DR-NM23在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析

馬秀麗　陳慶明　陳登榮　張潔民

[摘要] 目的 分析DR-NM23在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法 該院于2016年2月—2019年6月方便擇選研究病例共50例，均是浸潤性乳腺癌病患，收集整體臨床資料，取病理癌組織，以免疫組織化學(xué)法對所取癌組織中所含DR-NM23情況進(jìn)行檢測，同時分析該基因在癌癥中的表達(dá)以及其和臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，以期能為疾病的治療提供相應(yīng)的參考依據(jù)。結(jié)果 經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，50例患者中有13例DR-NM23在癌組織中呈陽性狀態(tài)，即陽性表達(dá)率為26.0%;另外經(jīng)免疫組織檢測發(fā)現(xiàn)，有43例患者DR-NM23在癌旁組織中呈陽性，其表達(dá)率為86.0%。通過多因素Logistic回歸分析可知，浸潤性乳腺癌組織中所含DR-NM23蛋白和雌激素受體表達(dá)、組織學(xué)分級、TNM分期和淋巴轉(zhuǎn)移表達(dá)之間為負(fù)相關(guān)狀態(tài)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。DR-NM23和患者年齡、Her-25受體、腫瘤體積大小以及PR受體之間存在的關(guān)系不明顯（P>0.05）。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件的比較檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，癌組織中DR-NM23表達(dá)水平較癌旁組織DR-NM23表達(dá)水平而言，明顯要低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 在浸潤型乳腺癌的臨床診療中對患者癌組織中DR-NM23進(jìn)行檢測，可為了解疾病的發(fā)生和發(fā)展提供相應(yīng)的參考資料，為治療方案的明確提供更為合理的理論依據(jù)，使疾病的診療更為科學(xué)、準(zhǔn)確。

[關(guān)鍵詞] 浸潤性乳腺癌;臨床;表達(dá);病理參數(shù);DR-NM23

[中圖分類號] R737.9? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2020）09（b）-0025-03

The Expression of DR-NM23 in Invasive Breast Cancer and Its Relationship with Clinicopathological Parameters

MA Xiu-li， CHEN Qing-ming， CHEN Deng-rong， ZHANG Jie-min

Department of Pathology， People's Hospital of Wuwei City， Wuwei， Gansu Province， 733000 China

[Abstract] Objective To analyze the expression of DR-NM23 in invasive breast cancer and its relationship with clinicopathological parameters. Methods From February 2016 to June 2019， the hospital convenient selected a total of 50 research cases， all of whom were patients with invasive breast cancer. The overall clinical data was collected， and the cancer tissues of the cases were collected， and the cancer tissues were analyzed by immunohistochemistry. The condition of DR-NM23 contained in the DR-NM23 is detected， and the expression of the gene in cancer and its relationship with clinical pathological parameters are analyzed at the same time， in order to provide a corresponding reference basis for the treatment of the disease. Results It was found through testing that 13 of 50 patients were positive for DR-NM23 in cancer tissues， that is， the positive expression rate was 26.0%. In addition， immune tissue testing found that there were 43 patients with DR-NM23 in adjacent tissues. It was positive in C， and its expression rate was 86.0%. Through multivariate logistic regression analysis， it can be seen that the expression of DR-NM23 protein and estrogen receptor， histological grade， TNM stage and lymphatic metastasis expression contained in invasive breast cancer tissue are negatively correlated， and the difference is statistically significant（P<0.05）. The relationship between DR-NM23 and patient age， Her-25 receptor， tumor size and PR receptor is not obvious（P>0.05）. The comparative test of statistical software found that the expression level of DR-NM23 in cancer tissues was significantly lower than that in adjacent tissues， and the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion The detection of DR-NM23 in the cancer tissues of patients in the clinical diagnosis and treatment of invasive breast cancer can provide corresponding reference materials for understanding the occurrence and development of the disease， and provide a more reasonable theoretical basis for the clarification of the treatment plan. The diagnosis and treatment of diseases is more scientific and accurate.

[Key words] Invasive breast cancer; Clinical; Expression; Pathological parameters; DR-NM23

近年來，乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重威脅女性患者的生命健康，是女性最常見的惡性腫瘤之一，其中，浸潤性乳腺癌是其最主要的分型。DM23是首個被發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，DR-NM23位于16q13染色體上。有研究顯示，DR-NM23與多種腫瘤的生長、增殖、分化、凋亡、轉(zhuǎn)移等過程相關(guān)，并參與神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞、骨髓細(xì)胞瘤細(xì)胞等瘤細(xì)胞的分化和凋亡，而營養(yǎng)干預(yù)、維持正常體重等一級干預(yù)可減少乳腺癌的發(fā)生[1-2]。該研究方便選取2016年2月—2019年6月該院收治的50例女性患者為研究對象，分離其乳腺癌組織，通過免疫組化及試劑來檢測DR-NM23蛋白表達(dá)，進(jìn)一步探討DR-NM23與乳腺癌的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便擇選研究50例浸潤性乳腺癌患者，均滿足浸潤性乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有病例均在知情的條件下，簽訂同意書。該次研究已征得醫(yī)院倫理委員會的審批。為確保研究的準(zhǔn)確性以及可信性，將以下患者排除：伴其他嚴(yán)重器質(zhì)性、血液性疾病患者;合并其他惡性腫瘤威脅到生命安全的患者;有精神病史患者;有語言溝通交流障礙患者。該次研究全部病例標(biāo)本的檢測均由兩名以上專業(yè)醫(yī)生完成。患者年齡在45～71歲范圍內(nèi)，平均年齡為（56.42±6.21）歲;病程1～5年，平均病程為（3.42±1.02）年。

1.2? 方法

收集整理患者臨床資料，該次研究所需的試劑主要如下：兔抗人的DR-NM23多克隆抗、免疫組化試劑盒、小鼠抗人β-actin單克隆抗體、RIPA裂解液、BCA蛋白測定試劑盒以及上樣緩沖液等，上述試劑均由專業(yè)醫(yī)藥公司所制。借助于免疫組織化學(xué)法對浸潤性乳腺癌中DR-NM23表達(dá)情況進(jìn)行檢測，以1：50對DR-NM23抗體進(jìn)行稀釋，操作過程如下：施予脫臘水化，進(jìn)行抗原修復(fù)，而后封閉，等待一段時間后添加已稀釋過的DR-NM23抗體，接著再將HRP標(biāo)記的鏈霉親和素添加至此，通過DAB顯色，最后在進(jìn)行復(fù)染脫水和封片。整個操作過程必須要做好相應(yīng)的消毒工作，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

1.3? 觀察指標(biāo)

經(jīng)免疫組織化學(xué)法對DR-NM23表達(dá)的檢測，其結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)如下：于低倍鏡下對免疫組織切片進(jìn)行觀察，初步判斷染色達(dá)標(biāo)情況和有無DR-NM23表達(dá)的異質(zhì)性。參照《乳腺癌DR-NM23檢測指南，若>10%的腫瘤細(xì)胞為不完整且微弱細(xì)胞膜著色則為陰性;若>10%的腫瘤細(xì)胞為完整且細(xì)胞膜呈弱到中等程度著色，或者≤10%的腫瘤細(xì)胞為強(qiáng)且完整的細(xì)胞膜著色則是不確定。根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行計(jì)分，即0分對應(yīng)的是無色，1分對應(yīng)的是黃色，2分對應(yīng)的是棕色，3分對應(yīng)的是褐色;接著再根據(jù)陽性細(xì)胞在癌組織中所占百分比進(jìn)行計(jì)分，1%所對應(yīng)的是1分，2%所對應(yīng)的是2分，3%對應(yīng)的是3分......以此類推100%對應(yīng)的是100分。若染色強(qiáng)度的分?jǐn)?shù)與陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)的分?jǐn)?shù)相乘所得到的結(jié)果≥20，則表示結(jié)果呈陽性[4]。根據(jù)免疫組織化學(xué)切片情況事先明確可能存在擴(kuò)張浸潤癌區(qū)域，接著再100倍物鏡下對DR-NM23進(jìn)行觀察分析。所有數(shù)據(jù)均由兩位以上專業(yè)醫(yī)師處理分析。

1.4? 統(tǒng)計(jì)方法

利用專業(yè)SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理和分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，組間比較用χ2檢驗(yàn);計(jì)量數(shù)據(jù)用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。借助于Logistic回歸分析DR-NM23在癌組織中和臨床各病理參數(shù)之間的關(guān)系。

2? 結(jié)果

2.1? DR-NM23在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)分析

通過免疫組織化學(xué)法對浸潤性乳腺癌病例癌組織中DR-NM23的檢測發(fā)現(xiàn)，在癌組織以及癌旁組織中DR-NM23基因不管是陽性表達(dá)，還是陰性表達(dá)，多表達(dá)在細(xì)胞胞漿內(nèi)，在50例患者中有13例在癌組織中呈陽性，其表達(dá)率為26.0%;在癌旁組織中有43例患者DR-NM23表達(dá)呈陽性，其表達(dá)率為86.0%。經(jīng)過分析，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。13例癌組織中DR-NM23為陽性的患者，其免疫組化平均分?jǐn)?shù)（15.73±8.15）分;43例癌旁組織中DR-NM23呈陽性的患者，其免疫組化平均分?jǐn)?shù)（134.29±54.01）分，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件的處理分析發(fā)現(xiàn)，癌組織中DR-NM23表達(dá)水平和癌旁組織中DR-NM23表達(dá)水平相比較，前者明顯要低，二者數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2? DR-NM23在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析

DR-NM23在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系見表1，通過表1數(shù)據(jù)的分析發(fā)現(xiàn)，癌組織中DR-NM23的表達(dá)和雌激素受體水平、組織學(xué)分級、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。DR-NM23和患者年齡、Her-25受體、腫瘤體積大小以及PR受體差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。通過多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，癌組織中DR-NM23的表達(dá)和雌激素受體水平、組織學(xué)分級、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間呈負(fù)相關(guān)，見表2。

3 討論

浸潤性乳腺癌指的是癌細(xì)胞已經(jīng)穿破乳腺導(dǎo)管或者小葉腺泡基底膜且侵入間質(zhì)的惡性腫瘤，大部分浸潤性乳腺癌都是腺癌，起源乳腺實(shí)質(zhì)上皮細(xì)胞，尤其是乳腺末梢導(dǎo)管小葉細(xì)胞。大量臨床實(shí)踐研究和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道表示，浸潤性乳腺癌存在很多形態(tài)學(xué)表型，同時根據(jù)自身所特有的預(yù)后或者臨床體征被明確劃分成為不同的組織病理學(xué)，有報(bào)道研究表示，高組織學(xué)分級腫瘤在某些化療方案產(chǎn)生的反應(yīng)上要比一些低組織學(xué)分級腫瘤好。引起浸潤性乳腺癌的病因有很多，其中一個主要高危因素就是乳腺癌家族史，另外還包含飲食、相關(guān)基因突變、生育和激素失調(diào)等，其主要臨床表現(xiàn)為乳腺腫塊、乳頭溢液、皮膚改變、腋窩淋巴結(jié)腫大或者乳頭、乳暈異常等。目前在浸潤性乳腺癌的臨床診斷中，多經(jīng)乳腺X線攝影、乳腺磁共振檢查或者彩超等完成。NM23基因家族編碼的蛋白質(zhì)為二磷酸核苷激酶（NDPK），其最早發(fā)現(xiàn)于酵母菌和鴿子胸肌中，而后有報(bào)道證實(shí)該蛋白質(zhì)活性為該家族共同活性，和細(xì)胞分化、增殖活動有著密切的關(guān)系[3]。DR-NM23又被叫做NME3或者NM23-H3，該基因表達(dá)產(chǎn)物NDPKG的產(chǎn)物以及結(jié)構(gòu)大致一樣，僅于氨基末端位置有多個氨基酸，而這些氨基酸能組成疏水性基團(tuán)，處于表面的NDPKG具備膜連接活性，不管是在體外，還是在體內(nèi)，借助于膜連接活性均能夠使C亞基和A/B亞基結(jié)合成為異六聚體[4]。由以上結(jié)果可知，50例患者經(jīng)檢測有13例DR-NM23在癌組織中呈陽性狀態(tài)，即陽性表達(dá)率為26.0%;另外經(jīng)免疫組織檢測發(fā)現(xiàn)，有43例患者DR-NM23在癌旁組織中呈陽性，其表達(dá)率為86.0%，這與林宇等[8]學(xué)者在相關(guān)研究中得出，68例女性乳腺癌患者經(jīng)檢測，DR-NM23陽性表達(dá)率為30.4%，經(jīng)免疫組織檢測發(fā)現(xiàn)，在癌旁組織中DR-NM23的陽性表達(dá)率為78.6%，與該文所得結(jié)果相近。同時，有文獻(xiàn)報(bào)道表示乳腺癌NM23基因的表達(dá)出現(xiàn)異常，提示腫瘤轉(zhuǎn)移抑制的基因NM23降低和腫瘤轉(zhuǎn)移的可能性存在密切的關(guān)系，其作用機(jī)制可能和癌細(xì)胞外基質(zhì)粘附性下降以及基因突變造成組氨酸蛋白激酶活性下降、癌細(xì)胞侵襲生長因子、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)能力減弱等因素相關(guān)[6-8]。

綜上所述，在浸潤性乳腺癌中DR-NM23表達(dá)水平低，加強(qiáng)DR-NM23的表達(dá)和臨床病理參數(shù)之間關(guān)系的研究可為疾病的轉(zhuǎn)移預(yù)測以及靶向治療提供合理的參考依據(jù)，確保疾病治療的安全性。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 張華成，張麗婷，吳文藝， 等.環(huán)指蛋白43在乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2019，36（12）：2264-2268.

[2]? 于秀艷，萬廣財(cái)，孫洪帥， 等.纖維蛋白原與乳腺癌患者預(yù)后關(guān)系的Meta分析[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2019，45（5）：1092-1097.

[3]? 王陽，屈翔，葛智成，等.絕經(jīng)后浸潤性乳腺癌患者的乳腺密度與病理學(xué)指標(biāo)及分子分型的關(guān)系[J].癌癥進(jìn)展，2019，17（19）：2302-2305.

[4]? 羅莉，魏曙光，常遼， 等.乳腺癌BRCA1相互作用蛋白1基因功能區(qū)單核苷酸多態(tài)性與習(xí)慣性流產(chǎn)的相關(guān)性[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2019，40（6）：959-961，972.

[5]? 林宇，胡海燕，李清漪， 等.乳腺癌組織中乳腺癌擴(kuò)增序列2與β-連環(huán)蛋白的表達(dá)及其相關(guān)性研究[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2019，35（19）：2318-2320.

[6]? 邱志敏， 傅穎媛. 程序性死亡因子配體1（PD-L1）在乳腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)關(guān)系和預(yù)后分析[C]//上海：全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會，2018.

[7]? 袁建良，蔣曉波.DR-NM23在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2018（23）：3760-3763.

[8]? 高玉霞， 沈媛. P53及nm23在不同分子亞型浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及意義[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐，2015（1）：58-61.

（收稿日期：2020-06-17）

[作者簡介] 馬秀麗（1983-），女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：乳腺及婦產(chǎn)臨床病理。