高效液相色譜法同時(shí)測定化妝品中七種禁用染料

張碧宇 周建峰

摘 要：建立高效液相色譜法同時(shí)測定化妝品中七種禁用染料（蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ、對(duì)位紅、顏料橙5、蘇丹藍(lán)Ⅱ）。實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)地優(yōu)化了影響萃取效率的因素（包括萃取溶劑的種類、萃取方法）和色譜條件（流動(dòng)相的種類、比例）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：以乙腈為萃取溶劑，超聲20min，過中性氧化鋁小柱后氮吹定容，采用Agilent C18柱，乙腈--水作為流動(dòng)相，檢測波長為478nm，流速為1.0mL/min，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)7種目標(biāo)物的理想分離檢測。該方法具有良好的線性（R2=0.999），檢出限為0.5mg/kg，回收率為83.4%-107.2%，可用于化妝品中7中禁用染料的測定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜;禁用染料;化妝品

目前，國內(nèi)測定化妝品中著色劑的方法主要有高效液相色譜法[1]及高效液相--質(zhì)譜聯(lián)用法[2]、氣相色譜法及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用[3]、薄層色譜法、毛細(xì)管電泳、熒光光度法[4]等。但未有蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ、蘇丹藍(lán)Ⅱ、顏料橙5、對(duì)位紅7種禁用染料同時(shí)檢測的方法和標(biāo)準(zhǔn)。本文采用超聲萃取目標(biāo)物，高效液相色譜法同時(shí)測定化妝品中7中禁用染料的含量，紫外吸收光譜定性，外標(biāo)法定量。方法簡單、快速、準(zhǔn)確，能有效測定化妝品中7中禁用染料的含量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑材料

1.1.1 儀器

Waters公司Alliance 2695/2996液相色譜儀（配PDA檢測器），超聲波發(fā)生器、水浴加熱氮吹儀、高速冷凍離心機(jī)、渦旋混合儀、天平。

1.1.2 試劑和材料

標(biāo)準(zhǔn)樣品（蘇丹紅Ⅰ，蘇丹紅Ⅱ，蘇丹紅Ⅲ，蘇丹紅Ⅳ，對(duì)位紅，顏料橙5，蘇丹藍(lán)Ⅱ），乙腈（色譜純，分析純）、丙酮（分析純）、四氫呋喃（分析純），中性氧化鋁柱（使用前用5mL乙腈活化）。

1.2 樣品前處理

稱取1.0g（精確至0.001g）樣品至50mL離心管中，眼影、腮紅樣品中加入10mL乙腈溶解，口紅樣品中加入10mL丙酮溶解，混勻，超聲20min。5000r/min離心3min，重復(fù)提取一次，合并上清液過中性氧化鋁小柱（使用前用5mL乙腈活化），收集濾液，在50℃水浴下氮吹至1mL，定容，過0.45μm有機(jī)濾膜，待測。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)樣品的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別準(zhǔn)確稱取7種禁用染料的標(biāo)準(zhǔn)品，顏料橙5用四氫呋喃、二甲基亞砜、乙腈的混合溶液（體積比為5：1：4）溶解，其他標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈溶解，分別配置成100μg/mL的儲(chǔ)備液，4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)混合溶液：分別適量移取上述儲(chǔ)備液至10mL容量瓶中，用乙腈定容，配制成濃度分別為0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 儀器條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18，5μm，4.6×250mm;流動(dòng)相：乙腈+水=90+10;流速：1.0mL/min;進(jìn)樣量：20μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品中目標(biāo)物提取方法的優(yōu)化

2.1.1 萃取溶劑的選擇

分別采用甲醇、乙腈、丙酮作為萃取溶劑做加標(biāo)萃取實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，眼影、腮紅在乙腈中溶解度較好，口紅在乙腈中不易溶解，在丙酮中有較好溶解度。因此，眼影、腮紅以乙腈為萃取溶劑，口紅以丙酮為萃取溶劑。

2.1.2 萃取方法的選擇

分別選取超聲和漩渦萃取兩種方法進(jìn)行加標(biāo)萃取試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，超聲更容易溶解樣品，因此選用超聲作為萃取方法。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

2.2.1 流動(dòng)相的選擇

分別選用乙腈+水，乙腈+0.02mol/L乙酸銨溶液，甲醇+水，甲醇+0.02mol/L乙酸銨溶液作為流動(dòng)相，乙腈+水和乙腈+0.02mol/L乙酸銨溶液具有較好的分離效果，出于簡化實(shí)驗(yàn)步驟的考慮，選用乙腈+水作為流動(dòng)相。

2.2.2 流動(dòng)相比例的選擇

分別設(shè)置多個(gè)不同梯度和等度乙腈和水的流動(dòng)相比例，結(jié)果顯示乙腈和水比例為90：10的時(shí)候分離效果最好。如圖1所示。因此，選用乙腈和水比例為90：10作為流動(dòng)相比例。

2.3 方法的線性范圍、重現(xiàn)性和檢出限

在最佳色譜條件下，配置7種禁用染料濃度為0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行色譜分析。線性范圍為0.2～10.0μg/mL，線性方程及檢出限（S/N>3）如表1所示。表1中Y為峰面積，X為質(zhì)量濃度（mg/L）。

2.4 方法的回收率

分別取相同加標(biāo)濃度的眼影、腮紅、口紅，按照上述提取步驟，以最佳色譜條件進(jìn)樣分析，測定加標(biāo)回收率。結(jié)果如表2。

3 結(jié)論

建立了超聲萃取彩妝中蘇丹紅Ⅰ，蘇丹紅Ⅱ，蘇丹紅Ⅲ，蘇丹紅Ⅳ，對(duì)位紅，顏料橙5，蘇丹藍(lán)Ⅱ七種禁用染料，高效液相色譜法同時(shí)測定其含量的檢測方法。樣品采用乙腈或丙酮超聲提取，經(jīng)中性氧化鋁小柱凈化濃縮后測定。加標(biāo)回收率在83.4%-107.2%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法線性良好，操作步驟簡單，定量準(zhǔn)確。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃靈瑜，等.高效液相色譜法測定化妝品種6種限用色素[J].化學(xué)試劑，2014，36（11）：1006-1008;1032.

[2]錢曉燕，等.固相萃取/超高效液相色譜--串聯(lián)質(zhì)譜法測定化妝品種12種合成著色劑[J].分析測試學(xué)報(bào)，2014， 33（5）527-532.

[3]蘇小川，等.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定調(diào)味品種蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ色素[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊，2006，42（12）：1003-1006.

[4]李瑋，等.高效液相色譜法測定化妝品種的7種色素[J].分析試驗(yàn)室，2011，30（12）：85-89.