原發性膽汁性膽管炎患者基質細胞衍生因子1的表達及臨床意義

朱維健

【摘 要】目的 通過檢測血清基質細胞衍生因子1（SDF-1）在原發性膽汁性膽管炎（PBC）患者中的表達，探討其在PBC診斷中的臨床意義。材料與方法 收集2017年1月至2019年6月在上海長征醫院就診的60名PBC患者作為疾病組，慢性乙肝肝硬化患者32例作為疾病對照組以及同期健康查體的30名表觀健康者作為對照組。采用電化學發光免疫分析技術測定各組血清中SDF-1濃度，分析其在各組表達差異。結果 PBC患者血清SDF-1含量[1186.96（1002.05—1471.33）pg/mL]明顯高于慢性乙肝肝硬化患者[740.69（600.30-1239.27）pg/mL]和正常人群[738.44（687.65—879.33）pg/mL]（P<0.001）。乙肝肝硬化組和對照組間差異無統計學意義（P>0.05）。SDF-1在不同病理分期的PBC患者的表達差異無統計學意義（P>0.05）。ROC曲線顯示SDF-1診斷PBC的曲線下面積為0.861（P<0.01）。結論：PBC患者血清SDF-1水平明顯增高，可能成為PBC篩查和診斷的潛在生物標志物，但與疾病進展無關。

【關鍵詞】：原發性膽汁性膽管炎;基質細胞衍生因子1;檢測;臨床意義

Expression and clinical significance of serum stromal cell-derived factor-1 in patients with primary biliary cholangitis

Abstract? Objective? To measure the level of stromal cell-derived factor-1 in the sera of patients with primary biliary cholangitis， and to explore the clinical significance of SDF-1 in PBC.? Method? A total of 60 PBC patients， 32 age- and sex-matched patients with chronic hepatitis B （CHB） and 30 age- and sex-matched healthy controls （HC） were recruited from January 2017 to June 2019. The concentration of SDF-1was measured by electrochemiluminescence assay and analyzed in different groups.? Results? The results showed significantly higher median level of serum SDF-1 [1186.96 （1002.05–1471.33） pg/mL] in PBC patients than those with CHB [740.69（600.30–1239.27 ）pg/mL]and healthy controls [738.44（687.65–879.33） pg/mL） （P < 0.001）. There was no significant difference between CHB patients and controls （P>0.05）. There was no significant difference for serum SDF-1 among different histological stages（P>0.05）. ROC curve showed good diagnostic performance of serum SDF-1 for PBC ，with the AUC of 0.861（P<0.01）.? Conclusion? Serum SDF-1 was increased and may be a potential diagnostic marker for PBC. However， it may not be associated with the progression of PBC.

Key Words primary biliary cholangitis ， stromal cell-derived factor-1， detection， clinical significance.

【中圖分類號】R543【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）06-18--01

原發性膽汁性膽管炎（Primary biliary cholangitis，PBC）是一種以肝內膽管上皮細胞損傷為主要特征的自身免疫性肝病，病因和發病機制未明，以中老年女性發病為主。抗線粒體抗體（AMA）陽性是該病主要的血清學診斷指標，PBC有一個重要的病理學特征是受損膽管細胞周圍有大量的炎性細胞的浸潤，而基質細胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）又稱趨化因子CXCL12，對淋巴細胞和單核細胞有較強的趨化作用。因此，本研究旨在通過檢測PBC患者血清SDF-1的表達水平，探討其對PBC的診斷價值及與炎癥和纖維化程度的相關性。

1 對象和方法

1.1 研究對象? 收集2017年1月至2019年6月在上海長征醫院就診的PBC患者60例，男6例，女54例，年齡58±10歲，臨床診斷符合《美國肝病協會PBC診斷標準》[1]，即入組PBC患者應至少存在以下三種表現的兩種以上：（1）臨床生化指標異常，主要以堿性磷酸酶（ALP）、IgM球蛋白以及γ-谷氨酰轉肽酶（GGT）升高為主;（2）免疫學標記物陽性，主要包括抗線粒體抗體（或抗線粒體抗體M2型）、抗gp120和抗sp100等抗體陽性;（3）組織病理學依據：由于抗線粒體抗體對于PBC具有高度特異性，因此肝臟病理對于PBC診斷并非必須。但對于AMA陰性患者或部分重疊綜合征患者而言具有重要診斷價值，而且病理結果對于疾病進程判斷更為客觀。

收集32例性別年齡匹配的慢性乙肝肝硬化患者作為疾病對照組，男3例，女29例，年齡55±12歲，診斷符合《慢性乙肝肝硬化診斷標準》[2];收集同期進行健康體檢的30名表觀健康者作為對照組，男3例，女27例，年齡56±13歲。疾病組未經免疫抑制劑治療，且排除原發性硬化性膽管炎，自身免疫性肝炎，其他膽管損傷性疾病;對照組無血液系統疾病、糖尿病、急性感染等其他系統相關性疾病。本研究經長征醫院倫理委員會審核批準。

1.2 研究方法? 所有患者和健康對照組均在入院或體檢當天采集外周靜脈血，3500rpm，離心10分鐘，收集血清置于無菌EP管，冷凍保存于-80℃冰箱待測。

1.3 SDF-1檢測? 采用電化學發光免疫分析試劑盒（美國Meso Scale Discovery 公司）進行標本檢測，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4 病理分期? 采用Scheuer標準[3]將PBC按嚴重程度分為四期。一期是炎性細胞在局部膽管周圍浸潤。二期是炎癥影響肝實質細胞，部分膽管消失。三期是形成纖維隔膜。四期是肝硬化。

1.5 統計學分析? 采用SPSS 17.0軟件進行數據分析。不符合正態分布的數據采用四分位距（IQR） 和范圍表示，多組的比較采用Kruskal-Wallis H檢驗，兩組間的比較采用非參數Mann-Whitney U檢驗。以1-特異度為橫坐標，敏感度為縱坐標繪制ROC曲線，以曲線下面積評估SDF-1對PBC的診斷價值。以尤登指數最高值為診斷臨界點確定診斷敏感性和特異性。以P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清SDF-1水平? 60例PBC患者血清SDF-1濃度[1186.96（1002.05—1471.33）pg/mL]明顯高于慢性乙肝肝硬化患者[740.69（600.30-1239.27）pg/mL]和正常人群[738.44（687.65—879.33）pg/mL]（P<0.001）。慢性乙肝肝硬化組與對照組間比較差異無統計學意義（P=0.526），見圖1所示。

2.2 不同病理分期的PBC患者血清SDF-1水平? 60例PBC患者中，13例I期患者SDF-1含量[1092.92（963.38，1419.38）pg/mL]和11例II期患者SDF-1含量[1096.96（1003.79，1218.36）pg/mL]低于III期患者[1377.56（1174.60，1594.63）pg/mL]，但差異無統計學意義（P>0.05），見表1所示。

2.3 SDF-1對PBC的診斷價值? SDF-1對PBC診斷的ROC曲線下面積為0.861 （95%CI為0.792–0.930，P<0.001）。以尤登指數最高值（930.56 pg/mL）為診斷臨界點時，診斷敏感性為86.7%，特異性為82.3%，見圖2所示。

3 討論

原發性膽汁性膽管炎（PBC）是一種以肝內膽管上皮細胞損傷為主要特征的自身免疫性肝病。早期病理學特征是受損膽管周圍有大量炎性細胞浸潤[4]。已有研究表明趨化因子及其信號通路在PBC發病機制中起著非常重要的作用。

基質細胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1） 也稱趨化因子配體12（Chemokine（C-X-C motif） ligand 12，CXCL-12），是CXC趨化因子家族的成員之一，是介導干細胞歸巢最重要的趨化因子之一。SDF-1與受體CXC趨化因子受體4（CXC chemokine receptor 4，CXCR4）結合后形成的SDF-1/CXCR4信號軸在炎癥反應、細胞歸巢、腫瘤轉移、血管生成和組織再生等生理病理過程中發揮重要作用[5]，但在PBC中的作用尚鮮有文獻報道。

在肝臟微環境中，肝血竇內皮細胞、肝星形細胞和膽管上皮細胞均能分泌SDF-1，引起急性和慢性肝損傷，組織再生和纖維化進展[6-7]。研究還發現在SDF-1陽性的膽管周圍有大量CD4+、CD8+T細胞和B淋巴細胞的浸潤。而且90%的淋巴細胞CXCR4陽性，表明SDF-1/CXCR4信號通路在肝臟淋巴細胞浸潤和歸巢中發揮重要作用。我們的研究發現PBC患者血清SDF-1水平明顯升高，且對PBC診斷的ROC曲線下面積為0.861 （P<0.001）。取最佳臨界值時，診斷敏感性為86.7%，特異性為82.3%，因此對PBC有較好的診斷價值，但與PBC的病理分期無明顯相關性，推測SDF-1可能有助于淋巴細胞在肝內膽管中聚集，誘導PBC發病，但與疾病嚴重度和纖維化無關。其具體機制有待進一步闡明。由于本研究納入標本例數偏少，研究結論僅有初步提示作用，尚需進一步擴大樣本量確證。

本研究采用MSD技術是利用專利的SULFO-TAG標記，在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，是電化學和化學發光兩個過程的完美結合，操作簡單，將傳統ELISA技術的線性范圍提高2-3個數量級，靈敏度提高10-100倍，重復性高，基質效應小，是一種值得推廣的免疫分析技術。

綜上所述，血清SDF-1在PBC患者表達升高，且對PBC有較好的診斷價值，為PBC發病機制的研究提供新的思路，亦可作為PBC診斷和篩查的潛在標志物。

參考文獻

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中華醫學會肝病學分會 ，中華醫學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南.中華肝臟病雜志，2005，13（12）：881—891.

Scheuer P.Primary biliary cirrhosis， Proc. R. Soc. Med. 1967，60 （12）：1257–1260.

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吳周玲，白什爾，班桂飛等。基質細胞衍生因子 1 與其 G 蛋白偶聯受體 （CXCR4） 信號軸相關生物學特性。中國組織工程研究，2019;23（9）：1434-1440.

Marra F，Tacke F.Roles for chemokines in liver disease， Gastroenterology，2014， 147 （3）：577–594.

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