肝癌組織LncRNATINCR表達水平對術后復發的影響

秦連進 唐成武

[摘要] 目的 探討肝癌組織中LncRNA TINCR表達水平對術后復發的影響。 方法 回顧性分析2014年7月～2016年7月間在我院接受手術治療的132例肝細胞癌患者的臨床資料。RT-PCR 法檢測肝癌標本內LncRNA TINCR表達水平，采用ROC曲線和Kaplan-Meier法分析LncRNA TINCR表達水平對肝癌術后長期生存的影響。 結果 肝癌組織中LncRNA TINCR表達水平對術后復發預測的曲線下面積（AUC）為 0.818，特異度為72.73%，敏感度為83.12%，最佳判讀值為1.82（P<0.0001）。根據ROC曲線分析結果，將肝癌組織LncRNA TINCR相對表達水平>1.82的81例（61.36%）患者納入高表達組，而肝癌組織LncRNA TINCR相對表達水平≤1.82的51例（38.64%）患者納入低表達組。Kaplan-Meier法生存分析發現高表達組術后3年內有65例患者出現復發，3年無瘤生存率為19.75%（16/81）;低表達組術后3年內有12例患者出現復發，3年無瘤生存率為76.47%（39/51），低表達組3年無瘤生存率明顯高于高表達組（P<0.0001），兩組間死亡風險比：5.5717，95%CI：3.5642～8.7100。 結論 肝癌組織LncRNA TINCR表達水平與肝癌術后復發顯著相關，LncRNA TINCR表達水平升高則預示術后較高的復發率。

[關鍵詞] 肝細胞癌;肝切除;復發;LncRNA TINCR

[中圖分類號] R735.7 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2020）26-0034-04

[Abstract] Objective To explore the effect of LncRNA TINCR expression level in liver cancer tissue on postoperative recurrence. Methods ?The clinical data of 132 patients with hepatocellular carcinoma who underwent surgery in our hospital from July 2014 to July 2016 were retrospectively analyzed. RT-PCR method was used to detect the expression level of LncRNA TINCR in liver cancer specimens. ROC curve and Kaplan-Meier method were used to analyze the effect of LncRNA TINCR expression level on long-term survival of liver cancer after operation. Results The area under the curve（AUC） of LncRNA TINCR expression level of liver cancer tissues for postoperative recurrence prediction was 0.818， specificity was 72.73%， sensitivity was 83.12%， and the best interpretation value was 1.82（P<0.0001）. According to the results of ROC curve analysis， 81（61.36%） patients with a relative expression level of LncRNA TINCR greater than 1.82 were included in the high expression group， while 51（38.64%） patients with a relative expression level of LncRNA TINCR less than 1.82 were included in the low expression group. Kaplan-Meier method survival analysis found that 65 patients in the high expression group had recurrence within 3 years after operation， and the 3-year tumor-free survival rate was 19.75%（16/81）. Twelve patients in the low expression group had recurrence within 3 years after operation， and the 3-year tumor-free survival rate was 76.47%（39/51）. The 3-year tumor-free survival rate of the low expression group was significantly higher than that of the high expression group（P<0.0001）， The mortality risk ratio between the two groups was 5.5717， with 95% confidence interval of 3.5642-8.7100. Conclusion The expression level of LncRNA TINCR in liver cancer tissue is significantly correlated with the recurrence of liver cancer after surgery， and the increased expression level of LncRNA TINCR indicates a higher probability of postoperative recurrence.

[Key words] Hepatocellular carcinoma; Hepatectomy; Recurrence; LncRNA TINCR

肝細胞癌（Hepatocellular cancer，HCC）目前仍是嚴重危害國民健康的重大公共衛生難題[1-3]，全世界超過一半的新發HCC病例和死亡病例發生在我國。雖然針對HCC的治療有了長足的發展，但是根治手術仍是治療HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于我國大部分HCC發現時已是中晚期，甚至已侵犯膽道及門脈系統，因此術后復發率高，總體預后很不理想[5-6]。目前亟需進一步探討引起HCC術后復發易感因素和靶點，從根本上阻斷HCC術后復發的通路，達到改善預后的目的。終末分化誘導非編碼RNA（Terminal differentiation-induced lncRNA，TINCR）是從人類分化的體細胞中分離得到的一個長3.7 kb 的LncRNA轉錄本[7]。研究發現LncRNA TINCR在肝細胞癌、結直腸癌、胃癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等惡性腫瘤中出現表達異常，并與多種分子相互作用而影響基因轉錄及轉錄后過程，可加速腫瘤的發展[8-11]。本研究旨在探討肝細胞癌組織中LncRNA TINCR表達水平對HCC術后復發的影響，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 病例選擇

回顧性研究 2014年7月～2016年7月間在我院接受手術切除的132例HCC患者。納入標準[12]：未接受任何抗癌治療;非彌漫性HCC;術后隨訪6個月及以上;無失訪情況;所有治療經患者本人知情同意。排除標準：術前已有肝外轉移;術后隨訪短于6個月。

1.2 HCC組織LncRNA TINCR相對表達量檢測

采用Tissue RNA Kit 提取HCC組織RNA，經反轉錄后，用于RT-PCR 檢測組織中TINCR 相對表達量，試劑盒均購自南京東極醫藥科技有限公司，操作過程嚴格參照說明書進行。TINCR 上游引物為5'-CCATCCCTCTGTAACCACCT-3'，下游引物為5'-GTTGGGTCTAGATTCCAGCA-3'，以Actin 為內參，Actin上游引物為5'-ATCATGTTTGCCTAGATCAACA-3'，下游引物為5'-CATCTCTTGCTAAGCGTCCA-3'，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。RT-PCR 程序：95℃預變性10 min;95℃ 10 s，60℃ 35 s，72℃ 30 s，40個循環;最后72℃延伸10 min。

1.3 隨訪及觀察指標

術后半年內每月進行隨訪，之后每3個月1次。隨訪內容包括體格檢查、血常規、生化及腫瘤標記物檢測，如有可疑復發，需行超聲、增強CT、MRI，必要時行腸鏡及穿刺活檢確認。一旦確認腫瘤復發，記錄復發的時間及部位。無瘤生存時間定義為自手術開始直至首次發現復發、死亡（復發前）或最后一次隨訪（復發前）。比較兩組3年無瘤生存情況。

1.4 統計學方法

所有統計均由MEDCALC 15.2軟件完成，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗;計數資料采用χ2檢驗。LncRNA TINCR表達對術后生存的預測作用采用ROC 曲線分析。Kaplan-Meier法繪制患者無瘤生存情況曲線，采用Log-rank法分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HCC組織LncRNA TINCR表達水平對術后復發的預測價值

將HCC組織LncRNA TINCR表達水平與術后復發情況（無復發=0，復發=1）繪制ROC曲線（圖1），并計算得出曲線下面積（AUC）為 0.818，特異度為72.73%，敏感度為83.12%，最佳判讀值為1.82（P<0.0001）。

2.2 HCC組織LncRNA TINCR表達對術后復發的影響

將HCC組織LncRNA TINCR相對表達水平>1.82（ROC曲線所得的最佳判讀值）的81例（61.36%）患者納入高表達組，而將HCC組織LncRNA TINCR相對表達水平≤1.82的51例（38.64%）患者納入低表達組。經比較發現兩組患者的一般資料無顯著性差異（P>0.05）（表1）。高表達組術后3年內有65例患者出現復發，3年無瘤生存率為19.75%（16/81）;低表達組術后3年內有12例患者死亡，3年無瘤生存率為76.47%（39/51）。Log-rank法分析生存曲線發現，低表達組3年無瘤生存率明顯高于高表達組（P<0.0001），兩組間復發風險比：5.5717，95%CI：3.5642～8.7100。（圖2）。

3 討論

HCC目前仍是嚴重危害國民健康的重大公共衛生難題[1-3]，全世界超過一半的新發HCC病例和死亡病例發生在我國。雖然針對HCC的治療有了長足的發展，但是根治手術仍是治療HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我國大部分HCC發現時已是中晚期，甚至已經侵犯膽道及門脈系統，因此術后復發率高，總體預后很不理想[5-6]。目前亟需進一步探究引起HCC術后復發易感因素和靶點，以改善HCC患者預后。

新一代的基因測序技術已經發現超過90%的人類基因組轉錄產生一系列非蛋白編碼（非編碼）RNA（ncRNA）[13-14]。長鏈非編碼RNA（LncRNA）大于200核苷酸長度，雖然不具有蛋白質編碼功能，卻能顯著影響生物學過程[15]。與microRNA相比，LncRNA的功能及機制尚未完全被人類掌握。然而，近年來人們對LncRNA的研究越來越深入。目前已經證實LncRNA能調節多種細胞生理活動，包括染色質修飾，基因印跡，選擇性剪接，基因組重排，細胞增殖、遷移、凋亡以及核質轉運等[16]。研究表明，LncRNA參與了廣泛的生理及病理生理過程，通過正反饋/負反饋通路在癌癥發生發展中起到促癌或抑癌基因的作用[17]。也有證據顯示LncRNA與腫瘤細胞增殖、凋亡、轉移和侵襲有關[18-19]。因此，LncRNA有望成為腫瘤診斷標志物及潛在的治療靶點。

終末分化誘導非編碼RNA（Terminal differentiation-induced lncRNA，TINCR）是從人類分化的體細胞中分離得到的一個長3.7 kb 的LncRNA轉錄本[20]。研究發現TINCR在肝細胞癌、結直腸癌、胃癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等表達異常，TINCR與多種分子相互作用而影響基因轉錄及轉錄后過程，可加速腫瘤的發展[8-11，21]。

近年來關于LncRNA TINCR 在HCC起源和進展中的作用機制及LncRNA TINCR的信號通路越來越受到關注。已有研究發現，HCV所致的肝硬化后HCC組織中LncRNA TINCR的表達較正常肝組織明顯升高[22]。有學者將HCC組織中的LncRNA TINCR的表達水平與腫瘤大小、TNM分期及血管浸潤進行相關性分析，結果兩者相關性緊密，而進一步的生存分析發現，高表達的患者術后無瘤生存率明顯低于低表達患者，從而推測LncRNA TINCR表達升高能增加腫瘤侵襲性，并能促進HCC術后進展[10]。

在本次研究中，HCC組織LncRNA TINCR表達水平對術后復發的ROC曲線下面積（AUC）為 0.818，特異度為72.73%，敏感度為83.12%，最佳判讀值為1.82 （P<0.0001）。通過此結果，將患者分為LncRNA TINCR高表達組和LncRNA TINCR低表達組，Log-rank法分析生存曲線發現低表達組3年無瘤生存率明顯優于高表達組（P<0.0001）。

已有研究顯示，LncRNA TINCR能作為競爭性的結合microRNA（competing endogenous RNA，ceRNA）調控基因表達，其不但可活化某些蛋白編碼基因表達，亦可以抑制蛋白編碼基因的表達[23-25]。目前已經證實，LncRNA TINCR能通過競爭性結合miR-375，從而下調miR-375表達，起到促進腫瘤進展的作用，而大量研究表明miR-375在HCC中發揮抑制腫瘤的功能[26-27]。因此，可以推測通過降低LncRNA TINCR水平能增加miR-375表達，從而抑制HCC進展，能顯著改善HCC預后。

此外，有學者發現LncRNA TINCR， ROCK1（Rho相關蛋白激酶1）和 miR-214-5p三者間存在交互影響。ROCK1在多種腫瘤中過度表達，并能通過調節癌細胞的增殖、侵襲和遷移等行為來促進腫瘤發展，而miR-214-5p可通過直接靶向下調ROCK1表達，起到抑制腫瘤增殖的作用[28]。有研究發現，HCC組織中既有ROCK1的上調又有miR-214-5p的下調。因此推測LncRNA TINCR可能通過吸附作用下調miR-214-5p在HCC中表達，從而上調ROCK1，起到促進HCC細胞增殖及轉移的作用[29]。

綜上所述，HCC組織LncRNA TINCR表達水平與HCC術后復發關系緊密，LncRNA TINCR表達水平升高則預示著較高的復發率，因此LncRNA TINCR可能是降低HCC術后復發率的有效治療靶點。

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（收稿日期：2020-02-13）