輔助生殖技術致妊娠的早期自然流產絨毛染色體異常分析

趙 花 黃 芳 彭順英 何 鳳 李瓊珍 廣東省肇慶市第一人民醫院婦產科 526000

不孕不育癥在臨床生殖學上比較常見，近年來發生率逐年上升，并呈現出一定的年輕化趨勢，嚴重影響了人類的繁衍生息[1]。輔助生殖技術是治療不孕不育的重要手段，能夠有效地提升受精卵的著床率，進而提升臨床妊娠率，但是該輔助性技術也存在一定的局限，就是活產率比較低，臨床妊娠后潛在的流產率比較高[2]。相關數據調查顯示，輔助生殖技術臨床成功妊娠后，流產率約為10%～20%，并且絕大部分發生在孕早期[3]。誘發孕早期流產的因素比較多，但是對于借助生殖技術獲得臨床妊娠后發生的孕早期流產，是否與輔助生殖技術有關，臨床并未明確，因而有著較高的探究價值[4]。為此，本研究納入我院產科收治的200例孕早期流產孕婦，針對輔助生殖技術所致流產和自然流產絨毛染色體異常情況展開分析。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年10月—2019年10月在我院婦產科接受治療的孕早期自然流產孕婦200例進行研究，根據受孕類型分為A組和B組，各100例，A組年齡25～42歲，平均年齡(30.74±4.56)歲；孕周6～14周，平均孕周(8.12±1.34)周。B組年齡26～41歲，平均年齡(30.81±4.62)歲；孕周6～14周，平均孕周(8.06±1.31)周。兩組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：(1)年齡18～45周歲；(2)孕周6～14周；(3)簽署知情同意書；(4)經醫院倫理委員會批準；(5)臨床資料完整。排除標準：(1)合并嚴重心、肝、腎等器質病變；(2)伴有甲狀腺功能亢進、糖尿病等內分泌疾病；(3)合并感染、解剖等疾病；(4)孕期接觸有害物質史；(5)精神和認知異常，難以配合完成調查研究。

1.2 方法

1.2.1 絨毛組織提取處理：取流產清宮絨毛組織100mg，使用濃度為0.9%的生理鹽水反復沖洗，采用Qiagen QIAamp DNA Mini對全基因組DNA予以提取。利用凝膠電泳技術對提取到的絨毛組織DNA進行質量檢測，保證所提取的絨毛組織DNA濃度在30μg/L以上。

1.2.2 絨毛組織培養及染色體分析：提取到的絨毛組織放置無菌玻璃培養皿中，使用雙抗清潔組織將組織中的血塊進行清理，同時絨毛肢一并挑出并剪碎，放入離心管進行離心處理，將上層清液分離，留取下層清液加入膠原酶和胰酶，保存于保溫箱中。對絨毛的狀態進行詳細觀察，待出現散開現象后，將母牛血清加入其中，并放置在電子顯微鏡下，對細胞形態予以觀察，若發現成片狀細胞后，再次換新鮮培養液，加入秋水仙素，放置恒溫培養箱培養4h。取出并去除上層血清，放入水浴箱2h，之后將標本取出，再次離心處理，將上層清液去除。調成細胞懸液，放在Leica 電子顯微鏡下進行閱片，該工作由科室2名經驗豐富的醫師完成。

2 結果

2.1 兩組染色體異常檢出情況的比較 A組染色體異常率為54%(54/100)高于B組的51%(51/100)，但差異無統計學意義(χ2=0.181,P=0.671>0.05)。

2.2 兩組染色體異常類型情況的對比 在染色體結構異常、數目異常等方面，A組和B組相比較，差異無統計學意義(χ2=0.098，P=0.754>0.05)。見表1。A組數目異常方面，三體42例，雙重三體6例，X單體4例，三倍體2例；B組數目異常方面，三體40例，雙重三體5例，X單體4例，三倍體2例。

表1 兩組染色體異常類型情況的對比[n(%)]

2.3 兩組不同年齡層次和不同流產次數染色體異常情況的比較 A組和B組在不同年齡層次絨毛染色體異常率方面，差異有統計學意義(P<0.05)；A組和B組在既往不同流產次數絨毛染色體異常率方面，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

3 討論

隨著醫療衛生事業的不斷發展，生殖技術水平也有了顯著提高，輔助生殖技術的逐漸成熟及應用，在很大程度上為不孕不育夫婦提供了另一種懷孕手段[5]。但是同自然情況下一樣，輔助生殖技術的應用，并不能保證順利分娩生育，依舊有一定的流產概率，概率一般為10%～20%。因此，對于采用輔助生殖技術輔助懷孕的夫婦而言，必須做好可能在孕早期流產的心理準備，以便減輕流產發生后帶來的痛苦。

表2 兩組不同年齡層次和不同流產次數染色體異常情況的比較[n(%)]

研究表明，孕早期自然流產的誘發因素比較多，大致可以分為胚胎因素、母體因素、環境因素和免疫因素，而胚胎因素中最為常見的因素是染色體異常因素[6]。相關調查數據顯示，在孕早期自然流產的胚胎因素中，因染色體異常導致的流產率占到了總數的1/2以上[7]。由此可以看出，染色體異常與孕早期自然流產之間的關系，但是關于輔助生殖技術所致孕早期流產染色體異常的研究比較少，其間的關系需進一步探究。本文結果顯示，A組和B組絨毛染色體異常率相比較，差異無統計學意義(P>0.05)，說明了輔助生殖技術不會增加婦女染色體發生異常的風險。進一步分析A組和B組絨毛染色體異常情況發現，數目異常為主要的異常類型，并且三體最為常見，但相互比較差異不顯著(P>0.05)。之所以絨毛染色體數目異常較多，可能是因為雙親之一的配子形成時，某一染色體不分離，使得該染色體增加或減少1條，三體性或單性染色體嚴重干擾胚胎的發育，致使流產出現[7-8]。年齡是否與染色體異常有關，盡管臨床有見報道，但并不明確。本文針對不同年齡與染色體的異常關系進行了研究，結果顯示A組年齡≥35周歲絨毛染色體異常率低于B組，而<35周歲的絨毛染色體異常率高于B組(P<0.05)，表明了高齡與染色體異常率有關。但是分析A組和B組不同流產次數的染色體異常率相比較，差異無統計學意義(P>0.05)，提示流產次數與染色體 異常檢出率之間無關。

綜上所述，輔助生殖技術的應用，并不會增加自然流產胚胎染色體異常率，絨毛染色體異常率與流產孕婦的年齡相關，與孕次不相關。