注射制劑輔料甘露醇細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究

鄧莎 羅潔 張德波 邊原

【摘 要】目的：建立輔料甘露醇的細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)方法。方法：按照中國藥典2015年版四部通則1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法和中國藥典2015年版四部通則9301注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則[2-4]進(jìn)行試驗(yàn)，內(nèi)毒素限值設(shè)定為L=1.0EU/g。結(jié)果：甘露醇稀釋濃度為0.03g/ml時，對鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)不產(chǎn)生干擾。結(jié)論：輔料甘露醇可以建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】：甘露醇;注射制劑;細(xì)菌內(nèi)毒素;干擾試驗(yàn)

Abstract： OBJECTIVE To establish a bacterial endotoxin test（BET） for mannitol. METHODS According to Ch.P 2015 Vol Ⅳ general principles 1143 and Ch.P 2015 Vol Ⅳ general principles 9301. Set the endotoxin limit： L = 1.0 EU/g. RESULTS There was no interference in the agglutinate reaction between the sample and relative TAL with the ethylenediamine concentration of 0.03g/ml. Need to use the sensitivity of 0.03 EU/ml or higher sensitivity TAL. CONCLUSION Mannitol as the excipient of injection preparation can establish the quality standard of bacterial endotoxin test.

Key words： Mannitol; Injection preparation; Bacterial endotoxin; Interference test

【中圖分類號】R927【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）07-21--01

甘露醇，白色針狀結(jié)晶體，易溶于水，有類似蔗糖的甜味。可用于治療肝病、糖尿病、艾滋病、心臟病等，在臨床上被廣泛使用[1]。本文研究的甘露醇作為注射制劑生產(chǎn)中添加的輔料，為控制甘露醇細(xì)菌內(nèi)毒素含量，確保相關(guān)注射制劑的安全性，研究起草輔料甘露醇細(xì)菌內(nèi)毒素檢查標(biāo)準(zhǔn)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 鱟試劑

標(biāo)示靈敏度（λ）0.03EU/ml，規(guī)格：0.1ml/支，批號：1804121;標(biāo)示靈敏度（λ）0.06EU/ml，規(guī)格：0.1ml/支，批號：1808220;標(biāo)示靈敏度（λ）0.125EU/ml，規(guī)格：0.1ml/支，批號：1806252，湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn)。標(biāo)示靈敏度（λ）0.03EU/ml，規(guī)格：0.1ml/支，批號：17080612;標(biāo)示靈敏度（λ）0.06EU/ml，規(guī)格：0.1ml/支，批號：17061112;標(biāo)示靈敏度（λ）0.125EU/ml，規(guī)格：0.1ml/支，批號：18050212，福州新北生化工業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水

規(guī)格：100ml/瓶，批號1710260，含細(xì)菌內(nèi)毒素<0.003EU/ml，湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn)。

1.3 細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（凍干）

效價(jià)：80EU/支，批號：150601-201784，中國食品藥品檢定研究院。

1.4 藥品

甘露醇，藥用輔料，白色粉末，批號：YPJT1801721-1、YPJT1801721-2、361805024，規(guī)格：約5g/支，由企業(yè)提供。

1.5 儀器

ZRD-A7140型十段編程鼓風(fēng)干燥箱，溫度范圍5-300℃;TAL-40試管恒溫儀，控溫精度37±0.2℃，孔間溫差≤0.1℃。ZH-2型孔式旋渦混合儀。

2 方法與結(jié)果

2.1 內(nèi)毒素限值（L）的確定

本品作為藥用輔料，添加于鹽酸帕洛諾司瓊注射液、唑來膦酸注射液中，根據(jù)其添加的劑量及兩種注射液臨床用法用量，參考《中國藥典》2015年二部“甘露醇注射液”標(biāo)準(zhǔn)中細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)內(nèi)毒素限值， “取本品，依法檢查（附錄 ⅪE），每1g甘露醇中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于1.25EU ”[2]。本著從嚴(yán)的原則，確定本品的內(nèi)毒素限值為L=1.0EU /g 。

2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核

以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，并配制成含內(nèi)毒素2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ系列濃度的溶液，依法進(jìn)行加樣操作。每一濃度平行做4支，同時用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水做2支陰性對照，記錄結(jié)果，并按式λC=antilg（∑X/4）計(jì)算λC值，見表1。

表1結(jié)果表明：每一批鱟試劑靈敏度測得值均在0.5λ～2.0λ范圍內(nèi)，符合要求。復(fù)核的鱟試劑可按標(biāo)示靈敏度值使用。

2.3 干擾預(yù)試驗(yàn)

取本品一批（批號：YPJT1801721-2）用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解并配制含甘露醇0.25g/ml、0.125g/ml、0.06g/ml、0.03g/ml系列濃度。依法操作進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見表2。

表2預(yù)試結(jié)果顯示：供試品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋制成0.125g/ml及其以下濃度的溶液可能對反應(yīng)無干擾作用。