梅里埃VTIEK MS質譜儀在甲氧西林耐藥及敏感的金黃色葡萄球菌快速鑒定的應用研究

林曉暉，麥惠香，簡夢華，朱劍霞，邱偉波(廣州市番禺區中心醫院，廣州 511400)

金黃色葡萄球菌是革蘭氏陽性球菌致病菌,可引起化膿感染、肺炎、偽膜性腸炎,甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）自1961年首次被發現至今，其感染幾乎遍及全球，且感染率呈逐年增加的趨勢[1]。基質輔助激光解吸/電離技術是新近出現的可用于微生物鑒定的強有力的技術[2-3]，VTIEK MS質譜儀是法國生物梅里埃公司的基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜儀（MALDI-TOF MS）。本研究探討VTIEK MS質譜儀快速鑒定甲氧西林耐藥及敏感的金黃色葡萄球菌的可行性。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 2018年1月～2019年4月廣州市番禺區中心醫院各個病區患者各種標本分離的MRSA 30株及MSSA 20株。其中MRSA標本中痰標本6株，血液5株，分泌物14株，尿標本2株，糞便、穿刺液及膿各1株。MSSA標本中，血液5株，分泌物14株，痰1株。

1.2 試劑及儀器 金黃色葡萄球菌的藥敏卡AST-P639及VITEK 2 Compact全自動細菌分析儀為生物梅里埃公司的產品。甲酸、基質及靶板購自法國生物梅里埃公司，基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜儀（MOLDI-TOF MS）為法國生物梅里埃公司的VITEK MS。

1.3 方法

1.3.1 菌株的培養和鑒定：把30株及20株復蘇后的MRSA及MSSA轉入血平板，35℃CO2溫箱孵育24 h，按儀器的操作要求用VITEK MS進行鑒定并得到相應的質譜峰圖。質控菌株為大腸埃希菌ATCC8739。

1.3.2 藥敏試驗及質控菌株：金黃色葡萄球菌用VITEK2 Compact的藥敏卡AST-P639藥敏進行藥敏試驗，結果參照CLSI2018規定的標準判斷，質控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC29213。

1.4 統計學分析 把30株MRSA及20株的MSSA質譜峰圖用法國生物梅里埃公司VITEK MS的Launch pad軟件進行比較。

2 結果

2.1 MRSA及MSSA的臨床資料 30株MRSA其中痰標本6株，血液5株，分泌物14株，尿標本2株，糞便、穿刺液及膿各1株；病區分布ICU 5株，腎病風濕科4株，內分泌科4株，呼吸內科2株，創傷骨科4株，神經外科3株，乳腺科2株，消化內科、康復科、微創介入科、關節骨科、泌尿外科、耳鼻喉科各1株。20株MSSA中，血液標本5株，分泌物標本14株，痰標本1株；病區分布中ICU 2株，內分泌科2株，腎病風濕科2株，心血管內科2株，耳鼻喉科3株，感染科2株，乳腺科2株，血液科、微創介入科、關節骨科、綜合病區、新生兒科各1株。

2.2 MRSA及MSSA質譜峰圖分析 用VITEK MS質譜儀科研庫（RUO）的Launch pad軟件對MRSA及MSSA所產生的質譜峰圖m/z進行分析，質譜峰m/z的3 009，5 624，6 887為金黃色葡萄球菌的特征峰，2 637，4 308為區分MRSA及MSSA最主要的特征峰，其中MSSA組的質譜峰m/z在2 637低于MRSA組，而質譜峰m/z 4 308時MRSA組則高于MSSA組。不同的菌株MRSA的質譜峰略有差異。A1,A2,B4為MRSA，分別為分泌物，血及痰標本，A3，B1為MSSA，分別為血及分泌物標本。結果見圖1及圖2。

圖1 部分MRSA及MSSA在2 000～7 000質譜峰圖

圖2 部分MRSA及MSSA在2 500～4 500質譜峰圖

3 討論

由于MRSA具有感染的發病率和致死率較高,傳染性強，容易導致流行的暴發等特點。如何快速區分MRSA及MSSA成為臨床微生物檢驗及臨床治療的迫切任務。分析本研究中菌株的臨床資料，標本大部分來源于分泌物，這可能與金黃色葡萄球菌感染部位以化膿性感染為主有關。另外，血液標本僅次于分泌物標本，這可能與大部分病患有基礎疾病且在住院期間使用呼吸機、置管或植入物等侵入性操作有關。

MALDI-TOF MS是通過飛行時間不同而被檢測即測定離子的質荷比（M/Z）與離子的飛行時間呈正比，檢測離子。MALDI-TOF MS技術具有快速、準確、靈敏、自動化等特點[4]，逐漸在微生物實驗室鑒定中占有重要的地位[5]，雖然MALDI-TOF MS用于微生物的鑒定已日趨成熟，但該技術在細菌藥物敏感性及細菌耐藥性研究的能力仍然有限[6]。近年來，也有學者用MOLDI-TOF MS快速區分MRSA及MSSA[7-8]；MALDI-TOF MS還可用于MRSA的分型及克隆菌株的分子流行病學研究[9]。

本研究中，我們用VITEK MS的Launch pad軟件的質譜峰區分MRSA及MSSA，從圖1我們可以看到，質譜峰m/z為2 637，4 308為區分MRSA及MSSA最主要的特征峰。其中MSSA組的質譜峰m/z在2 637低于MRSA組，而質譜峰m/z 4 308時MRSA組則高于MSSA組。不同的菌株的質譜峰略有差異，這可能由于不同的菌株而不盡相同。另外，不同標本的來源以及不同的培養條件下的MRSA及MSSA菌株也可能是造成質譜峰不同的原因。

綜上所述，VITEK MS可快速準確鑒別MRSA及MSSA，為臨床提供一種快速全面簡便的方法。