一例香豬感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒的診斷與防控

楊通蓮 汪忠榮 梁美英

（1.從江縣動物疫病預防控制中心，貴州從江 557400；2.黔東南州動物疫病預防控制中心，貴州凱里 556000）

豬繁殖與呼吸綜合征常稱豬藍耳病，由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種高度接觸性傳染病[1]。該病毒可感染不同品種、性別和年齡的豬，典型癥狀：母豬高熱和繁殖障礙；仔豬與肥育豬呼吸道困難，給養豬業造成很大的經濟損失。2020年8月15日某合作社香豬場向縣動物疫病預防控制中心報告，該場飼養的153日齡香豬有4頭不食，用阿莫西林和卡拉霉素等治療未見好轉。縣級獸醫技術人員立即到現場進行調查、采樣送獸醫實驗室檢測，現將有關診斷情況報告分析。

1 材料

1.1 病料

無菌采集發病香豬肝臟、肺臟、脾臟、扁桃體和淋巴結等組織。

1.2 試劑

豬藍耳病變異株病毒直接擴增RT-qPCR抗原檢測試劑盒（批號：20191016414，中國農業科學院蘭州獸醫研究所）由貴州省動物疫病預防控制中心贈送，豬瘟通用型熒光RT-PCR檢測試劑盒（批號：CSFV200313401）購于上海快靈生物科技有限公司。

2 方法

2.1 細菌分離培養

在凈化工作臺中，無菌操作，挑取肺臟，腎臟和心臟樣品接種到LB培養基，在生化培養箱中37℃培養24h，然后觀察。

2.2 病毒核酸檢測

（1）根據試劑盒說明書操作，取10mg組織樣本放入1.5mlEP管中，加入500μl裂解液B1，用組織研磨器充分研磨。

（2）在研磨液中加入500μl裂解液B2混勻。

（3）常溫12000rpm離心2min，去150μl上清液于干凈的EP管中，即為模板。

（4）按說明書要求配制反應液和設置反應程序。

（5）結果判定

①豬藍耳病

陽性對照擴增曲線有明顯對數擴增曲線，且Ct值≤25，陰性對照擴增曲線無Ct值顯示，二者均成立才可判定試驗成立，否則無效。

陽性：檢測樣品Ct值≤30，為豬藍耳病毒變異株核酸陽性。陰性：樣品Ct值＞35或無數值，判為陰性。可疑：若30＜Ct值≤35時為可疑，需重新對樣品裂解處理檢測，如仍為可疑，判為陽性，若重復檢測Ct值＞35，判為陰性。

②豬瘟

陽性對照擴增曲線有明顯對數擴增曲線，且Ct值＜30，陰性對照擴增曲線無Ct值或Ct值＞34或無擴增曲線，二者均成立才可判定試驗成立，否則無效。

陽性：檢測樣品Ct值＜30，為豬瘟核酸陽性。陰性：樣品Ct值＞34或無數值，判為陰性。可疑：若30≤Ct值≤34時為可疑，需重新對樣品裂解處理檢測，如仍為可疑，判為陽性，若重復檢測Ct值＞35，判為陰性。

3 結果

3.1 病理剖解

剖檢1頭病豬可見：全身淋巴結出血、腫大；肺臟暗紅色，出血、腫脹；肺實變；心外膜有針尖大的出血點，喉頭和膀胱黏膜均有出血點；腎臟有出血點、腫大（圖1）；肝臟質硬、腫大、暗紅色（圖2）；脾臟腫大、出血。

圖1 腎臟腫大、有出血

圖2 肝臟腫大、出血

3.2 細菌分離培養

培養24后觀察，未見細菌生長。

3.3 熒光PCR檢測

實時熒光RT-PCR檢測，結果豬藍耳病毒變異株核酸陽性（見圖3），豬瘟病毒核酸陰性。

4 防控措施

4.1 緊急接種豬藍耳病疫苗

對全場香豬群進行超劑量緊急免疫，按育肥豬2頭份每頭，種豬5頭份每頭接種，接種時在接種好的豬身上做好標記和免疫記錄，做到一頭不漏。

4.2 加強管理、改善飼養條件

首先對圈舍徹底清掃后，消毒。改變原飼養方式，原只喂精料的，現改為精料加青汁飼料（南瓜、紅薯藤等）。在飲用水中加入少量高錳酸鉀消毒。其次完善防疫設施，嚴格控制工作人員隨意進出，嚴防鳥類進入圈舍覓食，并對病豬作無害化處理。加強滅鼠滅蚊。

圖3 豬藍耳病擴增結果

5 討論

調查可知，該場存欄香豬280頭，其中母豬20頭，肥豬260頭，8月 日開始發病，期間死亡6頭，4頭病豬體溫平均41.1℃，確診后，病豬全部撲殺并無害化處理。豬藍耳病疫苗注射后一周后，疫情得到控制，未發現新病例，豬群食欲逐漸恢復，至8月底，其疫情完全獲得控制。

該場2019年8月建成，9月開始引進香豬，豬場離村公路局里不到100米，且在村寨入口處，同時本村公用垃圾池養殖場旁公路邊。場內沒有更衣室，只有一道消毒池進場，管理不規范，其消毒池干枯，無消毒水，消毒池和消毒間形同虛設，外來人員可以進出隨便，存在重大的疫病傳播隱患，為此次疫病發生埋下了伏筆。一是豬場內消毒設施缺乏，噴霧器等設備幾乎沒有，據工作人員介紹，場內沒有進行定期消毒；二是沒有免疫程序，免疫根據政府每年的春秋兩防進行，場內的技術人員為村防疫員，無專職技術員，免疫工作由其負責，導致免疫次數不夠，免疫病種少，造成豬場缺乏抵御重大疾病。飼養員是村里貧困戶，缺乏規模飼養場實踐經驗，無疫病防控意識，豬發病后管理人員未引起重視，沒有采樣檢測確診，全憑借經驗用抗生素治療。查閱獸醫免疫注射記錄，發現獸醫記錄不全，檢查場內現有疫苗，部分疫苗真空度不夠，影響疫苗效價；觀察飲水，顏色泛黃、嘗試味苦，不符合飲用標準；飼料存放處，蠅多，天氣晝夜溫差較大等原因，導致豬群的抗病力下降。而最初發病的肥豬，據調查也是飼養在管理和通風最差的一棟育肥豬舍內，綜合分析，應是多方面的原因共同作用，導致豬藍耳病的感染[2]。此次疫病的發生使我們更為清楚的認識到防疫工作和飼養管理同等重要，嚴格科學的防疫措施能有效的阻止病原的入侵，合理的免疫程序和有效的疫苗免疫，能保證豬群維持較高的抗體水平，進而增強抵御傳染病的能力，是創造經濟效益的基礎。