miR-155及IL-35在哮喘患者外周血中的表達及其潛在臨床意義

黃琰 鄒雯 謝林艷 鄭蓉蓉 王一江

資料與方法

一、一般資料

前瞻性的選取2016年1月至2018年12月期間我院收治的哮喘病患者62名為觀察組，同期選取于我院體檢的健康者62名作為對照組。入選標準：1)哮喘患者的診斷符合中華醫學會呼吸病學分會哮喘學組制定的支氣管哮喘指南標準；2)患者年齡18～70周歲；3)哮喘病程大于10年者；4)近四周內未使用糖皮質激素(包括吸入類糖皮質激素)或者免疫抑制劑者；排除標準：1)合并肝腎功能不全者；2)合并免疫系統疾病者；3)哮喘合并其它肺部疾病如COPD者；4)存在其它組織器官感染需抗感染治療者；5)凝血功能障礙者；6)既往存在肺部外傷或者手術者；7)哮喘急性加重期或哮喘持續期。兩組患者均對此研究知情并簽署同意書，本研究經本院倫理委員會批準通過。

二、研究方法

1 研究對象外周血的抽取 獲取兩組研究對象空腹時晨外周靜脈血，量約6～8 mL，置抗凝管中，然后放入離心機，以3000r/分的速度離心，離心10 min，分離上清液，然后將上清液放入-80℃保存備用。

2 miR-155含量檢測 采用實時定量PCR檢測兩組研究對象外周血中miR-155含量水平，使用用Trizol 試劑從上述樣本中抽提總RNA，用紫外分光光度計測總RNA含量，A260 /A280值在1.8～2.0之間提示標本方可用。然后對總RNA 進行電泳，反轉錄為單鏈cDNA。最后在熒光定量PCR儀上分別對miRNA-155和U6進行擴增。采用2-△△Ct計算miRNA-155 的相對表達量。

3 IL-35、IL-4及IL-6的監測方法 應用酶聯免疫吸附法試劑盒(酶聯免疫分析儀：Infinite F50,帝肯公司，瑞士；試劑盒，Santa公司 美國)檢測IL-35、IL-4和IL-6的血清含量，具體操作方法按照試劑盒的方法操作。……