EGFR與PD-1、PD-L1在子宮內(nèi)膜癌中的表達研究

汪 鋒，胡玉崇，賀 鳳，王 靖，釵麗干,蘇依圖，賀慧杰，武 慧，張 帆，郭 彥，于 虹

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院 1.病理科；2.婦產(chǎn)科；3.院長辦公室，內(nèi)蒙古 呼和浩特010017)

子宮內(nèi)膜癌(EC)是最常見的婦科惡性腫瘤之一，每年新增診斷約有200，000例，是全球婦女發(fā)病和死亡的重要原因[1,2]。早期診斷是EC治療的關(guān)鍵，晚期患者5年生存率低于20%，早期患者5年生存率高于90%[3]。為了患者能得到早期診斷及治療，需要發(fā)現(xiàn)一些敏感的生物標志物。

越來越多的證據(jù)表明，腫瘤發(fā)生常在腫瘤微環(huán)境(TME)中引起，TME由細胞外基質(zhì)、血管或淋巴管、成纖維細胞、免疫細胞和炎癥細胞組成[4]。程序性死亡受體1 (PD-1)在腫瘤免疫逃避中發(fā)揮了重要作用，是表達在T細胞、自然殺傷細胞、單核細胞和B細胞上的免疫檢查點受體。程序性死亡配體1 (PD-L1)與PD-1相互作用抑制T細胞功能，誘導腫瘤免疫逃避[5]。Cai[6]等發(fā)現(xiàn)EGFR聯(lián)合其他指標可作為子宮內(nèi)膜癌早期診斷、預測復發(fā)和評價預后的指標。本文就EGFR與PD-1、PD-L1在子宮內(nèi)膜癌中表達情況及其相關(guān)性進行研究。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2012年12月至2019年10月在內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院完成手術(shù)的103例子宮內(nèi)膜癌標本及26例診刮正常子宮內(nèi)膜標本，標本均經(jīng)10%福爾馬林固定和石蠟包埋。年齡32-81歲，中位年齡51歲。參照2014年第4版《WHO女性生殖器官腫瘤分類》診斷標準對病例進行回顧性分析。

1.2 方法

EGFR、PD-1、PD-L1抗體購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，免疫組化染色采用鏈霉菌素-生物素(SP)免疫組織化學染色方法。

1.3 判斷標準

EGFR陽性染色為上皮細胞膜及細胞質(zhì)上棕黃色著色，顯微鏡下選擇10個具有代表性的高倍視野，分別計數(shù)100個細胞，計算陽性染色細胞百分率，<5%為陰性，≥5%為陽性。

PD-1、PD-L1陽性染色為腫瘤浸潤性免疫細胞的細胞膜或細胞質(zhì)中呈棕黃色著色，鏡下選擇10個具有代表性的高倍視野，分別計數(shù)100個細胞，如Allred等人[7]所述，采用基于比例評分和強度評分的兩分系統(tǒng)。比例評分為陽性染色比例：(0)無著色;(1)<1/100著色;(2)從1/100-1/10著色;(3)1/10-1/3著色;(4)1/3-2/3著色;(5)>2/3著色。強度評分表示陽性染色細胞的平均染色強度:(0)無著色;(1)弱著色;(2)中等著色;(3)強著色。總分(Allred scores)為每例的比例分數(shù)和強度分數(shù)的總和。Allred評分為≥1，則為陽性;如果Allred評分為0，則為陰性。

本課題HE切片及免疫組化切片均由兩位副高級以上病理醫(yī)師一起判讀。

1.4 統(tǒng)計學分析

統(tǒng)計分析使用SPSS 13.0版本。本文分類計數(shù)資料顯著性檢驗，采用四格表χ2檢驗。EGFR得分與PD-1或PD-L1得分的相關(guān)性,采用Spearman相關(guān)分析。P值<0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PD-1、PD-L1和EGFR在子宮內(nèi)膜癌及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達關(guān)系

在正常子宮內(nèi)膜樣本中PD-1陽性表達率3.8%，而子宮內(nèi)膜癌中PD-1染色陽性率占65.0%(P值<0.001)。共有34.6%的正常子宮內(nèi)膜樣本PD-L1染色陽性，52.4%的子宮內(nèi)膜癌中 PD-L1染色陽性(P=0.104)。另外，23.1%的正常子宮內(nèi)膜樣本EGFR染色陽性，76.7%的子宮內(nèi)膜癌 EGFR染色陽性(P<0.001)。其中PD1與EGFR在子宮內(nèi)膜癌和正常子宮內(nèi)膜病例中表達具有顯著性差異(表1)。

2.2 PD-1、PD-L1和EGFR表達與預后高危因素的關(guān)系分析

在103例子宮內(nèi)膜癌中PD-1陽性表達67例(65.0%)。蛋白的表達與預后的高危因素組織學分級(P=0.001)、浸潤深度(P=0.016)、腫瘤最大徑(P=0.043)相關(guān)，而與年齡(P=0.160)、淋巴間隙受侵(P=0.509)、宮頸黏膜腺體受侵(P=0.849)無顯著相關(guān)性。PD-L1陽性表達54例(52.4%)，與組織學分級(P=0.025)有顯著相關(guān)性。79例EGFR陽性表達，與組織學分級(P=0.002)、浸潤深度(P=0.032)、腫瘤最大徑(P=0.003)及淋巴間隙受侵(P=0.019)相關(guān)(表2)。

表1 PD-1、PD-L1和EGFR在子宮內(nèi)膜癌和正常子宮內(nèi)膜病例中表達情況

表2 子宮內(nèi)膜癌病例中PD-1、PD-L1和EGFR表達和預后高危因素的關(guān)系

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織中EGFR與PD-1、PD-L1表達相關(guān)性

在子宮內(nèi)膜癌組織中，EGFR陽性表達與PD-1、PD-L1陰性表達相關(guān)性統(tǒng)計分析顯示r值分別為0.260及0.295，P值均<0.05，表明EGFR表達與PD-1、PD-L1表達具有顯著負相關(guān)性(表3)。

表3 子宮內(nèi)膜癌病例中PD-1、PD-L1和EGFR表達相關(guān)性研究

3 討論

本研究對NCCN[8]指南提出的子宮內(nèi)膜癌高危因素與EGFR、PD-1、PD-L1表達的關(guān)系進行分析，以顯示三者對EC早期診斷、預測復發(fā)和評價預后意義。

我們的研究中EGFR表達與子宮內(nèi)膜癌高危因素組織學分級、浸潤深度、腫瘤最大徑及淋巴間隙受侵相關(guān)。Cai[6]等發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中，EGFR陽性表達與FIGO分期、分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與本研究相一致。

我們的研究中在正常子宮內(nèi)膜樣本中PD-1陽性表達率3.8%，而子宮內(nèi)膜癌中PD-1染色陽性率達65.0%，差別具有統(tǒng)計學意義。MO[9]等發(fā)現(xiàn)61.3%的EC中PD-1染色陽性，幾乎只在腫瘤浸潤性免疫細胞中發(fā)現(xiàn)，在腫瘤細胞和正常子宮內(nèi)膜組織中均未見表達，PD-1表達在中、低分化腫瘤組織比高分化腫瘤更常見，與本研究相一致。本研究中PD-1表達與預后的高危因素腫瘤浸潤深度、腫瘤最大徑相關(guān)，而MO等研究中PD-1在不同臨床分期的患者中表達無差異，可能為所研究的樣本群體不同所致。

我們研究中PD-L1在54例(52.4%)子宮內(nèi)膜癌組織中陽性表達，與組織學分級有顯著相關(guān)性。MO[9]等研究75例子宮內(nèi)膜癌中，中低分化腫瘤組織中73.7%病例免疫細胞表達PD-L1,明顯高于高分化腫瘤，與本研究的趨勢相一致。

本研究進一步分析子宮內(nèi)膜癌病例腫瘤組織中，EGFR與PD-1、PD-L1表達的相關(guān)性。李向敏[10]等研究發(fā)現(xiàn)非小細胞肺癌患者EGFR突變與腫瘤的微環(huán)境存在密切相關(guān)，尤其是和腫瘤中PD-L1的低表達相關(guān)。2013年，癌癥基因組圖譜將子宮內(nèi)膜癌分為POLE超突變、MSI高突變、低拷貝內(nèi)膜樣和高拷貝漿液樣4種亞型[11]。文獻報道PD-L1在子宮內(nèi)膜癌MMR缺陷型表達率更高[12,13]。本研究中發(fā)現(xiàn)EGFR表達與PD-1、PD-L1表達具有顯著負相關(guān)性，提示EGFR與PD-1、PD-L1蛋白表達可能與子宮內(nèi)膜癌不同亞型相關(guān)，有待進一步研究證實。

綜上所述，EGFR、PD-1及PD-L1表達與子宮內(nèi)膜癌的預后高危因素具有明顯的關(guān)系，有望成為EC早期診斷、預測復發(fā)和評價預后的生物標志物。