酶法測定糖化白蛋白試劑盒質量控制指標分析

郭世富 畢春雷

(1.國家藥品監督管理局醫療器械標準管理中心、中國食品藥品檢定研究院，北京 102629；2.北京市醫療器械檢測所，北京 101111)

糖化白蛋白(glycated albumin,GA)是葡萄糖通過非酶促糖基化反應與血漿中白蛋白結合形成的酮胺類化合物，是臨床上血糖監測的重要指標之一，能反映近期血糖（2～3 周）情況，適用于血糖波動較大的新發糖尿?。╠iabetes mellitus,DM）患者治療效果評價、餐后高血糖癥，且GA 與糖尿病血管并發癥相關，可預測心血管事件的發生，具有較高臨床價值。而糖化血紅蛋白(glycated hemoglobin,HbA)可反映檢測前2～3 個月內的平均血糖水平，作為臨床監測長期血糖控制的金標準。與HbA相比，糖化白蛋白反映血糖短期波動，避免因血紅蛋白變異而影響檢測結果，作為血糖檢測與控制的重要指標，在臨床上越來越受到重視[1-5]。

目前，臨床實驗室使用的糖化白蛋白測定試劑盒大部分是采用酶法在自動生化分析儀上進行GA 定量，利用對白蛋白特異性更高的溴甲酚紫(bromocresol purple,BCP)替代原來的溴甲酚綠(bromocresol green,BCG)，對白蛋白的含量進行測定，以減少球蛋白對測定結果的影響。通過糖化白蛋白與白蛋白比值的百分數報告，作為臨床診斷的依據。已批準上市的酶法測定糖化白蛋白試劑盒五十余種，由于沒有統一的質量控制指標，造成上市產品質量參差不齊，同時造成不同檢驗機構的檢驗結果缺乏可比性，不利于上市后產品質量控制和監督及糖化白蛋白指標的進一步臨床應用研究。該研究主要對糖化白蛋白質量控制指標進行評估分析[6-8]。

1 儀器與試劑

HITACHI7020 自動生化分析儀，上市中三個廠家GA 酶法檢測試劑盒。在自動生化分析儀上設置檢測程序，由儀器自動完成檢測。每次測定同時用質控品予以監控[9]。

2 測定原理

首先利用前處理液修飾血清白蛋白的-SH 基，與BCP 作用生成青紫色結合體，測定其吸光度(A)值得出白蛋白濃度。再利用特異性蛋白酶將GA水解為糖化氨基酸，后者被特異性的酮胺氧化酶(KAOD)生成過氧化氫，利用過氧化物酶指示系統生成色素，測定此色素的A 值，得GA 含量。

3 方法與結果

門診收集正常和異常人群的血清樣本40 例，冷凍，復融。HITACHI7020 自動生化分析儀，按廠家說明書，先校準，質控品符合要求。參照國家標準《臨床化學體外診斷試劑（盒）》質量控制指標項目，建立糖化白蛋白質量控制指標，對相關項目進行測試[10]。

3.1 空白吸光度

空白樣本應不含被測物，但其基質應與待測常規樣本相同。如果空白樣本難獲得，可選用相應基質的樣本，但應注意將基質效應減至最少。用三家試劑盒測試空白樣本，測得規定讀數點主波長下的吸光度值(A)，見表1。

3.2 分析靈敏度

在糖化白蛋白樣本濃度為15g/L 時，測其吸光度變化的范圍。三家A、B、C 測得GA 的吸光度變化分別為0.094253，0.070898，0.069464。

3.3 線性

線性是指給出的測量結果與樣品中被測量的值直接成比例的能力。將高濃度GA 樣本、低濃度GA 樣本和生理鹽水以幾種比例進行溶解而得到測試樣本，對各種濃度梯度的樣本的GA 濃度和ALB濃度進行測定，各測定3 次，計算均值。測定三家試劑盒GA 線性參考物質的測定值與標稱值的回歸值之間的偏離程度。GA 檢測值與理論值進行線性回歸分析見圖1、圖2、圖3。

表1 三個廠家試劑盒空白吸光度分析結果

圖1 廠家一試劑盒GA 線性擬合曲線

GA1 y=20.5997+1137.5325x，R2=0.998。

圖2 廠家二試劑盒GA 線性擬合曲線

GA2 y=0.0407+3.2978x，R2=0.998。

圖3 廠家三試劑盒GA 線性擬合曲線

GA3 y=-0.4546+36.2066x，R2=0.9996。

3.4 重復性

重復性反映在一組測量條件下的測量精密度。用試劑盒測試已知濃度的樣品，反復測定10 次，計算均值和標準差S，及變異系數CV。計算的結果均在2.0%之內，具體結果見表2。

3.5 準確性

準確性反映測得量值與被測量的真值的一致程度。由于目前缺乏糖化白蛋白國家標準品，采用不同廠家的產品進行比對（B 與C），對糖化白蛋白進行方法學比對分析，分析測定結果差異。準確性分析結果如圖4 所示。

圖4 廠家2 與廠家3 試劑盒的比對結果

線性回歸方程為：y=0.0273+0.9789x，r=0.9998。

由分析結果可以看出，C 和B 的糖化白蛋白結果更加相近，二者的相關系數大于0.975，回歸直線斜率在[0.9,1.1]內，最大偏差不大于0.8g/L，說明二者的參照系統有相關性。

4 討論

糖化白蛋白能反映短期血糖變化的情況，因此可在早期發現糖尿病，評價降糖藥物療效，預測糖尿病血管并發癥的風險以及監測造血系統疾病患者的血糖控制方面具有重要的臨床診斷價值。針對酶法糖化白蛋白測定試劑盒建立統一的行業控制指標，保證產品的統一和質量可控，使試驗結果具有可比性，促進臨床應用研究。

表2 三個廠家試劑盒的重復性分析結果

針對糖化白蛋白診斷試劑盒建立了空白吸光度、分析靈敏度、線性、重復性、準確性的質量控制指標，此質量控制指標的建立為此類試劑產品質量控制標準的統一奠定了良好的基礎。針對上市的三家試劑盒產品進行試驗分析結果表明，酶法糖化白蛋白試劑均具有較好的空白吸光度、分析靈敏度、線性及重復性。同時，由于不同廠家采用各自的標定系統，采用不同的生產工藝和原材料，缺乏統一國家標準物質和溯源體系，因此比對結果存在一定的差異。但由于準確性是行業標準非常重要的性能指標，建議規范偏差極限范圍，以鼓勵企業通過技術完善，提高產品控制質量。同時建議加強糖化白蛋白國家標準品的研發，建立起國內糖化白蛋白產品的溯源體系，保證各生產企業之間的統一性，促進行業的規范和發展，同時為臨床使用者帶來方便。