ELISA檢測獻血者抗-HCV室內質控異常失控1例報告

賈波

(濟源市中心血站 質控科，河南 濟源 459000)

采供血機構對血液的篩查項目主要包括乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)、人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)、梅毒螺旋體(treponema pallidum，TP)等感染標志物檢測。試驗方法可分為血清學檢測抗原、抗體的酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)或化學發光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)，以及用于HBV-DNA、HCV/HIV-RNA的核酸檢測。其中，ELISA或CLIA試驗的室內質控通常采用試劑盒陰陽性對照、弱陽性質控品實時監控試驗的有效性，同時采用弱陽性質控品和Levey-Jennings(L-J)質控圖監控試驗的穩定性[1]。本文對1例ELISA檢測獻血者抗-HCV室內質控異常失控結果進行快速分析處置，在明確誘因的基礎上進一步提出防范措施，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料2020年4月7日，濟源市中心血站在進行獻血者血液樣本ELISA初、復檢過程中，復檢組抗-HCV項目室內質控結果異常失控，隨即展開調查、分析與處置。

1.2 試劑與儀器抗-HCV ELISA試劑盒(某藥業股份有限公司，批號20190701)，抗-HCV質控品0.03 Ncu·mL-1(康徹斯坦生物，批號201906001)，AE 280、AE 288全自動酶免分析儀(深圳愛康醫療電子)，室內質控軟件(唐山啟奧SHINOW 9.0)。

1.3 方法對試驗過程中人、機、料、法、環等關鍵環節進行追溯分析，并以初檢設備(AE 280)、復檢設備(AE 288)及手工操作的方法分別對在用試劑、庫存試劑進行試驗分析，糾正失控誘因后重新比對檢測冷藏保存7 d以內的已檢合格樣本。

2 結果

2.1 試驗過程追溯分析結果當日復檢組進行ELISA檢測抗-HCV兩批次，室內質控結果均違背13s規則，同一設備檢測其他項目均在控；試驗過程追溯分析未見明顯異常。見表1。

2.2 在用試劑、庫存試劑以不同儀器及手工試驗分析結果在用試劑、庫存試劑以不同儀器及手工試驗分析，在用試劑室內質控結果均失控，庫存試劑室內質控結果均在控。見表2。

2.3 比對檢測分析結果以庫存試劑重新比對檢測冷藏保存7 d以內的已檢合格樣本494份(分6批次完成試驗)，室內質控結果均在控，樣本檢測結果均符合。質控圖見圖1。

表1 試驗過程追溯分析結果

表2 在用試劑、庫存試劑以不同儀器及手工試驗分析結果

圖1 質控圖

3 討論

試驗分析結果證實(表2)，對在用試劑分別采用初檢設備(AE 280)、復檢設備(AE 288)、手工操作的方法進行重復試驗分析，其室內質控結果均違背13s規則(為不影響整體質控數據計算，僅在表2中列出質控品檢測的S/CO結果，未在質控圖中標注)，采用同樣方法對庫存試劑進行試驗分析，室內質控結果均在控。在以上試驗驗證抗-HCV項目同時，HBsAg、抗-HIV和TP項目也同步進行了驗證，室內質控結果均在控。至此，可基本確定本例ELISA檢測抗-HCV室內質控異常失控原因與第2次采購的試劑在使用中檢測性能降低有關。再次以庫存試劑分6批次比對檢測冷藏保存7 d以內的已檢合格樣本494份，室內質控結果均在控(見圖1質控圖中4月9日的6個質控點)，樣本檢測結果均符合，進一步佐證了在用試劑在使用中檢測性能降低導致失控的誘因分析。

導致試劑性能發生變化的常見因素包括：(1)試劑盒穩定性試驗不好，試劑在儲存、運輸過程中溫度發生改變，導致試劑盒內有效成分發生變化[6]。其中尤以冷鏈控制最為關鍵，其儲存溫度要求為2～8 ℃，低溫冰凍或超溫均可導致酶活性改變，而相對于試劑的運輸，現行物流體系大多難以將其控制在一個非常理想的狀態，存在季節變化、冷鏈方式、供貨渠道、運輸途徑以及路途、時間等諸多因素影響。(2)試劑盒臨近有效期，試劑檢測性能下降，導致室內質控結果逐漸降低，在排除人為原因和設備因素情況下，若失控仍未糾正，則考慮試劑性能發生變化[7]。

本例異常失控給采供血工作帶來的風險在于：(1)直接導致血液檢測報告不能在預定的時間發放，臨床急診/預約的單采血小板或其他特殊血液制品面臨延期發放及過期報廢的重大風險，嚴重影響臨床供血及時性、安全性；(2)相同批號試劑存在3次購入過程，不同的發貨、運輸、交接等環節增加了不可控風險的發生概率；(3)試劑接近效期存在檢測性能降低的可能性，本例中，若第3次購入的試劑同樣存在檢測性能降低并繼續導致室內質控結果失控，重新組織新批號試劑或不同廠家試劑的評審、采購、確認、使用等將會是一個漫長的過程，無疑會給采供血機構帶來嚴峻的考驗；(4)異常失控導致試劑、耗材等資源浪費，增加了無償獻血工作成本投入。

需要注意的是，室內質控結果失控往往不是某一個獨立因素導致。就該例而言，同批號、不同進貨時間的試劑發生室內質控結果失控應引起相關人員的高度重視。首先，應注重試劑使用過程中的異常趨勢分析，第2批試劑于4月1日投入使用，本例失控前的室內質控結果已出現降低的趨勢；其次，應重視試劑正式投入使用前的確認工作，尤其不能因試劑批號完全相同而放松警惕，若該批試劑在正式投入使用前已發現性能減低，至少能為糾正措施的實施提供時間上的保障；最后，應探討建立行之有效的應急預案，重點包括備用試劑、儀器等管理，必要時參考核酸集中化檢測模式建立異地實驗室之間的互為備份檢測方式，充分保障應急情況下血液檢測結果的及時性、有效性。

綜上所述，本例中ELISA檢測抗-HCV室內質控結果的異常失控，其主要誘因與在用試劑檢測性能降低有關，強化試劑庫存管理，重視試劑性能監控，創新失控應急預案，可作為今后規避類似失控風險、保障血液檢測結果及時有效的參考策略。