血清糖化清蛋白檢測(cè)方法學(xué)評(píng)價(jià)、臨床性能驗(yàn)證及其在糖尿病監(jiān)測(cè)的應(yīng)用研究

趙淑珍，鄭錦仁，陳 媛，茅夏銘（烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，烏魯木齊 830000）

糖尿病（diabetes mellius,DM）是一種以血糖升高為特征的代謝紊亂性疾病，長期高血糖，可引起血管、腎、眼組織等系統(tǒng)器官損傷及功能障礙，嚴(yán)重危害患者健康。有效控制血糖水平是預(yù)防DM并發(fā)癥的關(guān)鍵措施[1]。《中國公民健康素養(yǎng)66條》中專門提出要關(guān)注血糖變化，改變糖尿病危險(xiǎn)因素，糖尿病患者要加強(qiáng)自我健康管理，血糖監(jiān)測(cè)是糖尿病管理中的重要組成部分，目前臨床上血糖監(jiān)測(cè)方法有空腹血糖測(cè)定，反映2～3周平均血糖水平的糖化清蛋白（glycaed Albumin,GA）及2～3個(gè)月平均血糖水平的糖化血紅蛋白（glycaled hemolobin,HbA1c）檢測(cè)等[2]。

HbA1c是反映長期血糖控制水平的金標(biāo)準(zhǔn)[3]；而GA是反映近期血糖的控制水平，在2～3周總體血糖水平的評(píng)估、初步診斷糖尿病患者及近期降糖療效評(píng)價(jià)等方面較HbA1c更有優(yōu)勢(shì)。本文旨在探討GA性能評(píng)價(jià)與HbA1c相關(guān)性及在糖尿病管理中的應(yīng)用，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院2018年11月～2019年11月收治的首次確診156例DM患者為觀察組,其中男性86例，女性70例，年齡31～75歲，平均年齡52.1±6歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病所有患者均符合1999年世界衛(wèi)生組織（WHO）診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：①具有糖尿病癥狀，且空腹血糖≥7.0mmol/L或餐后2h血糖≥11.1mmol/L；②無糖尿病癥狀者，空腹血糖≥7.0mmol/L或餐后2h血糖≥11.1mmol/L，重復(fù)測(cè)定1次，無改變者；③無糖尿病癥狀者，空腹血糖≥7.0mmol/L或餐后2h血糖≥11.1 mmol/L，并且糖耐量試驗(yàn)2h血糖≥11.1mmol/L三者中任意2條標(biāo)準(zhǔn)或符合同一標(biāo)準(zhǔn)2次者可診斷為糖尿病。排除條件：妊娠、貧血、肝臟疾病及甲狀腺疾病患者、應(yīng)用激素等影響因素。同時(shí)選取我院體檢中心同期健康體檢者150例作為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①無糖尿病病史；②無高血壓、腎臟疾病、心腦血管疾病；③神經(jīng)系統(tǒng)疾病；④無貧血疾病。其中男性80例，女性70例，年齡29～70歲，平均年齡51±5歲。

1.2 試劑和儀器

1.2.1 試劑：GA試劑盒、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品均使用邁克生物公司產(chǎn)品，批號(hào)分別為2019042101，2019040103，2019032402。血清清蛋白試劑盒（北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司，批號(hào)19-0311）。糖化血紅蛋白試劑使用伯樂公司產(chǎn)品，洗脫緩沖液A、洗脫緩沖液B、清洗液批號(hào)分別為：64296650，64293406，64294501。

1.2.2 儀器：貝克曼AU5800全自動(dòng)生化分析儀。伯樂D-20高效液相色譜儀。

1.3 方法

1.3.1 采集觀察組和對(duì)照組血清進(jìn)行GA（胴胺氧化酶法）與清蛋白（Albumin，Alb溴甲酚綠法）兩項(xiàng)目測(cè)定，將血清GA濃度除以血清Alb濃度，計(jì)算出GA（%），采集觀察組156例DM患者血漿進(jìn)行HbA1c測(cè)定（高效液相色譜法）。并將測(cè)定的GA和HbA1c濃度進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.3.2 對(duì)酶法測(cè)定GA的精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍進(jìn)行性能驗(yàn)證參照文獻(xiàn)[4]方法進(jìn)行。

1.3.2.1 精密度驗(yàn)證:精密度包括批內(nèi)和批間精密度，精密度使用變異系數(shù)來表示。批內(nèi)精密度：將3個(gè)濃度的樣品同時(shí)測(cè)定，連續(xù)檢測(cè)20次；使用統(tǒng)計(jì)描述程序計(jì)算均值（x）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）和變異系數(shù)（CV）；當(dāng)CV值小于1/4允許總誤差時(shí)結(jié)果可接受。批間精密度：每天同一時(shí)間檢測(cè)1次3個(gè)濃度的評(píng)價(jià)標(biāo)本，測(cè)定20天，同批內(nèi)精密度方法計(jì)算其x，s及CV；以批間CV小于1/3允許總誤差為結(jié)果可接受。

1.3.2.2 精密度驗(yàn)證：它的性能以誤差的大小來評(píng)價(jià)，通過測(cè)定已知濃度的校準(zhǔn)品，計(jì)算校準(zhǔn)品的相對(duì)偏倚。計(jì)算公式為相對(duì)偏倚=(靶值-測(cè)定值)/靶值×100%，如果相對(duì)偏倚在允許的偏倚范圍內(nèi)結(jié)果可接受。

1.3.3.3 線性范圍的驗(yàn)證：選取1份高濃度標(biāo)本（H）和低濃度標(biāo)本（L），其濃度接近廠家提供的測(cè)定上限與下限，按照5L，4L+1H，3L+2H，2L+3H，1L+4H和5H的比例混合成6個(gè)不同濃度的樣品。把實(shí)測(cè)值（Y）與理論值（X）進(jìn)行比較，使用Y=bX+a計(jì)算其回歸方程及線性范圍。相關(guān)系數(shù)（r）、b值及截距a要符合下列條件，r≥0.975,b值范圍在1±0.05內(nèi),截距a要小于檢測(cè)上限的5%。

1.3.3.4 臨床的性能驗(yàn)證：臨床的性能驗(yàn)證能力使用靈敏度和特異度兩個(gè)指標(biāo)來評(píng)價(jià)。靈敏度就是由金標(biāo)準(zhǔn)明確診斷為DM的觀察組內(nèi)所檢測(cè)出的陽性病例數(shù)比率（%），也就是實(shí)驗(yàn)診斷的真陽性率。靈敏度=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有原始數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料使用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，觀察組與對(duì)照組數(shù)據(jù)之間比較使用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）表示，兩組間的比較進(jìn)行卡方（χ2）檢驗(yàn)。用Pearsom進(jìn)行指標(biāo)間相關(guān)性分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。指標(biāo)診斷價(jià)值的評(píng)價(jià)采用ROC曲線分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)為0.05。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)性能驗(yàn)證

2.1.1 精密度驗(yàn)證：低、中及高值3個(gè)不同濃度的批內(nèi)與批間精密度數(shù)值均低于CLIA’88分析質(zhì)量規(guī)定的1/3允許誤差時(shí)，兩者精密度均為可接受。見表1。

表1 GA糖化清蛋白精密度

2.1.2 準(zhǔn)確度驗(yàn)證：測(cè)定與當(dāng)前檢測(cè)系統(tǒng)使用校準(zhǔn)的校準(zhǔn)品，重復(fù)測(cè)定3次，結(jié)果分別為497.21，498.46和496.62μmol/L，其均值為497.43μmol/L，理論值（廠家給出的靶值）為490μmol/L，計(jì)算出的相對(duì)偏倚數(shù)值為1.51%,該值小于1.67%〔CLIA’88分析質(zhì)量規(guī)定所要求的低于1/3允許誤差（5%）〕，結(jié)果可以接受。

2.1.3 線性范圍：取足夠量的GA低值（L）與高值標(biāo)本（H）各1份，濃度含量分別為125μmol/L和935μmol/L。按照1.3.3.3線性范圍的驗(yàn)證方法，混合成6個(gè)不同濃度的樣本，編號(hào)分別標(biāo)記為1，2，3，4，5，6。實(shí)際測(cè)定值Y為縱坐標(biāo)，理論值X作為橫坐標(biāo)做散點(diǎn)圖，并且計(jì)算回歸方程式Y(jié)=bX+a中b及a值，得出線性方程為Y=1.001X+1.120，r=0.989 0，說明GA在125～935μmol/L范圍內(nèi)呈良好線性。見表2及圖1。

表2 糖化清蛋白線性范圍評(píng)價(jià)

圖1 GA線性曲線圖

2.1.4 臨床的性能驗(yàn)證：檢測(cè)觀察組與對(duì)照組的GA濃度，當(dāng)GA＞16%時(shí)為陽性。GA的DM患者靈敏度、特異度分別為91.02%和95.1%。

2.2 DM患者GA與HbA1c結(jié)果比對(duì)

2.2.1 GA與HbA1c陽性率分析：見表3。GA＞16%（參考區(qū)間上限）和HbA1c＞6.5%（參考區(qū)間上限）判定為陽性。在156例確診為糖尿病的患者中，GA超過參考區(qū)間上限的陽性142例（91.2%）,HbA1c超過參考區(qū)間上限的陽性149例(95.51%)。GA和HbA1c的總一致性為90.38%，經(jīng)配對(duì)資料χ2檢驗(yàn)，P=1.060,說明兩種方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3 GA與HbA1c一致性分析[n=156,n（%）]

2.2.2 GA和HbA1c檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性分析:以GA為縱坐標(biāo),以HbA1c為橫坐標(biāo),做散點(diǎn)圖,GA和HbA1c回歸方程為Y=1.04X+1.51，r=0.994 1，P＜0.01。見圖2。

2.3 觀察組與對(duì)照組測(cè)定值比較：見表4。觀察組156例糖尿病人GA，HbA1c的測(cè)定結(jié)果明顯高于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖2 GA和HbA1c相關(guān)性

表4 觀察組與對(duì)照組GA（%），HbA1c測(cè)定 結(jié)果比較（±s）

表4 觀察組與對(duì)照組GA（%），HbA1c測(cè)定 結(jié)果比較（±s）

指標(biāo) 觀察組（n=156）對(duì)照組(n=150) t P FPG（mmol/L） 9.11±2.8 4.92±1.13 11.01 0.000 GA(%) 26.13±4.91 11.56±1.69 17.31 0.000 HbA1c(%) 8.31±3.12 5.01±1.52 9.59 0.000

2.4 GA和DM的診斷價(jià)值 ROC曲線顯示GA診斷DM的曲線下面積（AUC）為0.919，敏感度為91.02%，特異度為95.01%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖3。

圖3 GA對(duì)GM的ROC曲線

3 討論

3.1 血糖監(jiān)測(cè)是糖尿病（DM）管理的重要組成部分，在DM的診斷和治療中具有重要地位。幫助評(píng)估DM患者代謝紊亂的程度、制訂合理除糖方案、降低DM引起并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)、同時(shí)反映療效并指導(dǎo)治療方案的調(diào)整，因此控制血糖水平顯得尤為重要。HbA1c是反映血糖水平長期控制的金標(biāo)準(zhǔn)，表示2～3個(gè)月的平均血糖水平[6]。而GA是反映2～3周平均血糖水平，它反映近期血糖控制水平，是對(duì)HbA1c這個(gè)長期控制指標(biāo)的有效補(bǔ)充。GA/HbA1c比值現(xiàn)在也作為了血糖控制的一個(gè)新指標(biāo)，它不僅反映平均血糖水平，而且與血糖波動(dòng)呈明顯的相關(guān)性[7]。上海第六人民醫(yī)院包玉倩[8]團(tuán)隊(duì)近期發(fā)現(xiàn)，中心性肥胖人群GA和GA/HbA1c比值低于非肥胖人群，GA和GA/HbA1c比值與中心性肥胖負(fù)相關(guān)，然而相關(guān)的機(jī)制尚未明確。有觀點(diǎn)認(rèn)為肥胖屬于慢性低度炎癥性疾病，而炎癥會(huì)降低清蛋白生成率，增加其分解代謝率，進(jìn)而導(dǎo)致肥胖人群GA水平下降[6]。

3.2 GA是在糖化血清蛋白（GSP）基礎(chǔ)上進(jìn)行的檢測(cè)，GSP是測(cè)定蛋白中糖化物的絕對(duì)值，GA則是測(cè)定清蛋白的糖化率，故不受血清中蛋白濃度、膽紅素、妊娠、貧血及低分子物質(zhì)等因素的影響[9]，能反映體內(nèi)真實(shí)的血糖水平，可作為近期血糖水平的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，針對(duì)特殊人群的血糖評(píng)估時(shí)具有顯著優(yōu)勢(shì)[10]。患有糖尿病或GDM的孕婦存在缺鐵性貧血，導(dǎo)致HbA1c升高，但不影響GA，因此GA被認(rèn)為是妊娠期血糖控制的最佳指標(biāo)[11]。近期有研究還證實(shí)GA對(duì)糖尿病并發(fā)癥之一的視網(wǎng)膜病變具有更高的診斷效能[12]。

3.3 本研究對(duì)GA進(jìn)行了方法學(xué)評(píng)價(jià)及臨床的性能驗(yàn)證，對(duì)酶法測(cè)定GA的批內(nèi)精密度、批間精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證均符合要求，保證了測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。本研究證實(shí)觀察組GA（%）和HbA1c陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對(duì)GA和HbA1c進(jìn)行相關(guān)分析得出，GA與HbA1c濃度水平呈強(qiáng)正相關(guān)性。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明觀察組與正常對(duì)照組相比，GA與HbA1c濃度水平明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。通過分析ROC曲線表明GA（%）對(duì)GM的診斷具有較高的診斷價(jià)值。綜上所述，GA將成為集糖尿病篩查、診斷、監(jiān)測(cè)、預(yù)后為一體的綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)。簡(jiǎn)言之，GA的未來與展望是一個(gè)具有發(fā)展?jié)摿Φ难潜O(jiān)測(cè)指標(biāo)，GA正不斷豐富著我們的認(rèn)知并揭示許多新現(xiàn)象[13]。