腫痛巴布膏對大鼠閉合性軟組織損傷模型的影響

胡還甫，阮 斌，鄒 進，李習平

（岳陽職業技術學院，老年健康養護岳陽市重點實驗室，岳陽 414000）

腫痛巴布膏系民間驗方，由血三七、血當歸、八里麻、續斷加工做成巴布膏，具有舒筋活血，消腫止痛的功效，常用于治療閉合性軟組織損傷。現將其對大鼠閉合性軟組織損傷模型的影響實驗研究報告如下。

1 實驗材料

1.1 藥品

1.1.1 受試品 腫痛巴布膏，根據實驗需要制成3 種規格，分別為 12.96 g 生藥/片，6.48 g 生藥/片，3.24 g 生藥/片，批號：20180301，有效期至 2019 年9月，由湖南省中醫藥科技發展總公司提供。

1.1.2 陽性對照藥 扶他林軟膏，由北京諾華制藥有限公司生產，批號：X8109，有效期至2019年8月29日。適應癥：用于緩解肌肉，軟組織和關節中度疼痛。

1.2 實驗動物 SD大鼠72只，SPF級，雌雄各半，體質量 180.7～217.7g，動物合格證號：No.43004700007877，購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物生產許可證號：SCXK（湘）2013-0004。

1.3 主要試劑 前列腺素E2（PGE2）酶聯免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（美國RB公司，批號：201802，有效期至2019年8月）。

1.4 主要儀器 MR-96A酶標儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）；DK-600B電熱恒溫水槽（上海森信實驗儀器有限公司）；S10型手提式高速分散器（上海新芝）；軟組織打擊器（自制）；DL-5M型多管低速冷凍離心機（長沙平凡儀器儀表有限公司）；AR-109型電子天平（康市艾瑞貿易有限公司）。

2 實驗方法

2.1 造模與分組 SD大鼠按性別體質量隨機分為6組，每組12只，分別為空白對照組、模型對照組、腫痛巴布膏低（0.35 g生藥/只）、中（0.70 g生藥/只）、高（1.40g生藥/只）劑量組和扶他林軟膏組（0.20g/只）。造模前給大鼠右腿脫毛，用2%戊巴比妥鈉按40 mg/kg劑量腹腔注射將大鼠麻醉，固定于軟組織打擊器上，右腿外展固定，于右小腿中部外側軟組織標記定位，將打擊錘拉至約16 cm高度，松開打擊錘，自由落下，連擊7下。打擊后肉眼即見皮膚腫脹、瘀血，以無皮膚破裂為標準，造模當天開始給藥，每日給藥1次，連續給藥7 d，模型對照組給予空白基質[1-2]。空白對照組大鼠只接受脫毛和麻醉，給藥期間不給藥但進行包扎處理。造模前和造模后1 h以及給藥期間每天測定損傷標記處的周長；分別于給藥后2、4、7 d給藥后1 h每組各取4只大鼠處死，進行損傷癥狀指數評分，測定損傷組織中PGE2的含量，進行組織形態學檢查[3-4]。

2.2 檢測指標

2.2.1 小腿周長的測定 造模前和造模后1 h以及給藥期間每天測定損傷標記處的周長。

2.2.2 損傷癥狀指數 每組大鼠分別在造模后2、4、7 d 各取 4 只大鼠，采血后二氧化碳（CO2）麻醉處死，觀察傷肢腫脹和瘀斑等癥狀表現，并分級評分。1）皮下瘀血：多量塊狀計2分，少量點狀計1分，無瘀血者計0分。2）肌肉腫脹：明顯腫脹計2分，稍有腫脹計1分，無腫脹者計0分。3）皮膚顏色：紫暗色深計2分，暗紅色淺計1分，色澤正常計0分。計算每只動物的總評分[5]。

2.2.3 PGE2含量測定 取打擊中心部位肌肉組織，生理鹽水漂洗干凈，濾紙吸干水分，稱取肌肉組織約0.5 g，加入9倍體積冰生理鹽水后，于高速分散器中粉碎，以2 500 r/min 4℃離心15 min，離心半徑為225 mm，收集上清液，采用PGE2 ELISA試劑盒檢測各組標本PGE2含量[6-8]。

2.2.4 組織形態學檢查 截下已經切除少量肌肉的整支右腿，置10%甲醛溶液內浸泡。切取傷部組織樣本（包括皮膚、皮下組織、肌肉），經常規脫水、包埋、蘇木精-伊紅（HE）染色后，光鏡下觀察，指標包括創傷局部皮下組織、肌肉組織等病理表現。

2.3 劑量設計 腫痛巴布膏臨床擬用量：每日39 g生藥，根據體表面積法換算成大鼠等效劑量為3.51 g生藥/kg。本實驗以腫痛巴布膏大鼠等效劑量作為中劑量，另設低、高劑量，分別為等效劑量的1/2、2 倍，即 1.76 g、7.02 g 生藥/kg。又腫痛巴布膏含量為 12.96 g、6.48 g 生藥/片和 3.24 g 生藥/片，每片面積為7 cm×10 cm，故根據上述大鼠劑量設計，可得具體劑量設計見表1，扶他林軟膏組的劑量參照文獻[2，4]。

表1 實驗分組和劑量設計Tab.1 Experimental grouping and dose design

2.4 統計學方法 采用SPSS 23.0進行統計分析，實驗數據用均數±標準差（±s）表示，如符合正態性和方差齊性，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法；如不符合則多組間比較采用 Kruskal-Wallis H 檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 腫痛巴布膏對大鼠軟組織損傷模型小腿周長的影響 造模前各組的周長無統計學差異，造模后，與空白對照組比較，其它各組周長顯著增加（P＜0.01），提示大鼠閉合性軟組織腫脹。與模型對照組比較，給藥第2天腫痛巴布膏低、中、高劑量對周長無顯著影響，第4天和第7天腫痛巴布膏中、高劑量能顯著減小模型大鼠小腿的周長（P＜0.05或P＜0.01），提示腫痛巴布膏具有消腫作用。陽性藥扶他林軟膏第4天和第7天能顯著減少大鼠的周長（P＜0.05）。見表 2。

3.2 腫痛巴布膏對大鼠軟組織損傷模型損傷癥狀指數的影響 與空白對照組比較，模型對照組損傷癥狀指數差異具有統計學意義（P＜0.05），提示大鼠閉合性軟組織損傷模型成功。與模型對照組比較，給藥第2天腫痛巴布膏低、中、高劑量對損傷癥狀指數無顯著影響，第4天和第7天腫痛巴布膏中、高劑量能顯著降低模型大鼠的損傷癥狀指數（P＜0.05）。陽性藥扶他林軟膏第4天和第7天能顯著減少大鼠的損傷癥狀指數（P＜0.05）。見表 3。

3.3 腫痛巴布膏對大鼠軟組織損傷模型腿部肌肉組織勻漿中PGE2含量的影響 與空白對照組比較，模型對照組炎癥因子PGE2的含量顯著增加（P＜0.05）。與模型對照組比較，給藥第2天腫痛巴布膏低、中、高劑量對PGE2的含量無顯著影響，第4天和第7天腫痛巴布膏高劑量能顯著降低模型大鼠的PGE2的含量（P＜0.05）。陽性藥扶他林軟膏第2天、第4天和第7天能顯著降低大鼠的PGE2的含量（P＜0.01 或 P＜0.05）。見表 4。

表2 腫痛巴布膏對大鼠閉合性軟組織損傷模型小腿周長的影響（±s）Tab.2Effect of Zhongtong Cataplasms on calf circumference of rat of closed soft tissue injury model（±s）

表2 腫痛巴布膏對大鼠閉合性軟組織損傷模型小腿周長的影響（±s）Tab.2Effect of Zhongtong Cataplasms on calf circumference of rat of closed soft tissue injury model（±s）

注：與空白對照組比較 *P＜0.05，**P＜0.01，與模型對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別空白對照組模型對照組扶他林軟膏組腫痛巴布膏低劑量組腫痛巴布膏中劑量組腫痛巴布膏高劑量組動物數1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2劑量（g生藥/只） 周長（c m）造模前 造模后1 h 第2天 第4天 第7天-5.0±0.1 5.0±0.1 5.1±0.1 5.2±0.2 5.2±0.2-5.0±0.2 6.0±0.2** 6.3±0.2** 6.0±0.3** 5.4±0.1*0.2 0 4.9±0.1 5.9±0.3** 6.1±0.2 5.6±0.4## 5.1±0.1##0.3 5 5.0±0.3 6.0±0.3** 6.2±0.3 5.8±0.2 5.3±0.1 0.7 0 4.9±0.1 5.9±0.4** 6.2±0.2 5.6±0.3# 5.2±0.1#1.4 0 5.0±0.3 6.0±0.4** 6.2±0.3 5.6±0.3# 5.1±0.2##

表3 腫痛巴布膏對大鼠閉合性軟組織損傷模型損傷癥狀指數的影響（±s）Tab.3 Effect of Zhongtong Cataplasms on symptomatic index of rat of closed soft tissue injury model（±s）

表3 腫痛巴布膏對大鼠閉合性軟組織損傷模型損傷癥狀指數的影響（±s）Tab.3 Effect of Zhongtong Cataplasms on symptomatic index of rat of closed soft tissue injury model（±s）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05；與模型對照組比較，#P＜0.05。

組別 損傷癥狀指數第2天 第4天 第7天空白對照組 0 0 0模型對照組 5.5±0.6*5.0±1.2*1.8±0.5*扶他林軟膏組 5.8±0.5 2.2±0.5#0.2±0.5#腫痛巴布膏低劑量組 5.8±0.5 3.8±0.5 1.5±0.6腫痛巴布膏中劑量組 5.5±1.0 3.0±0.8#0.8±0.5#腫痛巴布膏高劑量組 5.8±0.5 2.5±0.6#0.2±0.5#動物數劑量（g生藥/只）4 4 4 4 4 4- -0.2 0 0.3 5 0.7 0 1.4 0

3.4 腫痛巴布膏對大鼠軟組織損傷模型病理表現的影響

3.4.1 對皮下組織病理表現的影響 空白對照組的皮下組織一直無病理變化；模型對照組，造模后第2天，皮下組織可見大量紅細胞，炎癥細胞浸潤，炎癥程度最為嚴重；第4天，皮下組織可見少量紅細胞，炎癥細胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，皮下組織血管充血、出血，間質輕度水腫，炎癥程度進一步減輕。

腫痛巴布膏低劑量組，給藥后第2天，與模型組情況相似；第4天，可見少量散在紅細胞，纖維組織增生，間質少量炎癥細胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，可見大量紅細胞，間質輕度水腫，炎癥程度進一步減輕。

腫痛巴布膏中劑量組，給藥后第2天，可見大量紅細胞，間質少量炎癥細胞浸潤，炎癥程度最為嚴重；第4天可見少量散在紅細胞，纖維組織增生，間質少量炎癥細胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，纖維組織增生，間質少量炎性細胞浸潤，炎癥程度進一步減輕。

腫痛巴布膏高劑量組，給藥后第2天，可見少量紅細胞，間質中少量炎癥細胞，炎癥程度最為嚴重；第4天，間質中少量散在紅細胞，散在炎癥細胞，炎癥程度明顯減輕；第7天，皮下組織輕度水腫，間質中少量炎性細胞，炎癥基本恢復。

扶他林軟膏組，給藥后第2天，可見少量散在紅細胞，間質少量炎癥細胞浸潤，炎癥程度最為嚴重；第4天，可見少量散在紅細胞，間質少量炎癥細胞浸潤，炎癥程度明顯減輕；第7天，血管輕度充血，間質少量散在炎性細胞，炎癥程度進一步減輕，已經基本恢復。見圖1。

3.4.2 對肌肉組織病理表現的影響 空白對照組的肌肉組織一直無病理變化；模型對照組，造模后第2天，肌肉組織中肌細胞變性壞死，血管出血，間質中大量炎癥細胞浸潤，炎癥程度最為嚴重；第4天，肌細胞變性，血管出血，間質中大量炎性細胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，肌細胞變性，血管出血，間質中大量炎性細胞浸潤，炎癥程度進一步減輕。

腫痛巴布膏低劑量組，給藥后第2天，少量肌細胞變性壞死，間質輕度水腫，炎癥細胞浸潤，炎癥程度最為嚴重；第4天，間質輕度水腫，炎性細胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，間質輕度水腫，炎性細胞浸潤，炎癥程度進一步減輕。

腫痛巴布膏中劑量組，給藥后第2天，少量肌細胞變性壞死，間質少量炎癥細胞浸潤，炎癥程度最為嚴重；第4天，間質少量炎性細胞浸潤，炎癥程度有所減輕；第7天，間質少量炎性細胞浸潤，炎癥程度進一步減輕。

表4 腫痛巴布膏對大鼠閉合性軟組織損傷模型腿部組織勻漿中PGE2含量的影響（±s）Tab.4 Effect of Zhongtong Cataplasms on the content of PGE2 in the homogenate of leg tissue of rat of closed soft tissue injury model（±s）

表4 腫痛巴布膏對大鼠閉合性軟組織損傷模型腿部組織勻漿中PGE2含量的影響（±s）Tab.4 Effect of Zhongtong Cataplasms on the content of PGE2 in the homogenate of leg tissue of rat of closed soft tissue injury model（±s）

注：與空白對照組比較 *P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別空白對照組模型對照組扶他林軟膏組腫痛巴布膏低劑量組腫痛巴布膏中劑量組腫痛巴布膏高劑量組動物數劑量（g生藥/只）4 4 4 4 4 4 4 1 7.6±5 8.5 4 1 9.9±6 2.9 4 4 1.1± 6 8.1-7 9 0.7±2 9.1* 6 6 8.9±4 5.2* 5 9 1.7± 3 4.7*0.2 0 6 4 2.6±5 8.9## 5 1 3.0±9 2.0## 4 5 1.5± 5 4.1#0.3 5 7 3 2.9±3 6.2 6 3 4.7±7 2.6 5 1 1.6±1 1 7.4 0.7 0 7 1 6.8±5 2.4 5 6 6.7±8 1.6 4 8 9.1± 7 7.0 1.4 0 7 1 5.6±7 5.7 5 5 1.4±7 3.9# 4 5 5.3± 8 0.6#P G E 2含量（n g/L）第2天 第4天 第7天-

圖1 皮下組織病理切片圖（HE，×200）Fig.1 Subcutaneous histopathological section（HE，×200）

腫痛巴布膏高劑量組，給藥后第2天，間質少量炎癥細胞浸潤，炎癥程度最為嚴重；第4天，無明顯病理變化，炎癥程度明顯有所減輕；第7天，無明顯病理變化，炎癥基本恢復。

扶他林軟膏組，給藥后第2天，少量肌細胞變性壞死，間質炎癥細胞浸潤，炎癥程度最為嚴重；第4天，無明顯病理變化，炎癥程度明顯減輕；第7天，肌肉組織無明顯病理變化，炎癥程度進一步減輕，已經基本恢復。見圖2。

3.5 腫痛巴布膏對大鼠軟組織損傷模型病理評分的影響 與空白對照組比較，模型對照組病理評分顯著增加（P＜0.05）。與模型對照組比較，給藥第 2 天腫痛巴布膏低、中、高劑量對病理評分無顯著影響，第4天和第7天腫痛巴布膏高劑量能顯著降低模型大鼠的病理評分（P＜0.05），陽性藥扶他林軟膏第2天、第4天和第7天能顯著降低大鼠的病理評分（P＜0.01 或 P＜0.05）。見表 5。

圖2 肌肉組織病理切片圖（HE，×200）Fig.2 Pathological section of muscle tissue（HE，×200）

表5 腫痛巴布膏對大鼠閉合性軟組織損傷模型病理評分的影響（±s）Tab.5 Effect of Zhongtong Cataplasms on pathological score of rat of closed soft tissue injury model（±s）

表5 腫痛巴布膏對大鼠閉合性軟組織損傷模型病理評分的影響（±s）Tab.5 Effect of Zhongtong Cataplasms on pathological score of rat of closed soft tissue injury model（±s）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別動物數劑量（g生藥/只）空白對照組模型對照組扶他林軟膏組腫痛巴布膏低劑量組腫痛巴布膏中劑量組腫痛巴布膏高劑量組4 4 4 4 4 4病理評分（分）第2天 第4天 第7天- 1.5±1.0 1.8±1.5 1.8±1.5- 1 8.5±3.3*1 2.5±1.3*9.0±1.8**0.2 0 1 5.0±2.2#1 0.0±0.8##4.8±1.0##0.3 5 1 8.2±2.2 1 1.8±0.5 8.2±1.9 0.7 0 1 7.0±1.4 1 1.8±0.5 7.5±1.3 1.4 0 1 6.2±1.3 1 0.8±1.0#5.5±0.6#

4 結論

上述結果表明，腫痛巴布膏中、高劑量能顯著減小閉合性軟組織損傷模型大鼠腫脹小腿的周長和減少損傷癥候指數，腫痛巴布膏高劑量能顯著減少閉合性軟組織損傷模型大鼠的PGE2的含量和改善組織形態學，腫痛巴布膏對閉合性軟組織損傷模型大鼠具有明顯的改善作用。