秀珍菇母種培養基最佳碳、氮源探究

謝 永，諶金吾，宋吉玲，王 杰，孫厚靜，王正文，姜發洋，吳鳳蓮

(1.貴州省黔東南州農業科學院，貴州 凱里 556000； 2.杭州市農業科學研究院，浙江 杭州 310024)

秀珍菇母種培養中碳源和氮源篩選中，馮志勇等[1]認為，秀珍菇營養碳源可溶性淀粉優于葡萄糖和蔗糖；而郭煒等[2]人認為葡萄糖優于蔗糖和可溶性淀粉；魯欣等[3]人秀珍菇在蔗糖碳源中生長速度最快，可溶性淀粉、果糖次之，葡萄糖碳源中生長速度最慢，而李守勉[4]等則認為在果糖和麥芽糖碳源中生長速度最快，蔗糖、可溶性淀粉次之。

在氮源篩選中，馮志勇、魯欣、李守勉等人對氮源篩選是結果一致，酵母粉優于蛋白胨；尿素作為唯一氮源時，菌絲不生長。而郭煒等人最優為蛋白胨，其次是酵母粉，以尿素作為唯一氮源時菌絲仍然生長。鑒于以上研究結果差異甚大，特進行本試驗。

1 材料與方法

1.1 供試材料

共收集來源不同的秀珍菇種質資源6份(見表1)。

表1 供試秀珍菇菌株

1.2 試驗方法

1.2.1菌株間拮抗試驗

將供試菌株接種于直徑為7 cm的PDA平板培養基上，6個菌株間彼此相互兩兩配對，置于平板中心并相距2 cm。封口后置于25 ℃恒溫培養箱中培養，觀察菌株的菌落前端接觸部分的拮抗反應，以區別相同或不同的菌株。

1.2.2不同碳源對菌絲生長的影響

分別用果糖、蔗糖、糊精、淀粉替代基礎培養基中的葡萄糖。具體配方如下：葡萄糖20 g，蛋白胨8 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。

每個碳源處理為每個平板接入活化的7 mm菌種塊，置于25 ℃恒溫培養箱中黑暗培養，設3次重復。當有一個處理的菌絲長滿培養皿時，結束全部培養，記錄菌絲生長速度，觀察菌絲生長勢。

1.2.3不同氮源對菌絲生長的影響

分別酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀、尿素替代基礎培養基中的蛋白胨。每個處理3次重復，試驗步驟同1.2.2。

2 結果與分析

2.1 拮抗試驗結果

本研究中將6個供試菌株兩兩直接配對培養，觀察生長情況。試驗結果表明，除菌株P 618和P 629之間無拮抗反應外(圖1-m)，其余各菌株間均有拮抗反應，其中菌株秀大與P 608、P 612之間拮抗反應不是很明顯(圖1-a、圖1-b)。說明P 618與P 629之間親緣關系近，但是否屬于同一品種還需進一步進行遺傳物質DNA分析；秀大與P 608和P 612之間的親緣關系較近，拮抗線不明顯；其余菌種之間拮抗線隆起非常明顯，說明彼此之間親緣關系遠。

表2 各菌株間的拮抗反應

2.2 不同碳源對菌絲生長的影響

由表3可知，不同碳源對秀珍菇菌絲生長速度及生長勢有不同的的影響。以可溶性淀粉為碳源時，秀大、P 612、P 618和P 629四個菌株的菌絲生長速度最快，明顯大于其他碳源；其次是以蔗糖為碳源時，菌株P 608的菌絲生長速度最快，為5.488 mm/d；以糊精為碳源時，菌株NH 7438的菌絲生長速度最快，為5.356 mm/d。從菌絲生長勢上看，以可溶性淀粉和糊精為碳源時，菌絲生長勢最好，優于其他處理組，表現為健壯、潔白、菌落完整、邊緣整齊，葡萄糖和果糖次之，能形成完整的菌落，以蔗糖最差，菌絲纖細。

表3 不同碳源中各菌種的菌絲生長速度 (單位：mm/d)

2.3 不同氮源對菌絲生長的影響

從表4可以看出，秀珍菇菌絲對氮源的利用具有選擇性，酵母粉是秀珍菇菌絲生長較好的氮源，其對菌絲生長勢及長速的作用明顯高于其他氮源，其次為蛋白胨；以尿素做氮源時，菌絲不萌發。在硝酸鉀和硫酸銨作為氮源培養時，菌絲生長速度雖然稍慢于酵母粉和蛋白胨，但是菌絲生長稀疏、長勢不良。

表4 不同氮源中各菌種的菌絲生長速度 (單位：mm/d)

3 小結與討論

在秀珍菇碳源篩選試驗中，秀珍菇菌絲生長最適碳源是可溶性淀粉，糊精在這幾個品種中的適用性不及可溶性淀粉廣；其次是葡萄糖和果糖，蔗糖最次。在秀珍菇菌絲氮源篩選試驗中，無論從菌絲生長速度還是菌絲生長勢方面，酵母粉都是最適氮源。以硝酸鉀和硝酸銨為氮源時，菌絲生長速度稍慢，長勢較弱，因此不適宜做秀珍菇氮源。以尿素為氮源時，菌絲不萌發，這與馮志勇等人研究結果一致。這可能是由于高溫滅菌時尿素發生縮合反應生成縮二脲、縮三脲、三聚氰酸等，導致無法被菌絲利用，故不生長。本研究針對不同地區收集和雜交選育的種質資源進行不同碳氮源對其生長影響的研究，結果表明，秀大、NH 7438菌絲生長速度最快，秀大菌絲更濃密、粗壯。綜合菌絲生長速度、濃密度、粗壯與否等因素對以上品種進行排序，秀大>NH 7438>P 612>P 608>P 618=P 629。