乳腺癌組織中lncRNA PVT1的表達與患者臨床特征及總體生存率的關系

牛智平，王 娟，汪富濤，成 勇，舒俊偉，杜嘉源

(1.安康市人民醫院普外科，陜西安康 725000，2.西安大興醫院婦產科 西安 710014)

乳腺癌是全球范圍內女性中最常見和死亡率最高的惡性腫瘤。全球每年新增乳腺癌病例約167.1萬，死亡人數約52.2萬[1]，并且近年來其發病率總體呈上升趨勢。目前乳腺癌的分子診療發揮著至關重要的作用[2-4]。PVT1是一個長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)，其位于染色體8q24“基因沙漠”區。lncRNA PVT1被認為是癌癥相關基因的結合區，WANG等[5]在肝細胞癌組織中發現PVT1高表達，并促進肝癌細胞系增殖、細胞循環及干細胞樣改變，且PVT1的升高與較差的預后相關。YANG等[6]在非小細胞肺癌中發現PVT1高表達，并且體外癌細胞敲除PVT1后可抑制腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲。目前關于lncRNA PVT1與乳腺癌的文獻報道較少，本研究通過分析乳腺癌中lncRNA PVT1的表達水平及其與患者臨床特征和總體生存率(overall survival，OS)間的關系，以期為乳腺癌的預后和診療提供新的有價值的生物學指標。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2010年1月～2014年12月期間安康市人民醫院收治并經病理學檢查確診的乳腺癌患者148例為研究對象，患者均為女性，年齡28～83歲，平均年齡55.22±10.96歲。病理類型均為浸潤性癌。手術治療中留取乳腺癌組織和癌旁正常組織(距病灶2 cm)。本研究經我院倫理委員會批準通過，所有患者均自愿參加且簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑 TRIzol Reagent購自美國Invitrogen公司，RNA反轉錄試劑盒和RT-PCR試劑盒均購自TAKARA公司，PCR引物的合成和設計由生工生物工程(上海)股份有限公司完成，PCR儀為ABI Prism 7900HT型。

1.3 方法 采用TRIzol法提取乳腺癌組織及其相應癌旁正常組織中的總RNA，然后采用RNA反轉錄試劑盒和RT-PCR試劑盒將RNA反轉錄為cDNA，以cDNA為模板進行PCR擴增。結果采用2-ΔΔCt法進行分析。GAPDH作為內參基因，如果癌組織中的表達量高于相應的癌旁組織則為高表達，反之是低表達。lncRNA PVT1的引物設計為：5’GTCTCCCTATGGAATGTAAG-3’，3’AGTGTCCTGGCAGTAAAAG-5’。GAPDH的引物設 計 為：5’GGTGGTCTCCTCTGACTTCAACA-3’，3’GTTGCTGTAGCCAAATTCGTTGT-5’’。

1.4 統計學分析 采用SPSS20.0統計學軟件進行數據分析，采用配對t檢驗分析乳腺癌組織及其癌旁正常組織中lncRNAPVT1的相對表達量。分別采用χ2和獨立樣本t檢驗分析lncRNA PVT1表達水平與乳腺癌患者臨床特征之間的關系。采用logrank檢驗lncRNA PVT1表達水平對乳腺癌患者總體生存率的影響。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 lncRNA PVT1在乳腺癌組織和癌旁正常組織中的相對表達量 探究lncRNA PVT1在乳腺癌組織和癌旁正常組織中的相對表達量，結果顯示lncRNA PVT1在乳腺癌組織（0.075）中的相對表達量顯著高于癌旁正常組織（0.003），差異具有統計學意義(P=0.018 6)。

2.2 lncRNA PVT1表達水平與乳腺癌患者臨床特征的關系 見表1。根據2.1的結果，lncRNA PVT1高表達60例，lncRNA PVT1低表達88例。探究lncRNA PVT1表達水平與乳腺癌患者臨床特征的關系，結果顯示lncRNA PVT1表達水平與乳腺癌患者的年齡（P=0.015）、臨床分期(P=0.006)、淋巴結轉移(P＜0.001)、遠端轉移(P=0.021)和Her2(P=0.022)顯著相關。

表1 lncRNA PVT1表達水平與乳腺癌患者臨床特征的關系[n(%)]

2.3 lncRNA PVT1表達水平對乳腺癌患者總體生存率的影響進一步分析lncRNA PVT1表達水平對乳腺癌患者總體生存率的影響，結果發現lncRNA PVT1低表達組患者的中位生存時間為70個月，而lncRNA PVT1高表達組患者的中位生存時間為54個月。lncRNA PVT1高表達組患者的OS顯著低于lncRNA PVT1低表達組，并且其差異具有統計學意義(P=0.036)，見圖1。

圖1 lncRNA PVT1表達水平對乳腺癌患者總體生存率的影響

3 討論

近年來，伴隨著我國社會經濟的飛速發展，加之人們生活方式的改變，惡性腫瘤的發病率和死亡率不斷攀升，嚴重威脅著人們的健康。乳腺癌是全球女性中死亡率最高的婦科惡性腫瘤，其嚴重威脅女性的健康，有分析預測指出乳腺癌發病仍將呈上升趨勢。目前乳腺癌的早期診斷和分子治療發揮著至關重要的作用。PVT1是一個lncRNA，lncRNA PVT1位于染色體8q24“基因沙漠”區。該沙漠區域涵蓋了1.8萬缺少轉錄活性的堿基，是基因變異的偏好位置且包含了與疾病相關的高危基因位點，曾經被認為是癌癥相關基因的結合區。已有文獻報道指出lncRNA PVT1在胃癌[7]、非小細胞肺癌、肝細胞癌、大腸癌[8]和結直腸癌[8]等中均有高表達，但是關于lncRNA PVT1與乳腺癌的研究相對較少。本研究通過分析乳腺癌中lncRNA PVT1的表達水平及其與患者臨床特征和OS間的關系，以期為乳腺癌的預后和診療提供新的有價值的生物學指標[9-10]。結果顯示lncRNA PVT1在乳腺癌組織中的相對表達量顯著高于癌旁正常組織，其表達水平的高低與患者的年齡、臨床分期、淋巴結轉移、遠端轉移和Her2顯著相關。并且lncRNA PVT1高表達組患者的OS顯著降低。這就提示了lncRNA PVT1是一種可預測乳腺癌患者預后的有潛力的生物學指標。下一步本課題組將在此研究的基礎上，進一步深入研究lncRNA PVT1在乳腺癌中的作用機制，為臨床應用奠定更深入的理論研究基礎。