不同采收期黔產鴨跖草中異葒草素含量及生物產量的動態變化

李雪營，梁黔生，林先燕，魏學軍

(黔南民族醫學高等專科學校 藥學系，貴州 都勻 558000)

鴨跖草為鴨跖草科植物鴨跖草(CommelinacommunisL.)的干燥地上部分，主要分布在我國西南、華東和華北等地區，具有清熱解毒、利水消腫的功效，臨床主要用于風熱感冒、高燒不退、咽喉腫痛、水腫尿少、熱淋澀痛、癰腫疔毒等病癥的治療[1]。其含有較多異葒草素，常作為質量評價的主要指標[2-3]。

目前對鴨跖草的研究多集中在化學成分和藥效學等方面，在質量控制方面的研究較少。雖然鴨跖草的采收期在2015年版《中國藥典》中有夏、秋季采收的規定，但亦有在其他季節采收的報道[4]，市場上甚至出現春、夏、秋及初冬采收的情況。以季為采收的時間單位周期較長，難以控制藥材的內在質量，進而影響藥材的療效，存在指導性不足的問題。現有研究報道[3]表明，單純以不同采收期異葒草素的含量高低作為評價指標而未考慮生物產量，其結果亦存在科學性不足的問題。本實驗以黔產鴨跖草為研究對象，觀察和分析不同采收期異葒草素含量及生物產量的動態變化，并以異葒草素總量為評價指標，探討鴨跖草的適宜采收期，明確采收時間，研究結果可為其后續開發運用和質量標準體系的建立提供科學依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀(北京安捷倫公司)；RV10型旋轉蒸發儀(德國IKA公司)；DHG-9240A真空干燥箱(上海金山公司)；DV215CD 電子天平(奧豪斯)。

1.2 材料

鴨跖草鮮品2019年4-10月采集于都勻市小圍寨鎮，樣本經我校中藥教研室魏學軍教授鑒定為鴨跖草科鴨跖草屬植物鴨跖草(CommelinacommunisL.)的全草。異紅草素對照品(批號111974-201401)購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

將不同時期采摘的鴨跖草干燥至恒重后粉碎，得樣品A1～A14(見表1)，各樣品均制備3批次備用。

2.2 供試品溶液制備[3]

分別精密稱取不同批次鴨跖草藥材2 g，置圓底燒瓶中，加入20倍量70%乙醇溶液，加熱回流提取3次，時間分別為 2 h、1.5 h和1 h。合并提取液，過濾，離心，干燥后殘渣用適量甲醇溶解，微孔濾膜濾過后定容至10 mL量瓶中，得供試品溶液。

2.3 異葒草素含量測定

2.3.1 對照品溶液制備 精密稱取異葒草素20.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解并定容至刻度，搖勻即得異葒草素對照品溶液。

2.3.2 色譜條件 色譜柱：C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(15∶85)，體積流量：1.0 mL/min，柱溫：25 ℃，檢測波長：350 nm，進樣量：5 μL。色譜見圖1。

圖1 異葒草素對照品(A)和供試品(B)HPLC

2.3.3 標準曲線制備 分別精密量取對照品溶液1.0、2.5、5.0、7.5、12.5 mL于25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取上述對照品溶液，按照“2.3.2”項下條件進行測定，以峰面積為縱坐標(Y)，對照品進樣量為橫坐標(X)繪制標準曲線，回歸方程為Y=3 080.4X+52.153(r=0.999 9)。試驗結果表明，對照品在0.08～1.01 μg進樣量范圍內與峰面積積分線性關系良好。

2.3.4 精密度試驗 取異葒草素照品溶液2.0 mL，置于10 mL量瓶中，按照“2.3.2”項下色譜條件連續測定5次峰面積，RSD值為0.35%。

2.3.5 穩定性試驗 取異葒草素對照品溶液2.0 mL，置 于10 mL量瓶中，按照“2.3.2”項下色譜條件，分別于放置0、2、4、6、8 h后進樣測定，異葒草素峰面積的RSD值為0.45%。

2.3.6 重復性試驗 取樣品A15份，按照“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，在“2.3.2”項下色譜條件進行平行測定，異葒草素峰面積的RSD值為1.51%。

2.3.7 加樣回收率試驗 精密稱取已知異葒草素量的樣品A35份，加入適量異葒草素對照品，按照“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，“2.3.2”項下色譜條件測定，異葒草素平均回收率為98.67%，RSD值為0.88%。

2.3.8 含量測定 精密量取各樣品不同批次提取所得供試品溶液適量，按照“2.3.2”項下色譜條件測定并計算異葒草素量，測定值為3批次的均值。結果見表1。

2.4 鴨跖草的生物產量

樣品A1～A14每次采集10株，隨機選取3株，去根干燥后稱重，以平均值計。結果見表 1。

3 討論

試驗結果表明，不同采收期黔產鴨跖草中異葒草素的含量及生物產量均呈先升高后降低的動態變化趨勢，且兩者具有較高的相似度。從表1直觀分析可見，異葒草素含量以7月下旬最高，生物產量以8月下旬為高，7月與8月間的異葒草素含量和生物產量亦處于較高水平。為科學評價，試驗中采用異葒草素總量(異葒草素總量=異葒草素含量×生物產量)為考察指標，數據采用方差分析后顯示，7月和8月間采收的鴨跖草中異葒草素總量無顯著性差異，但與其他采收時間差異顯著。生物產量測定結果顯示，鴨跖草地上部分的產量不同器官比重順序依次為：葉>莖>花>果實，以葉的占比最大，花和果實的占比最小。7月與8月正是該植物的生長成熟期，植株生長茂盛，這兩月的生物產量處于較高水平，進入9月后，植株下半部分出現葉片枯萎或脫落及莖枯萎的現象，是生物產量逐漸降低的主要因素。8-9月為該植物的花期，9-10月為果期，開花結果均需要消耗一定的營養物質，其中可能也影響到異葒草素的合成與代謝，因而8月起異葒草素的含量呈逐漸降低趨勢。

表1 不同采收期鴨跖草中異葒草素含量和生物產量動態變化

本研究對全草入藥和地上部分入藥進行了對照試驗，結果顯示：7月30日采集的鴨跖草全草(含根)和地上部分生物產量分別為(12.68±0.37)g與(12.39 ± 0.49)g，兩者無顯著性差異，提示根的產量對兩種入藥方式的影響較小；異葒草素的含量測定值分別為(1.629±0.003)mg·g-1與(1.877±0.007)mg·g-1，全草的含量低于地上部分，且兩者具顯著性差異，究其原因可能與根中異葒草素的含量相對較低有關。

綜上所述，黔產鴨跖草若以異葒草素為質控指標，結合采收加工的科學性、便捷性，建議在植株生長茂盛，結果前采收地上部分入藥，采收時間以7-8月為宜。