肝細胞肝癌患者血清中成纖維細胞生長因子19表達對早期診斷的意義

胡曉菡，田新宇，沈 瀚

0 引 言

肝細胞肝癌是肝癌的常見類型，是一種高死亡率的原發性肝癌。近年來，新發病例數逐年上升，并有年輕化趨勢。由于其進展迅速，很多患者發現時已經處于疾病的中晚期，導致其預后較差[1]。因此深入研究肝細胞肝癌的疾病發展機制，尋找其潛在腫瘤標志物用于患者的早期診斷顯得尤為重要。腫瘤標志物在腫瘤的診斷、治療效果及預后的預測方面有著廣泛的應用。通常在肝癌疾病中，甲胎蛋白(AFP)被用作血清的生物標志物，在檢測肝癌的發病和復發方面起著重要的作用，雖然具有一定的特異性，但其干擾因素較多，且在肝細胞肝癌患者中經常保持在正常范圍內[2-3]。成纖維細胞生長因子19(fibroblast growth factor 19，FGF19)大部分在肝內表達，通過成纖維細胞生長因子受體促進細胞的分化、參與損傷組織修復，血管生成及干細胞增殖分化等[4]。研究發現，以自分泌方式產生的FGF19激活了成纖維細胞生長因子19/成纖維細胞生長因子4(FGF19/FGFR4)信號，參與了肝癌的發展[5]。還有報道顯示，肝癌患者血清FGF19的過度表達與疾病預后不良有一定關聯[6]，但其是否能在肝細胞肝癌中作為一個生物標志物尚不清楚。本課題組從2008年開始對在南京鼓樓醫院診斷為慢性乙肝感染人群進行長期隨訪，近年來發現部分隨訪者發展為肝癌患者，在這些隨訪者中收集經病理學確診為肝細胞肝癌患者臨床資料，采用酶聯免疫吸附試驗法(ELISA)檢測肝細胞肝癌患者以及慢性肝炎和健康人群血清FGF19的水平，進一步探討其在肝細胞肝癌患者早期診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2017年10月至2019年10月鼓樓醫院經病理學確診為肝細胞肝癌患者97例(肝細胞肝癌組)，其中男76例，女21例，平均年齡57歲；以及經實驗室數據、臨床表現和組織學診斷為慢性肝炎患者102例(慢性肝炎組)，男71例，女31例，平均年齡51歲。并選取同期73例健康人作為健康對照組。排除其他惡性腫瘤疾病及免疫性疾病。本研究經過醫院倫理委員會批準(批準號：2008022)，所有參與者及家屬均簽署了知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集及檢測肝細胞肝癌組于術前清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，3500×g離心5 min，吸取血清放置于-80 ℃冰箱保存。健康對照組及慢性肝炎組于清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，樣本處理方式同前。采用酶聯免疫吸附試驗法(ELISA)測定受試者血清FGF19水平，檢測儀器為西門子免疫發光檢測儀，試劑盒為FGF19檢測試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司)。AFP檢測使用西門子免疫發光檢測儀及配套試劑盒，生化項目檢測使用Beckman生化儀及配套試劑盒，血小板檢測使用SYSMEX血常規儀及配套試劑。實驗操作嚴格按照試劑說明書的標準程序進行。

1.2.2 觀察指標收集研究對象的臨床資料，包括性別、年齡、腫瘤家族史、FGF19、AFP、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、清蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、血小板(PLT)、病理報告。根據腫瘤學國際性分期標準TNM分期系統[7]將肝細胞肝癌患者分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，計算不同病理分期患者的FGF19水平。在肝細胞肝癌患者中將AFP與FGF19聯合檢測，分析FGF19檢測對現有肝癌檢測標記物的影響。

2 結 果

2.1 入組研究對象一般臨床資料比較3組研究對象在年齡、AFP、ALT、AST、ALB、PLT方面比較,差異具有統計學意義(P<0.05)；而性別、腫瘤家族史和TBIL方面比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 入組研究對象一般臨床資料比較

2.2 血清FGF19水平比較慢性肝炎組患者血清FGF19水平(57.62±4.66)pg/mL與健康對照組(49.83±5.79)pg/mL比較差異無統計學意義(P>0.05)；而肝細胞肝癌組患者血清FGF19水平(122.55±13.28)pg/mL，明顯高于慢性肝炎患者和健康對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。

2.3 血清FGF19水平與肝細胞肝癌患者病理分期的關系肝細胞肝癌Ⅰ期(29例)、Ⅱ期(23例)、Ⅲ期(30例)、Ⅳ期(15例)患者血清FGF19水平分別為(89.5±12.2)、(103.9±6.9)、(133.9±22.5)及(152.6±26.8)pg/mL，與TNM分期呈正相關(r=0.696，P<0.001)，見圖1。

圖1 肝細胞肝癌患者不同病理分期與FGF19水平的相關性

2.4 血清FGF19鑒別肝細胞肝癌的診斷效能在肝細胞肝癌患者中將AFP與FGF19聯合檢測顯示，敏感性從43.2%提高到69.7%，見圖2。

圖2 血清FGF19鑒別肝細胞肝癌的診斷效能

3 討 論

肝細胞肝癌是世界上發病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，其發病機制尚不明確。在肝癌疾病中，AFP雖被用作血清的生物標志物，但很容易被干擾，不利于疾病的早期診斷。隨著基因測序技術的不斷完善，在發生異常改變的基因組區域中尋找可能的候選基因成為研究標志物的焦點[8]。研究證實在部分肝細胞肝癌患者樣本中發現位于染色體11q13位點的FGF19基因出現了部分擴增[9]。且免疫組化實驗顯示，肝癌組約50%的病例中觀察到FGF19的過度表達[10]。成纖維細胞生長因子(FGFs)通過FGF受體(FGFR)酪氨酸激酶在細胞生長、分化、血管生成和代謝等方面發揮了重要的調節作用[11]。而FGF/FGFR信號轉導通路的失調也被認為促進了包括肝細胞肝癌在內的多種類型癌癥的發展[12-13]，而在這些疾病的血清FGF19水平確有明顯升高。因此本研究試圖探討FGF19能否作為肝細胞肝癌的腫瘤標志物，用于該疾病的早期篩查與診斷。

首先用ELISA法檢測肝細胞肝癌患者血清FGF19的水平，結果與王磊等的結論一致[5]，與對照組相比，慢性肝炎組患者組FGF19濃度略有升高，肝細胞肝癌組患者則明顯升高。有研究認為膽汁淤積和肝功能障礙會增加血液和膽汁中的濃縮膽汁酸，并導致肝細胞損傷，FGF19通過下調膽固醇7α羥化酶(Cyp7a)抑制膽汁酸合成[14]，因此慢性肝炎患者血清FGF19水平的輕度升高可能是血清膽汁酸水平升高的負反饋。為進一步研究FGF19與肝細胞肝癌的關系，我們使用TNM分期將肝細胞肝癌患者按不同病理分期計算患者的FGF19水平，Prizm軟件分析顯示，FGF19數值與TNM分期呈正相關性，進一步證實了兩者之間的密切關系。很多研究表明，AFP作為肝癌的重要診斷和監測指標，特異性雖然相對較高，但容易被干擾，對早期診斷有一定影響，而肝癌患者血清FGF19水平的升高已被報道，因此本研究在肝細胞肝癌患者中將AFP與FGF19聯合，ROC曲線顯示，兩者結合敏感性增加，提高了疾病的診斷效能，進一步為FGF19應用于臨床診斷提供了有力的佐證。與AFP不同的是，FGF19作為一種功能蛋白，在腫瘤細胞和內皮細胞的增殖中起著重要作用，因此也被認為是很有前途的治療靶分子[15]。

本研究發現，肝細胞肝癌患者血清FGF19呈顯著性上升，同時FGF19水平和TNM分期呈正相關，與AFP聯合可提高診斷效能。這些結果提示血清FGF19可以作為潛在生物標志物，用于肝細胞肝癌早期篩查和病情監測。同時，本研究也存在一定的不足:FGF19/FGFR4信號的激活有助于其分子靶向藥物的耐藥[16]，因此FGF19的異常產生可能與這些藥物的治療效果有關，需要在今后的研究中進一步驗證。