新生兒耳聾基因聯合聽力篩查分析

魏 婧 魯建央 魯才娟 吳雅楓 詹 欣 翟洪波

常規新生兒聽力篩查的普遍開展已經在臨床上取得一些成績。導致耳聾原因很多，其中遺傳因素最常見，占50%～60%[1]。近年來北京、上海、鄭州等城市紛紛開展新生兒常規聽力篩查聯合耳聾基因篩查，發現耳聾基因篩查可以彌補常規聽力篩查不能檢出部分遲發性耳聾的不足。本研究通過調查杭州市新生兒耳聾基因的熱點突變情況，同時聯合傳統新生兒聽力篩查的結果進行分析，為新生兒聽力及耳聾基因聯合篩查在杭州推廣提供參考，現將結果報道如下。

資料與方法

1.臨床資料:以2018年8月～2019年7月在浙江大學醫學院附屬杭州市第一人民醫院分娩的1000例足月新生兒為研究對象。納入標準：①足月分娩；②出生體重≥2500g；③出生時新生兒Apgar評分≥8分。排除標準：①有耳聾家族史(對于耳聾的孕婦及其伴侶進行產前診斷，不包括在此次篩查中)；②出生時有缺氧窒息、膽紅素腦病等情況；③研究對象的母親屬近親婚配、孕期有發熱、有特殊藥物使用史，有遺傳性疾病史。在篩查前均詳細告知家長耳聾基因聯合聽力篩查的相關知識，取得同意后簽署知情同意書。

2.耳聾基因篩查：所有新生兒在出生時采集臍靜脈血2ml或出生后采集足跟血于濾紙卡，晾干后保存并及時送往基因實驗室，提取DNA，采用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜技術(MALDI-TOF-MS)進行檢測。首先PCR擴增目的片段區域，然后加入多對特異性引物，進行單堿基延伸，再將單堿基延伸產物純化后打質譜，根據不同引物擴增產物的質荷比不同，來判斷有無堿基突變。包括4個基因20個位點，分別為GJB2基因(35delG、167delT、176-192del16、235delC、299-300delAT)、GJB3基因(538C>T、547G>A)、SLC26A4基因(281C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS15+5G>A、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G)及線粒體12S rRNA基因(1494C>T、1555A>G)。

3.常規聽力篩查：在安靜環境新生兒熟睡狀態下，由專業的醫護人員，用自動聽性腦干反應及耳聲發射判定通過或者不通過[2]。若不通過則于出生后42天進行復篩，復篩未通過者在出生后3個月進行第2次復篩，仍不通過者用 ABR 進行診斷性聽力檢查，采用ABR法檢測，>35dBnHL判定為聽力損失。同時進行跟蹤隨訪。

4.統計學方法：采用SPSS 20.0統計學軟件對數據進行統計分析，計數資料以構成比表示，男、女耳聾基因篩查陽性率比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1.基本情況：1000例新生兒中男性512例，其中耳聾基因篩查陽性者24例；女性488例，其中耳聾基因篩查陽性者17例，男女性別之間耳聾基因篩查陽性率比較，差異無統計學意義(χ2=0.921，P=0.337)。

2.常規聽力篩查結果:1000例新生兒中85例(8.5%)聽力初篩未通過，85例均進行復篩，二次復篩未通過24例(2.4%)。

3.耳聾基因篩查結果:4個常見耳聾基因突變陽性者共41例，突變率達4.1%。GJB2基因陽性者共22例，SLC26A4基因陽性者共12例，GJB3基因陽性者共4例，線粒體12S rRNA基因陽性者共2例，GJB2基因聯合SLC26A4基因突變1例。本研究中GJB2 c.235delC位點突變率最高(表1)。

表1 41例新生兒耳聾基因突變位點分布聯合聽力篩查情況(n)

4.耳聾基因與聽力聯合篩查結果:1000例新生兒中，耳聾基因與聽力篩查均通過的有947例，耳聾基因與聽力篩查均未通過12例，耳聾基因篩查通過但聽力篩查未通過12例，耳聾基因篩查未通過但聽力篩查通過29例(表2)。

表2 耳聾基因篩查聯合聽力篩查結果(n)

5.聽力學診斷結果:24例復篩未通過的患兒進行了聽力學診斷，最終確診7例聽力損失，新生兒先天性聽力損失檢出率為0.7%，其中4例有耳聾基因位點突變。2例重度聽力損失，其中1例ABR閾值左耳95dB、右耳85dB，耳聾基因篩查結果為GJB2 c.235delC純合突變，1例耳聾基因篩查正常。2例中度聽力損失，ABR閾值雙耳分別為50dB和55dB，耳聾基因篩查分別顯示GJB2c.235delC雜合突變和GJB3 c.547G>A 雜合突變。2例左耳中度聽力損失，ABR閾值55dB，右耳聽力正常，其中1例耳聾基因篩查顯示為GJB2 c.299-300 delAT雜合突變，1例耳聾基因篩查正常；1例右耳中度聽力損失，ABR閾值50dB，左耳聽力正常，耳聾基因篩查正常。

討 論

新生兒聽力損失的發生率為0.1%～0.3%，在我國每年約有30000例新增耳聾兒，其中50%～60%的聽力損失與遺傳因素有關[3]。有研究者對2007年～2016年10年間關于中國新生兒耳聾基因突變情況做Meta分析，得出我國新生兒耳聾基因突變率最高的依次是GJB2基因、SLC26A4基因、線粒體12S rRNA[4]。本研究發現耳聾基因突變率的結果與此文獻相符。傳統的聽力篩查主要是檢測新生兒耳部功能及耳周結構，需在出生3個月經聽力學診斷方能確診，往往無法及時診斷出病因，進而導致語言培訓延誤，造成患者因聾致啞，加重家庭負擔[5]。因此，在實施聽力篩查的同時，可聯合采用耳聾基因檢測，有助于盡早發現聽力障礙患兒，做到早診療、早干預。

1.GJB2基因：在歐美國家GJB2基因突變導致了約30%～50%的非綜合性遺傳性耳聾，其為常染色體隱性遺傳，可引起中、重、極重度聽力損失。迄今為止，已發現GJB2基因的突變類型超過100種，其位點突變有地域性，在歐美地區發生率較高的是35delG，約占70%，而在我國發生率較高的是235delC[4,6]。本研究檢出GJB2基因突變22例,其中17例 235delC雜合突變，4例299-300delAT雜合突變,1例235delC純合突變。尚未發現其他位點的突變，可能與本研究的標本量較少有關，有待于擴大樣本量后做進一步統計。雜合突變提示受檢者為攜帶者，一般不發病，但具有高度的遺傳易感性，2個GJB2基因雜合突變婚配生育聽力障礙兒童的概率25%，明確患兒的致聾基因型可正確指導成年期婚育。有研究者對耳聾基因純合突變嬰兒的聽力進行隨訪，發現GJB2 C.235del C和SLC26A4 IVS7-2A>G基因純合突變，嬰兒聽力障礙主要是雙耳嚴重的聽力障礙，并且在1～3年的隨訪中沒有變化[7]。本研究亦有1例患兒GJB2 delC基因純合突變,經聽力測試為重度聽力損失，結果二者相互得到了印證，該患兒通過移植電子耳蝸恢復了聽力。

2.SLC26A4基因:SLC26A4基因突變是引起遺傳性耳聾的第2大原因，與大前庭水管綜合征(LVAS)有關[8]。LVAS是一種能夠根據影像學分類的感音神經性耳聾，CT或MRI提示前庭水管或內淋巴囊擴大。SLC26A4基因突變影響聲音傳遞而導致聽力損失。出生時可能聽力正常，因輕度碰撞或感冒可造成明顯的聽力下降。SLC26A4基因突變引起的耳聾是常染色體隱性遺傳，其IVS7-2A>G位點突變在LVAS中最常見[9]。本研究檢出主要是SLC26A4 c.IVS7-2A>G位點突變13例，其中1例為純合突變，聽力學診斷均通過，仍需提醒家長早期預警，密切觀察聽力變化，發現聽力下降及時救治，挽救聽力水平。

3.線粒體12S rRNA：耳毒性藥物是引起聽力損失的一個重要的環境因素。目前已知的具有耳毒性的藥物超過150種，許多藥物的耳毒性在治療停止后即消失，但氨基糖苷類藥物的使用與永久性聽力損失有關[10]。線粒體基因的突變作為氨基糖苷類藥物耳毒性母體遺傳的可能基礎，于1989年由Higashi[11]首次提出。編碼線粒體核糖體12S亞基的MT-RNR1基因是氨基糖苷類誘導的非綜合性聽力喪失突變的熱點，且mtDNA 12S rRNA 1555A>G是母系遺傳[12～14]。女性攜帶者可以將這一突變傳遞給下一代的所有子女。本研究中2例線粒體12S rRNA基因1555A>G均質突變均通過聽力篩查，仍需向其監護人發放藥物警示卡片，降低藥物性耳聾的危險。

4.GJB3基因：GJB3 c.547G>A突變可能會引起遲發性聽力損失。由于缺乏充足的流行病學統計數據，且很多帶有該突變基因的受檢者的聽力表型正常，所以該致病機制并不明確[15]。本研究檢出GJB3基因雜合突變4例，其中3例為547G>A突變，1例未通過聽力復篩且雙耳聽力中度損失。

關于重度、極重度感應神經性耳聾主要的解決方案是人工耳蝸植入(cochlear implantation,CI)。CI術后效果也受諸多因素的影響，其中就包括了致聾基因的類型。目前在全國范圍內也開展了“耳聾基因與CI相關性”研究。從遺傳性角度看，GJB2、SLC26A4 基因突變患者CI效果較明確，其他耳聾基因突變患者CI效果尚需進一步研究[16，17]。新生兒出生后將聽力篩查與常見耳聾基因篩查相結合，也可以為重度、極重度遺傳性耳聾患兒是否需進行人工耳蝸植提供評估依據。

目前發現的耳聾基因近300種，雖然擴大篩查的基因及變異位點，能提高檢出率，但納入更多位點也可能會出現一些變異臨床意義解釋不清的情況。此外擴大篩查范圍勢必增加檢測成本，對一些極其罕見的耳聾基因變異進行篩查不符合衛生經濟學，故目前在國內仍以開展常見的耳聾基因篩查為主，對聽力缺失患兒，若常見耳聾基因檢測陰性，再擴大后續的檢測，減少漏診[18]。

綜上所述，本研究通過分析1000例杭州地區新生兒群體中耳聾基因的攜帶特點及聯合新生兒聽力篩查結果，初步建成杭州地區新生兒耳聾基因突變率信息儲備庫。在成熟的新生兒聽力篩查的基礎上，融入耳聾基因熱點突變位點的篩查，可以從分子水平上早期發現和診斷先天性遺傳性耳聾，對遲發性耳聾進入早期日常聽力保健和安全用藥指導，減少聽力障礙兒童的出生，為兒童聽力保健提供一種新的模式。