩比較均無統計學意義(P>0.008)。

表2 TSHR、TTF-1在4組甲狀腺組織中強陽性表達的兩兩比較P值

2.2 PTC組織中TSHR、TTF-1、Pax-8的表達與PTC患者的臨床參數之間的關系

研究發現，在全部PTC組織中，TSHR、TTF-1的陽性表達與性別、年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移情況均無關；Pax-8的陽性表達與性別、年齡、腫瘤直徑無關，而在有淋巴結轉移者表達低于無淋巴結轉移者(P=0.030)。見表3。

表3 TSHR、TTF-1、Pax-8在PTC的表達與患者臨床參數之間的關系

3 討論

TSHR是一種甲狀腺特異性蛋白，主要位于甲狀腺濾泡細胞的基底細胞膜上，與TSH結合后調節甲狀腺細胞的生長、分化。對于TSHR在甲狀腺乳頭狀癌的表達特點，迄今學術界觀點不一，Biondi等[7]認為TSHR在甲狀腺乳頭狀癌中的表達與正常組織中的表達無差異，也有學者發現在甲狀腺乳頭狀癌中TSHR基因的啟動子發生甲基化，導致其轉錄減少，表達亦隨之減少[8]。本研究發現,TSHR在PTC組的強陽性表達低于NG組與癌旁正常組織，在HT合并PTC組的強陽性表達低于NG組。文獻顯示，TSHR參與AITD及甲狀腺腫的形成，并參與HT中甲狀腺濾泡的破壞與萎縮[9]，故HT患者易合并PTC。本研究同時發現，在全部PTC組中，TSHR的陽性表達與性別、年齡、腫瘤直徑、是否有淋巴結轉移不存在相關關系。

TTF-1是在甲狀腺濾泡細胞細胞核細胞質中共表達的一種特異性抗原，能激活多種甲狀腺特異性蛋白基因的轉錄[10]，對甲狀腺組織的分化、維持甲狀腺細胞的表型以及對上述蛋白靶基因的表達起重要調控作用[11]。Pelosi等[12]發現，TTF-1的失表達與甲狀腺癌的侵襲性密切相關，甲狀腺乳頭狀癌中TTF-1磷酸化和胞質靶向性的改變，以及TTF-1核表達的丟失，可能是PTC去分化和不良預后的重要機制。本研究發現，TTF-1在HT合并PTC組的強陽性表達低于在NG組表達，其他兩兩比較均無差異。研究也發現，在PTC組的陽性表達與性別、年齡、腫瘤直徑、是否有淋巴結轉移等均不存在相關關系。與Lopez-Campistrous等[13]研究一致。

Pax-8是腎系轉錄因子家族中的一員，在甲狀腺濾泡細胞細胞核細胞質中共表達，也在多種正常組織、原發癌及其亞型、轉移癌及其亞型中被發現[2]，被認為與腫瘤細胞的增殖分化有關；且在甲狀腺中Pax-8作為一種特異性轉錄因子，與TTF-1一起調控著甲狀腺濾泡細胞的終末分化并維持其功能。關于Pax-8在甲狀腺良惡性組織中的表達，既往研究觀點不一。本研究顯示，Pax-8在各組甲狀腺組織中的表達差異無統計學意義；進一步在全部PTC中分析發現，Pax-8的陽性表達在有淋巴結轉移者表達低于無淋巴結轉移者，與性別、年齡、腫瘤直徑無關。說明Pax-8的低表達可能與甲狀腺癌的侵襲性相關。Ozcan等[14]認為Pax-8雖是TSHR的轉錄因子，但對TSHR基因的轉錄并不起主要作用。因本研究樣本量少，結論需要進一步研究證實。

綜上所述，TSHR與TTF-1的失表達、Pax-8的低表達會導致甲狀腺組織發生病變和不良預后，甲狀腺病變組織分化越低，其表達越低；TSHR、TTF-1與其他因子結合可能會更可靠地判斷甲狀腺乳頭狀癌預后，互相彌補不足，以更準確反映其生物學特性。

致謝：本文統計學分析得到濰坊醫學院王素珍教授指導，特此致謝！