發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、飼料效率及免疫力的影響

李洪琴 ， 朱 偉 ， 席慶凱 ， 陶玉嶺 ， 劉天驥 ， 劉 匆 ，顧夕章 ， 相福生 ， 種金豆 ， 趙 敏 ，3，6*

（1.山東新希望六和集團(tuán)有限公司，山東青島266061；2.新希望六和股份有限公司，北京 100102；3.四川新希望六和科技創(chuàng)新有限公司，四川成都 610101；4.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部飼料及畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都 610101；5.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東青島266109；6.海陽新希望六和飼料有限公司，山東煙臺(tái) 265138）

豆粕和花生粕蛋白質(zhì)含量豐富，是目前畜牧業(yè)中廣泛應(yīng)用的植物性蛋白原料，因含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，不僅影響動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和利用效率，還會(huì)影響動(dòng)物肝臟的健康發(fā)育（常寨成等，2019）。發(fā)酵是利用微生物降解植物原料，并產(chǎn)生益生菌、寡肽、乳酸等活性物質(zhì)的過程。已有研究表明，發(fā)酵可有效降低或完全消除抗?fàn)I養(yǎng)因子（Teng等，2012），并產(chǎn)生蛋白酶、非淀粉多糖酶等多種活性物質(zhì)，可將大分子蛋白質(zhì)分解為可消化吸收的小肽（Shiu等，2015），還能有效提高酸溶蛋白和總酸含量，進(jìn)而提高原料利用率，并最終促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)（馬靜等，2019；袁新杰等，2019）。 目前，已有大量關(guān)于發(fā)酵粕類產(chǎn)品在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用的研究（燕磊等，2019；吳業(yè)陽等，2018；包鵬云等，2018；高緒娜等，2017），但鮮見發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)比效果的研究。

本研究將不同加工工藝生產(chǎn)的豆粕和發(fā)酵花生粕添加到飼料中飼喂凡納濱對(duì)蝦，研究其對(duì)對(duì)蝦生長(zhǎng)性能和免疫力的影響，以期為豆粕和花生粕在對(duì)蝦飼料中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)原料及飼料配方 本試驗(yàn)所用原料由海陽新希望六和飼料有限公司提供。在花生粕組基礎(chǔ)上用去皮豆粕、發(fā)酵豆粕及發(fā)酵花生粕替代部分花生粕配制試驗(yàn)飼料。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平%

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理 本試驗(yàn)在新希望飼料研究院即墨特水養(yǎng)殖基地進(jìn)行，試驗(yàn)選取初始體質(zhì)量為（2.2±0.1）g體格壯、活力好、規(guī)格整齊、無明顯疾病的對(duì)蝦80000尾，隨機(jī)分成4個(gè)處理，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4000尾對(duì)蝦，每個(gè)養(yǎng)殖池面積為17 m2。分別投喂以上4種飼料，即花生粕組、去皮豆粕組、發(fā)酵豆粕組、發(fā)酵花生粕組。試驗(yàn)周期為67 d。飼養(yǎng)管理參考祁真等（2019）的研究方法，每日投料 4 次（06:00、10:00、14:00、18:00），每周對(duì)投餌量進(jìn)行調(diào)整。水池內(nèi)配置充氧設(shè)施，并定時(shí)開啟，以保證蝦池中溶解氧＞5 mg/L，鹽度為31‰自然海水，水溫23～32℃，pH 7.5～8.5，氨氮濃度低于1.0 mg/L，亞硝酸鹽濃度低于0.01 mg/L。

1.3 樣品收集 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將試驗(yàn)蝦禁食24 h，然后計(jì)算每個(gè)水泥池試驗(yàn)蝦的數(shù)量并稱取總重量，用于計(jì)算試驗(yàn)蝦存活率（SR）、初始均重（IBW）、終末均重（FBW）、質(zhì)量增加率（WGR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）和飼料轉(zhuǎn)化率（FE）。生長(zhǎng)性能公式如下：

質(zhì)量增加率=（W2-W1）/W1×100；

特定生長(zhǎng)率=（lnW2-lnW1）/T×100；

飼料轉(zhuǎn)化率=F/（W2-W1）；

成活率=終末蝦尾數(shù)/初始蝦尾數(shù)×100。

式中：T為試驗(yàn)天數(shù)；W2試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各處理蝦的平均體質(zhì)量，g；W1為試驗(yàn)開始時(shí)各處理蝦的平均體質(zhì)量，g；F為試驗(yàn)期間所用飼料總重。

試驗(yàn)結(jié)束后，每池隨機(jī)選取6尾試驗(yàn)蝦取肝胰臟，并置于-80℃冰箱保存，用于分析胰蛋白酶（Trypsin）、淀粉酶 （Amylase）、超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、溶菌酶（LZM）、堿性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、酚氧化酶（PO）活性。

1.4 樣品分析 將飼料樣品烘干 （105℃）至恒重，采用凱式定氮法 （VELP，UDK142 automatic distillation unit，意大利）測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量，索氏抽提法測(cè)定脂肪含量（SOX416，Gerhardt，瑞典），失重法測(cè)定灰分含量；肝胰臟樣品送至南京建成生物科技有限公司測(cè)定相關(guān)酶活性。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件以ANOVA方法進(jìn)行分析，所有指標(biāo)以每個(gè)重復(fù)為試驗(yàn)單位。若各個(gè)處理間差異顯著，則用Duncan’s多重比較進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果用最小二乘法的均值及平均標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 生長(zhǎng)性能和飼料效率 發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能和飼料效率的影響如表2所示，其中發(fā)酵花生粕組終末均重高于其他各試驗(yàn)組，但各組之間無顯著性差異（P＞0.05）；發(fā)酵花生粕組質(zhì)量增加率和特定生長(zhǎng)率顯著高于花生粕組，分別提高162.26、0.43個(gè)百分點(diǎn) （P＜0.05），而其他各試驗(yàn)組之間無顯著性差異 （P＞0.05）；發(fā)酵花生粕組飼料轉(zhuǎn)化率顯著高于花生粕組20.59個(gè)百分點(diǎn)（P＜0.05），發(fā)酵豆粕組飼料轉(zhuǎn)化率顯著高于花生粕組7.73個(gè)百分點(diǎn) （P＜0.05），而與去皮豆粕組無顯著性差異（P＞0.05）；發(fā)酵花生粕組成活率與去皮豆粕組和發(fā)酵豆粕組之間無顯著性差異（P＞0.05），但顯著高于花生粕組19.92個(gè)百分點(diǎn)（P＜0.05）。

表2 發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能和飼料效率的影響

2.2 消化酶活性指標(biāo) 發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦消化酶活性的影響如表3所示，發(fā)酵花生粕組胰蛋白酶活性與發(fā)酵豆粕組之間無顯著性差異 （P＞0.05），但顯著高于花生粕組2047.21 U/mg prot（P ＜ 0.05）；發(fā)酵花生粕組淀粉酶活性高于花生粕組10.34 U/mg prot，但兩個(gè)試驗(yàn)組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表3 發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦消化酶活性的影響U/mg prot

2.3 免疫酶活性指標(biāo) 發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫相關(guān)酶活性的影響如表4所示，發(fā)酵花生粕組超氧化物歧化酶、總抗氧化能力及多酚氧化酶活性高于其他各試驗(yàn)組，但各試驗(yàn)組之間差異不顯著（P＞0.05）；發(fā)酵花生粕組和發(fā)酵豆粕組溶菌酶活性高于其他兩組，但各試驗(yàn)組之間差異不顯著（P＞0.05）；發(fā)酵花生粕組堿性磷酸酶活性顯著低于花生粕組157.88 U/g prot（P＜0.05），但與其他各試驗(yàn)組之間無顯著性差異（P＞0.05）；發(fā)酵花生粕組酸性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性低于花生粕組 54.81、0.17 U/g prot（P ＞ 0.05）。

表4 發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫相關(guān)酶活性的影響

3 討論

3.1 發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能及飼料效率的影響 花生粕氨基酸不平衡，且存在抗?fàn)I養(yǎng)因子，從而限制了其在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用。已有研究表明，發(fā)酵不僅能將花生粕中大分子蛋白降解為易消化吸收的小肽，還能產(chǎn)生大量益生菌、寡肽、乳酸及未知生長(zhǎng)因子等物質(zhì)，從而提高動(dòng)物機(jī)體免疫力，抑制消化道疾病發(fā)生，進(jìn)而提高動(dòng)物的成活率（常寨成等，2019；任曉靜等，2013）；另外，趙朝陽等（2015）研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵花生粕具有獨(dú)特的芳香味，能顯著改善飼料風(fēng)味及品質(zhì)，提高飼料誘食性，并最終促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。本研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵花生粕組質(zhì)量增加率、特定生長(zhǎng)率和飼料轉(zhuǎn)化率均顯著高于其他各試驗(yàn)組 （P＜0.05），這與金紅春（2011）研究發(fā)現(xiàn)，使用發(fā)酵粕類飼喂青魚（Mylopharyngodonpiceus），可顯著改善青魚增重及飼料效率的結(jié)果一致。分析這一結(jié)果可能是由于發(fā)酵降解了花生粕中的植酸，而植酸不僅能降低動(dòng)物對(duì)磷的利用，還能與蛋白質(zhì)結(jié)合形成絡(luò)合物影響蛋白質(zhì)的消化吸收；這也與本研究發(fā)現(xiàn)的，發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕組肝臟內(nèi)蛋白酶活性顯著高于未發(fā)酵組相符合。另外，豆粕和花生粕中胰蛋白酶抑制因子等抗?fàn)I養(yǎng)因子較多，抑制了消化酶活性，而發(fā)酵可以顯著降低豆粕和花生粕中各種抗?fàn)I養(yǎng)因子，而且發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕中氨基酸和肽類物質(zhì)可做為底物誘導(dǎo)消化酶分泌并提高消化酶活性（吳慧，2016）。

3.2 發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫力的影響 免疫學(xué)指標(biāo)能夠反映機(jī)體的免疫功能和生理狀況。超氧化物歧化酶活力、總抗氧化能力及溶菌酶活力反映了機(jī)體抗氧化能力及清除自由基的能力；酚氧化酶活性與機(jī)體免疫能力呈正相關(guān)，酚氧化酶活性高，機(jī)體抗病能力強(qiáng)（Palmer等，2010；Mucklow 等，2004）；堿性磷酸酶、酸性磷酸酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶是參與機(jī)體內(nèi)氨基酸氨基轉(zhuǎn)運(yùn)的酶，其活性的高低常用于反映機(jī)體肝組織的健康狀態(tài)（魯耀鵬等，2019）。已有研究表明，發(fā)酵原料可以提高青魚 （金紅春，2011）， 刺參（Scophthalmus maximus）（包鵬云等，2018）， 凡納濱對(duì)蝦 （彭松等，2015）， 異育銀鯽（Carassiusgibelio）（陳萱等，2005）等水產(chǎn)動(dòng)物的免疫力。本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵豆粕和發(fā)酵花生粕組超氧化物歧化酶活性和酚氧化酶活性高于花生粕組，這可能是由于發(fā)酵粕中含有大量有益微生物，這些微生物進(jìn)入腸道后抑制病原菌，并通過其代謝物調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡，從而提高機(jī)體免疫力。這與彭松等（2015）研究發(fā)現(xiàn)的飼料中添加發(fā)酵花生粕可以顯著提高凡納濱對(duì)蝦酚氧化酶酶活性結(jié)果一致。另外，本研究中花生粕組堿性磷酸酶、酸性磷酸酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶活性高于發(fā)酵花生粕組，可能與花生粕組對(duì)蝦肝胰腺受到一定程度的損傷有關(guān)，這與抗氧化活力結(jié)果一致。

4 結(jié)論

本次試驗(yàn)條件下，飼料中添加發(fā)酵原料能改善凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、飼料效率及免疫力，且發(fā)酵花生粕效果優(yōu)于發(fā)酵豆粕。