久咳顆粒鎮(zhèn)咳、抗炎和祛痰作用實驗研究

仇燚 徐燕莉

（瀘州市中醫(yī)院，四川 瀘州 646000）

小兒久咳，也歸屬于“久嗽”、“頑咳”、“風(fēng)咳”、“痙咳”等范疇[1]，屬中醫(yī)學(xué)“內(nèi)傷咳嗽”，囊括現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的上氣道綜合征、咳嗽變異性哮喘、感染后咳嗽等諸多疾病，其病機(jī)病因復(fù)雜，因此部分患兒病情纏綿反復(fù)，治療效應(yīng)差[2]。中醫(yī)認(rèn)為小兒臟腑嬌弱、腠理不密，不耐寒暑、衛(wèi)外機(jī)能不足，易感受外邪，尤以“風(fēng)邪”為甚。肺為嬌臟，最易受風(fēng)邪侵襲導(dǎo)致“清降”功能失調(diào)、水飲失布，加之小兒脾胃不足、運(yùn)化功能稚弱，則濕盛而脾虛導(dǎo)致水谷難化、化生痰涎，故多見小兒咳嗽夾痰[3]。四川瀘州地區(qū)處于長江沿岸河谷地區(qū)，氣候潮濕悶熱，飲食偏于辛辣，當(dāng)?shù)貎和禎裰囟⒊Ｓ舳簦翁摱啾憩F(xiàn)為氣不足而陰虛少見，故治療小兒久咳宜以補(bǔ)氣健脾為固本之舉，化痰止咳為治標(biāo)之策。久咳顆粒是本院在長期臨床實踐的基礎(chǔ)上，針對瀘州地區(qū)地理氣候和兒童體質(zhì)特點而研制的中藥顆粒劑，臨床上用于治療小兒久咳療效較好。為進(jìn)一步擴(kuò)大其臨床應(yīng)用和闡明其藥理作用，我們進(jìn)行了以下藥效學(xué)實驗。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

久咳顆粒（主要成分為黃芪、白術(shù)、防風(fēng)、魚腥草、枳殼、杏仁、桔梗、前胡、瓜殼等）由瀘州市中醫(yī)院藥劑科提供，每克浸膏粉含原生藥3.82 g，臨用前生理鹽水配制；陽性對照藥物復(fù)方磷酸可待因口服溶液，澳美制藥廠生產(chǎn)，批號：271026；醋酸潑尼松片，浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號：120234；氯化銨，成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn)，批號：20140602。

1.2 動物

SPF級ICR小鼠，雄雌各半，體重18～22 g，由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，生產(chǎn)設(shè)施許可證：SCXK（川）2008-24。

1.3 試劑

氨水，成都市科龍化工試劑廠，AR級，規(guī)格：500 mL/瓶，批號：20140910；二甲苯，成都市科龍化工試劑廠，AR級，規(guī)格：500 mL/瓶，批號：20141012；苯酚紅，成都科龍化工試劑廠，規(guī)格：25 g/瓶，批號：20100701，臨用前用生理鹽水配制成5%濃度備用；0.9%氯化鈉注射液：由四川科倫藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：500 mL/瓶，批號：20130805。

1.4 儀器

YLS-8A多功能誘咳引喘儀：山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)設(shè)備站；UV-1201型紫外可見分光光度計，北京瑞利分析儀器有限公司；Acculab-110.4型分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。

1.4 方法

1.4.1 小鼠氨水致咳模型

參考田軍等的方法[4]，取ICR小鼠60只，體重18-22 g，隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、陽性對照組、久咳顆粒高、中、低劑量組，每組10只，雌雄各半。陽性對照組灌胃給予復(fù)方磷酸可待因口服液5 mL·kg-1，實驗組高、中、低劑量分別灌胃給予久咳顆粒浸膏28 g生藥·kg-1、14 g生藥·kg-1和7 g生藥·kg-1，模型對照組和正常對照組給予等體積的生理鹽水，每日1次，連續(xù)給藥7 d。末次給藥1 h后，將各造模組小鼠置于誘咳引喘儀中，連續(xù)以28%濃氨水氣霧刺激5 s后，記錄小鼠咳嗽潛伏期以及3 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)，正常對照組置于誘咳引喘儀中，連續(xù)噴生理鹽水氣霧5 s。按下列公式計算咳嗽抑制率（%）：咳嗽抑制率（%）=（模型對照組炎癥咳嗽次數(shù)-給藥組炎癥咳嗽次數(shù)）/模型對照組咳嗽次數(shù)。

1.4.2 小鼠二甲苯致耳廓腫脹模型

參考徐叔云等的方法[5]，取ICR小鼠60只，體重18-22 g，分組同1.4.1。按表2所示劑量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥7d，模型對照組和正常對照組給予等體積的生理鹽水。于實驗第7d進(jìn)行試驗，造模前小鼠禁食，但不禁水至少12 h，末次灌胃給藥1 h后，以二甲苯30 μL均勻涂布于小鼠右耳兩面致炎，正常對照組以等體積生理鹽水涂布，致炎后1 h脫頸椎處死小鼠，剪下左右兩側(cè)耳廓，用直徑9 mm的打孔器分別在左右兩耳廓的相同部位打下圓形耳片，精密稱取兩耳片重量。以左右兩耳片重量的差值（mg）作為炎癥腫脹度，并按下列公式計算炎癥抑制率（%）：炎癥抑制率（%）=（模型對照組炎癥腫脹度-給藥組炎癥腫脹度）/模型對照組炎癥腫脹度。

1.4.3 小鼠酚紅致氣管排泌模型

參考陳奇等的方法[6]，取ICR小鼠60只，體重18-22 g，分組同1.4.1。按表3所示劑量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥7 d，模型對照組和正常對照組給予等體積的生理鹽水。末次給藥后30 min后，各造模組每只小鼠腹腔注射5%酚紅溶液，注射體積為0.1 mL·（10 g）-1體重，正常對照組注射等體積生理鹽水，30 min后處死動物，剝離氣管，剪下甲狀腺軟骨至氣管分支處的一段，置于2 mL生理鹽水的離心管中振蕩，再加入 0.1 mL NaOH，用紫外分光光度計于546 nm波長下測定OD值（用OD值表示酚紅排泌量多少，OD值越大表示酚紅排泌量越多）。

1.4.4 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示。采用單因素方差分析（One-way ANOVA）法分析，方差齊則采用LSD法，方差不齊則采用Dunnett’s T3法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 久咳顆粒對小鼠氨水所致咳嗽的影響

久咳顆粒高、中劑量連續(xù)給藥7 d，可顯著抑制氨水所致小鼠咳嗽潛伏期和減少咳嗽次數(shù)（P<0.01和P<0.05），見表1。

表1 久咳顆粒對小鼠氨水所致咳嗽的影響（±SD，n=10）

表1 久咳顆粒對小鼠氨水所致咳嗽的影響（±SD，n=10）

注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 劑量（g生藥·kg-1） 咳嗽潛伏期（s） 咳嗽次數(shù)（次） 抑制率（%）正常對照 - 0±0 0±0 -模型對照 - 23.0±10.6## 32.7±13.3## -復(fù)方磷酸可待因 5 mL·kg-1 58.0±23.3** 14.9±9.4** 54.4久咳顆粒高劑量 28 49.6±22.2* 19.4±9.6** 40.7久咳顆粒中劑量 14 43.9±13.5* 22.7±10.4* 30.6久咳顆粒低劑量 7 31.6±12.4 30.1±10.4 8.0

2.2 久咳顆粒對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

久咳顆粒高、中劑量連續(xù)給藥7 d，可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹（P<0.01和P<0.05），見表2。

表2 久咳顆粒對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（±SD，n=10）

表2 久咳顆粒對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（±SD，n=10）

注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 給藥劑量（g生藥·kg-1） 腫脹度（mg） 腫脹抑制率(%)正常對照 - 0.25±1.40 -模型對照 - 23.83±7.83## -醋酸潑尼松 50 mg·kg-1 11.61±6.06** 51.3%久咳顆粒高劑量 28 12.83±8.34** 46.2%久咳顆粒中劑量 14 16.73±6.68* 29.8%久咳顆粒低劑量 7 19.98±5.69 16.2%

2.3 久咳顆粒對小鼠氣管酚紅排出量的影響

久咳顆粒高、中、低劑量連續(xù)給藥7 d，可顯著增加小鼠氣管酚紅的排出量（P<0.01和P<0.05），見表3。

3 討論

中醫(yī)藥治療小兒久咳有較完善的理論，也有不少經(jīng)典藥方及單味有效中藥。小兒久咳屬中醫(yī)學(xué)“內(nèi)傷咳嗽”。中醫(yī)理論認(rèn)為小兒肺、脾常不足，肺氣不足則衛(wèi)外失職，易患呼吸道疾病，即所謂“邪之所湊，其氣必虛”；而肺臟受病則肺衛(wèi)亦受傷，久咳更傷肺氣，無力驅(qū)邪而使病程遷延。脾虛則痰濕內(nèi)生，貯于肺而見咳嗽有痰，汗多，納差，舌淡苔白，脈細(xì)弱等。小兒久咳多為肺脾氣虛而痰濁阻滯之證，治當(dāng)扶正祛邪，擬用補(bǔ)肺健 脾，化痰止咳之法。

表3 久咳顆粒對小鼠氣管酚紅排出量的影響（±SD，n=10）

表3 久咳顆粒對小鼠氣管酚紅排出量的影響（±SD，n=10）

注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 給藥劑量（g生藥·kg-1） 氣管酚紅排出量（OD值）正常對照 - 0±0模型對照 - 0.030±0.019##氯化銨 1 g·kg-1 0.317±0.122**久咳顆粒高劑量 28 0.329±0.116**久咳顆粒中劑量 14 0.282±0.132**久咳顆粒低劑量 7 0.179±0.132*

四川瀘州地區(qū)處于長江沿岸河谷地區(qū)，氣候潮濕悶熱，飲食偏于辛辣，當(dāng)?shù)貎和w質(zhì)上多表現(xiàn)為痰濕重而脾常郁遏，肺虛多表現(xiàn)為氣不足而陰虛少見，故治療小兒久咳宜以補(bǔ)氣健脾為固本之舉，化痰止咳為治標(biāo)之策。久咳顆粒是本院在長期臨床實踐的基礎(chǔ)上，針對瀘州地區(qū)地理氣候和兒童體質(zhì)特點而研制的中藥顆粒劑，本方主要由玉屏風(fēng)散（黃芪、白術(shù)和防風(fēng)）和枳術(shù)散（枳殼和白術(shù)）加味杏仁、桔梗、前胡、瓜殼等組成。方中用玉屏風(fēng)散補(bǔ)氣疏風(fēng)，枳術(shù)散健運(yùn)脾胃，藥理學(xué)研究表明玉屏風(fēng)散具有抗炎免疫[7-9]和調(diào)節(jié)機(jī)體微生物群落[10]等作用，在兒科呼吸系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病和自身免疫疾病中廣泛應(yīng)用[10]，而枳術(shù)散在治療消化系統(tǒng)疾病如慢性胃炎、消化性潰瘍、功能性消化不良以及胃下垂等具有明顯療效[11]。魚腥草、杏仁、桔梗、前胡、瓜殼化痰止咳，共奏固本驅(qū)邪之功，對稚陰稚陽之體的小兒尤為妥當(dāng)，藥理學(xué)研究表明魚腥草抗炎抗微生物感染[12]，杏仁鎮(zhèn)咳平喘抗炎[13]，桔梗止咳平喘、抗炎抑菌[14]，前胡鎮(zhèn)咳平喘、祛痰抗炎[15]。經(jīng)過長期臨床實踐也證明久咳顆粒對小兒久咳有較好的療效。

為探討久咳顆粒的現(xiàn)代藥理作用機(jī)制，我們采用氨水致小鼠咳嗽模型、二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型和氣管酚紅法，考察了其鎮(zhèn)咳、抗炎和祛痰藥理作用。實驗結(jié)果顯示，久咳顆粒能明顯延長氨水所致小鼠咳嗽的潛伏期、降低小鼠的咳嗽次數(shù)，高、中劑量有統(tǒng)計學(xué)差異；對二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹也有明顯抑制作用，高、中劑量有統(tǒng)計學(xué)差異；對小鼠氣管酚紅的排出量有明顯的增加效應(yīng)，高、中、低劑量均有統(tǒng)計學(xué)差異。上述實驗研究結(jié)果提示久咳顆粒具有明顯的鎮(zhèn)咳、抗炎和祛痰作用，其治療小兒久咳的藥理作用機(jī)制可能與之相關(guān)。