高效液相色譜法測定果汁飲料中安賽蜜

王少偉　張金秋　戚繁　徐春祥

摘 要：建立了果汁飲料中安賽蜜的高效液相色譜測定方法。采用C18色譜柱，以20 mmol·L-1乙酸銨與甲醇（98∶2）為流動相，流速1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃，二極管陣列檢測器，檢測波長214 nm。結果表明：該方法安賽蜜回歸方程線性關系良好，相對標準偏差<3.2%（n=6），回收率在97.5%～99.1%。該方法簡便快速，適用于果汁飲料中安賽蜜的檢測。

關鍵詞：果汁飲料;安賽蜜;高效液相色譜法

Abstract：The analysis is performed on a C18 column using 20 mmol·L-1 sodium acetate solution and methanol as the elution. The flow rate is 1.0 mL·min-1， the column temperature is 30 ℃. The detector is DAD， the detection wavelength are at 214 nm The results show that a good linear relationship. The RSD is below 3.2% （n=6）， the average recovery is 97.5%～99.1%.The method is simple， rapid， repeatable and which could be applied for the analysis of additives in Fruit juice beverage.

Key words：Fruit juice beverage; Acesulfame; High performance liquid chromatography

中圖分類號：TS202.3

果汁飲料是由原果汁或濃縮果汁加糖、酸等調配成的風味飲品[1]。近年來，隨著消費者消費能力的提高，消費者對果汁飲品的營養價值與安全性更加重視。我國果汁飲品生產工藝多采用安賽蜜作為甜味劑[2]。安賽蜜是一種人工合成甜味劑，具有在人體內不代謝、不吸收、對熱和酸穩定性好等特點。但是過量食用含合成甜味劑的食品以及含合成甜味劑超標的食品會對人體的肝臟和神經系統造成危害[3-6]。研究果汁飲料中安賽蜜的測定方法，對提高我國果汁飲料質量有著重要的意義。

目前我國果汁飲料中安賽蜜的檢測依據是

GB/T 5009.140-2003《飲料中乙酰磺胺酸鉀的測定》。日常檢驗中發現，標準中前處理方法對果汁中色素和蛋白質不能有效進行去除。標準規定的流動相配制過于復雜，不適用于市面上主流高效液相色譜儀的操作。本研究針對果汁飲料基質采用蛋白沉淀劑+C18固相萃取前處理法，以甲醇-乙酸銨作為流動相，紫外可變波長檢測，方法快速準確，檢出限能達到國家標準要求。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

（1）儀器。高效液相色譜儀，電子天平，超純水儀。

（2）試劑。甲醇（HPLC，TEDIA），20 mmol·L-1乙酸銨溶液，亞鐵氰化鉀溶液，乙酸鋅溶液。

1.2 標準溶液配制

精密稱取安賽蜜標準品適量于10 mL容量瓶中，用水配制1 mg·mL-1標準儲備溶液。再用水稀釋成

0.001 mg·mL-1、0.005 mg·mL-1、0.010 mg·mL-1、

0.020 mg·mL-1、0.050 mg·mL-1、0.100 mg·mL-1和

0.200 mg·mL-1系列標準工作溶液，濃度由低到高進樣，以待測物質峰面積-濃度作圖，得到標準曲線回歸方程。

1.3 樣品處理

（1）方法1（國標方法）。吸取2 g樣品，加水約20 mL混勻后，離心15 min（8 000 r·min-1），上清液全部轉入中性氧化鋁柱，待水溶液流至柱表面時，用流動相洗脫。收集洗脫液25 mL，混勻后，超聲脫氣，此液作HPLC分析用。

（2）方法2。吸取2 g樣品于50 mL 離心管中，加水15 mL，50 ℃超聲30 min。加入2 mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入2 mL乙酸鋅溶液，搖勻，在

8 000 r·min-1條件下，離心5 min。將上清液完全轉移至C18固相萃取小柱中，待水溶液流至柱表面時，用流動相洗脫。收集洗脫液25 mL，混勻后，超聲脫氣，經微孔濾膜過濾，濾液待上機分析。

1.4 色譜條件

色譜柱：C18色譜柱（symmetry shield RP18， 5μm，4.6 mm×250 mm）;流動相為20 mmol·L-1乙酸銨∶甲醇=98∶2;流速1.0 mL·min-1;進樣量5 μL;柱溫30 ℃;檢測波長214 nm。

2 結果與分析

2.1 樣品前處理

方法1為GB/T 5009.140-2003規定的前處理方法。采用該前處理方法，大批量進樣時，會出現色譜柱柱效降低，拖尾嚴重等問題。原因可能是該方法未能有效去除果汁飲料中的蛋白質與色素等大分子物質。這些物質進入色譜柱后，會堵塞柱頭，影響色譜柱壽命。本實驗采用方法2前處理方式，先用蛋白沉淀劑沉淀果汁飲料中蛋白質，再經過C18小柱去除樣液中色素及大分子物質。經試驗比較兩種前處理方法樣品中安賽蜜測定結果無明顯差異（見表1），檢出量結果偏差1.8%。樣品經方法2前處理后，樣液雜質較少，實驗耗材色譜柱壽命延長。

2.2 流動相及洗脫條件的優化

GB 5009.140-2003《飲料中乙酰磺胺酸鉀的測定》中規定的流動相為0.02 mol·L-1硫酸銨（740～800）+甲醇（170～150）+乙腈（90～50）+10%硫酸（1%）。實驗中發現，該流動相配制較復雜，強酸性物質（硫酸）會嚴重損傷色譜柱。因此，本實驗采用流動相為20 mmol·L-1乙酸銨（A相）、甲醇（B相）。

研究中分別比較了流動相比例A∶B=90∶10與A∶B=98∶2兩種比例條件下，果汁飲料中安賽蜜的分離效果。圖1、圖2為A∶B=90∶10時標準品與樣品的色譜圖，安賽蜜在A∶B=90∶10條件下，出峰時間為5.78 min左右。

圖3、圖4為A∶B=90∶10時標準品與樣品的光譜圖，圖4表明：A∶B=90∶10時，果汁飲料目標峰在202.07 nm處有較大吸收，與圖3安賽蜜標準品光譜圖有顯著差異。分析可能是色譜峰中包含其他的雜質，存在共溶出現象。圖5為流動相比例A∶B=98∶2時樣品色譜圖，結果表明，在流動相A∶B=98∶2時，果汁飲料中安賽蜜與干擾物分離度較好。因此，流動相選用20 mmol·L-1乙酸銨（98%）、甲醇（2%）。

2.3 標準曲線及線性范圍

標準曲線及最低檢出限標準系列物質按儀器設定條件進行測定，以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到相應的線性回歸方程，同時以3倍信噪比計算安賽蜜的檢出限，具體結果見表2，安賽蜜在1～200 μg·mL-1濃度內呈現很好的線性關系，相關系數為0.999 8。

2.4 準確度試驗

以市場上常見不含安賽蜜的果汁飲料樣品為代表樣品，分別按高、中、低3個濃度添加安賽蜜標準品，按優化的色譜條件進行平行6次分析，結果見表3。

3 結論

本文建立了一種測定果汁飲料中安賽蜜的高效液相法。樣品前處理采用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅作為蛋白沉淀劑，再通過C18小柱去除果汁飲料中色素以及大分子雜質，回收率高。方法耗時短，操作簡單，適用于大量樣品的快速檢驗，可作為國家標準方法的補充進行推廣。

參考文獻：

[1]孫立臻，周禹君，尹麗麗，等.高效液相色譜法同時測定飲料中10種天然甜味劑[J].食品工業，2019，40（10）：344-348.

[2]鄧迎春，徐曉楠，郭旭光，等.高效液相色譜法同時測定食品中安賽蜜、苯甲酸（鈉）、山梨酸（鉀）、脫氫乙酸（鈉）和糖精鈉[J].中國衛生檢驗雜志，2020，30（8）：918-921.

[3]王智瑋，李 莉.超高效液相色譜-質譜/質譜法測定葡萄酒中安賽蜜含量的不確定度評估[J].食品安全導刊，2020（6）：115-116.

[4]戚 繁，王少偉，顏春榮，等.高效液相色譜法同時測定甜油中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉與脫氫乙酸[J].分析檢測，2018（20）：101-104.

[5]陳 健，林 真，陳 馳，等.高效液相色譜法同時檢測糕點中幾種天然甜味劑的探索研究[J].2012（3）：213-217.

[6]李花覺.超高效液相色譜法檢測飲料中山梨酸、苯甲酸、糖精鈉、咖啡因、安賽蜜[J].2018（21）：137-139.

作者簡介：王少偉（1987—），男，碩士，工程師;研究方向為食品科學。