氣相色譜質譜法同時測定動物組織中鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺及氯霉素

張春輝

【摘 要】目的：建立食品中萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅和氯霉素的氣相色譜質譜聯檢驗方法。方法：樣品經提取后經衍生化試劑衍生，氣相色譜質譜聯用儀分析。采用EI離子源電離離子定性原則結合保留時間進行確證。結果：在適宜的質譜條件下，電子轟擊電離可獲得穩定可靠的碎片離子。鹽酸克倫特羅線性范圍為10～200μg/L，相關系數r=0.999 3，回收率為95.3%～96.8%，RSD%為1.51～1.76。氯霉素線性范圍為10～200μg/L，相關系數r=0.999 9，回收率為92.1%～93.1%，RSD%為1.62～1.82。萊克多巴胺線性范圍為10～200μg/L，相關系數r=0.999 3，回收率為91.6%～92.8%，RSD%為1.91～2.26。結論：該法快速、準確、靈敏，適用于動物組織中萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅和氯霉素的確證檢測。

【關鍵詞】氣相色譜質譜法;鹽酸克倫特羅;萊克多巴胺;氯霉素

【中圖分類號】S859.84 【文獻標識碼】A 【文章編號】1674-0688（2020）09-0079-03

0 引言

鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和氯霉素曾作為飼料添加劑廣泛應用于畜牧業生產，但在使用中發現其在動物源性食品中殘留會引起多種急性和慢性毒副作用，危害人體健康。目前，這3種化合物已被列為禁用獸藥。獸藥殘留相關的食品安全問題的頻發，也使其成為國際貿易中的非關稅性貿易壁壘，引起國際社會和各國政府的高度重視，紛紛采取措施對獸藥殘留進行嚴格監控。因此，發展快速、簡易、高靈敏、高通量的獸藥殘留檢測技術已成為當前的迫切需要[1]。

目前，關于食品中鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和氯霉素殘留的檢測方法主要有液相色譜法（LC）[2-8]、氣相色譜法（GC）[9-11]、液相色譜-串聯質譜聯用法（LC-MS/MS）[12-15]、氣相色譜質譜法（GC-MS）[16-18]，GC、LC法由于采用氫火焰離子化檢測器和紫外檢測器檢測，缺乏對色譜流出物分子結構的鑒別，依賴保留時間定性，當存在雜質干擾或保留時間漂移時就無法準確定性識別。氣相色譜質譜法中鹽酸克倫特羅等采用的是EI離子源，氯霉素采用的是負化學離子源，在相同的離子源下不能同時測定。因此，建立一種能同時測定動物組織中鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺及氯霉素的檢驗方法，對食品安全監測具有重要的意義。

本文建立了動物組織中鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺及氯霉素的氣相色譜質譜檢測方法，該方法操作簡單，干擾小，結果精密度良好，準確度可靠，適用于動物組織中萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅及氯霉素的測定。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

甲醇、甲苯為色譜純（德國CNW公司），正己烷、乙酸乙酯為色譜純（美國honeywell公司），雙三甲基硅烷三氟乙酰胺BSTFA、三甲基氯硅烷TMCS為分析純，無水硫酸鈉、氯化鈉、碳酸鈉、氨水為分析純（西隴科學股份有限公司），鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、氯霉素（國家標準物質中心）。

1.2 儀器

儀器包括GCMS6800型氣相色譜質譜聯用儀（天瑞儀器儀器股份有限公司）、超聲波清洗機（深圳市潔盟清洗設備有限公司）、臺式高速離心機（鹽城市凱特實驗儀器有限公司）、分析天平（上海精科天美科學儀器有限公司）。

1.3 儀器條件

1.3.1 色譜條件

色譜柱：5%苯基甲基聚硅烷彈性毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）。進樣口溫度：270 ℃。升溫程序：初溫120 ℃保持3 min，以25 ℃/min升至230 ℃，保持3 min，再以25 ℃/min升至280 ℃保持3 min。載氣：高純氦氣（99.999%）。流速：1.5 mL/min，不分流進樣，不分流時間0.5 min。進樣量：2μL。

1.3.2 質譜條件

EI源：溫度230 ℃。電子能量：70 eV。氣質接口溫度：280 ℃。檢測電壓：1 400 V。質量掃描范圍：50～550 u。

監測離子：鹽酸克倫特羅為86、262、243 m/z，定量離子為86 m/z;氯霉素為225、208、194 m/z，定量離子為225 m/z;萊克多巴胺為250、179、267、502 m/z，定量離子為250 m/z。

1.4 分析步驟

1.4.1 試樣提取

稱取試樣5 g（精確到0.001 g），置于50 mL離心管中，加乙酸乙酯20 mL，再加10%碳酸鈉溶液10 mL，10 000 r/min以上均質60 s，8 000 r/min離心10 min，取上清液至離心管中，殘渣中加入乙酸乙酯10 mL在漩渦混合器上混合1 min，8 000 r/min離心10 min，取上清液至離心管中，合并上清液;在收集的有機溶劑中加0.1 mol/L鹽酸5 mL，充分混勻后，在8 000 r/min離心5 min，取下層液，同樣步驟重復萃取一次，合并萃取液，待凈化。

1.4.2 試樣凈化

依次用甲醇5 m L、水5 mL、30 mmol/L鹽酸溶液5 mL潤洗SCX陽離子交換固相萃取柱，取上述上清液過柱，棄去流出液，并依次用水5 mL和甲醇5 mL淋洗柱子，抽干;用4%氨化甲醇5 mL洗脫，收集洗脫液50 ℃氮吹至干，吹干物待衍生。

1.4.3 衍生化

吹干物加入甲苯100μL和衍生劑（BSTFA+TMCS 99∶1）100μL，加塞后于渦旋混合器充分混勻，在70 ℃恒溫衍生60 min，氮氣吹干，加甲苯0.5 mL溶解供GC-MS分析。

將鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、氯霉素標準溶液用甲醇配制成1、10、20、50、100、200μg/L的標準使用液，加4%氨化甲醇5 mL后，氮氣吹干，與樣品同步進行衍生化。

1.4.4 氣相色譜-質譜測定

（1）定性方法。在相同試驗條件下，試樣峰與標準峰相對保留時間是相同的，用nist庫進行離子比對定性，試樣峰中選擇性離子相對強度不超過標準溶液相應選擇離子相對強度平均值±20%。

（2）定量方法。在規定的色譜條件下，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，制作標準曲線，采用外標法定量。

2 結果與討論

2.1 樣品色譜圖

鹽酸克倫特羅標準溶液色譜圖（50μg/L）、氯霉素標準溶液色譜圖（50μg/L）、萊克多巴胺標準溶液（50μg/L）定量離子色譜圖、空白樣品加標（50μg/L）TIC總離子流圖分別如圖1至圖4所示。

2.2 線性實驗

鹽酸克倫特羅在10～200μg/L范圍內以峰面積對濃度作圖，所得曲線方程Y=2 360.135 4X+39 823.416 9，相關系數r=0.999 3。

萊克多巴胺在10～200μg/L范圍內以峰面積對濃度作圖，所得曲線方程Y=103.403 4X-119.706 2，相關系數r=0.999 3。

氯霉素在10～200μg/L范圍內以峰面積對濃度作圖，所得曲線方程Y=2015.795 1X-6 140.837 6，相關系數r=0.999 9。

2.3 回收率和精密度

在雞肉、豬肉、蝦肉中分別加入鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、氯霉素50μg/kg，平行試驗6次，計算其添加回收率及重復性相對標準偏差。

雞肉中鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、氯霉素的添加回收率和重復性相對標準偏差見表1。

2.4 結果討論

采用電子轟擊離子源氣相質譜法同時測定動物組織中萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅和氯霉素。在50μg/kg添加水平下，加標回收率在90%以上。本法快速、準確、靈敏，適用于動物組織中萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅和氯霉素的確證檢測。同時，本法首次采用電子轟擊離子源氣相質譜法測定物組織中氯霉素，填補了國內無電子轟擊離子源氣相質譜法測定氯霉素的技術空白。

參 考 文 獻

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