Real-time PCR法檢測(cè)水產(chǎn)品中異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖源性成分

信紅梅，姚 琳，陸鍵萍,3，曲 夢(mèng)，江艷華，李風(fēng)鈴，郭瑩瑩，王聯(lián)珠,

（1.大連工業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧 大連 116034；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，山東 青島 266071；3.中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東 青島 266000）

鱈魚是鱈形目（Gadiformes）魚類的總稱，屬脊椎動(dòng)物門（Vertebrata）、脊椎動(dòng)物亞門（Vertebrata）、真骨魚綱（Teleostei），是世界上最重要的底層魚類，也是國(guó)際水產(chǎn)品貿(mào)易中最主要的品種之一，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1-2]。目前，市場(chǎng)上常見的鱈形目魚類主要有大西洋鱈（Gadus morhua）、太平洋鱈（G. macrocephalus）、狹鱈（G. chalcogrammus）、細(xì)鱗壯鱈（Albatrossia pectoralis）、黑線鱈（Melanogrammus aeglefinus）和阿根廷無須鱈（Merluccius hubbsi）等。此外，市場(chǎng)上還包含一些商品名中帶“鱈”字，但在分類學(xué)上與鱈魚毫無關(guān)聯(lián)但價(jià)格很高的品種，如裸蓋魚（Anoplopoma fimbria）（銀鱈魚、黑鱈）、小鱗犬牙南極魚（Dissostichus eleginoides）和莫氏犬牙南極魚（Dissostichus mawsoni）（白鱈魚）[3-4]。學(xué)名與商品名的不統(tǒng)一，加之高值鱈魚多以魚塊、魚段和魚片的形式銷售，失去了可供鑒別的外部形態(tài)特征，導(dǎo)致命名混亂、以次充好、以假冒真的現(xiàn)象屢屢出現(xiàn)。“油魚”體型較大，肉質(zhì)白皙，切塊后與高值鱈魚魚塊外形十分相似，成為假冒高值鱈魚的最主要品種。

“油魚”是異鱗蛇鯖（Lepidocybium flavobrunneum）和棘鱗蛇鯖（Ruvettus pretiosus）的俗稱，這兩種魚同屬于鱸形目的蛇鯖科（Gempylidae），分別是異鱗蛇鯖屬和棘鱗蛇鯖屬的唯一種[5]，分布于熱帶及亞熱帶海域，脂肪含量極高，其中90%為C32～C36的蠟酯[6]。該蠟酯并不被人體消化、吸收，而是蓄積在直腸內(nèi)，引起腹痛、惡心、嘔吐和胃腸痙攣等癥狀，嚴(yán)重者導(dǎo)致油性腹瀉，雖不足以致命，但對(duì)嬰幼兒、胃腸敏感人群及孕期婦女具有較高 風(fēng)險(xiǎn)[5-6]。此外，“油魚”中含有大量的組氨酸，若運(yùn)輸、保存條件不當(dāng)，組氨酸會(huì)轉(zhuǎn)化成組胺，食用后嚴(yán)重者會(huì)危及生命[7]。

“以油充鱈”現(xiàn)象不僅在我國(guó)，在美國(guó)[8]、加拿大[7]、 澳大利亞[6,9]等各國(guó)均有過類似報(bào)道，不僅擾亂了市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)秩序，而且?guī)聿豢珊鲆暤氖称钒踩L(fēng)險(xiǎn)。日本、韓國(guó)和意大利等國(guó)已經(jīng)禁止銷售和進(jìn)口“油魚”[10]；美國(guó)、加拿大、澳大利亞和歐盟部分成員國(guó)等要求銷售“油魚”時(shí)必須加上適當(dāng)標(biāo)簽[5]；我國(guó)除香港地區(qū)出臺(tái)了《有關(guān)識(shí)別及標(biāo)簽：油魚/鱈魚的指引》之外[4]，目前我國(guó)尚未對(duì)“油魚”有禁止或限制食用的規(guī)定，這與缺乏與之配套的檢測(cè)技術(shù)不無關(guān)系。針對(duì)“油魚”，即異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖，建立物種特異性檢測(cè)方法成為當(dāng)務(wù)之急。

本研究針對(duì)異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖的線粒體細(xì)胞色素C氧化酶I（cytochrome C oxidase subunit I，COI）基因序列，分別設(shè)計(jì)了兩對(duì)物種特異性引物和探針，基于實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）建立了異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖源性成分的檢測(cè)方法，以期為保護(hù)消費(fèi)者權(quán)益、打擊水產(chǎn)品摻雜使假提供可靠的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

凍鱈魚片（編號(hào)DXYP）、鱈魚排（編號(hào)XYP）等50 份市售標(biāo)稱為“鱈魚”的制品在本地超市、市場(chǎng)及餐飲店購(gòu)得。

異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖、太平洋鱈、大西洋鱈、狹鱈、黑線鱈、小鱗犬牙南極魚、莫氏犬牙南極魚、裸蓋魚、藍(lán)鱈、綠青鱈、細(xì)鱗壯鱈、狹鱗庸鰈、阿根廷無須鱈、藍(lán)鰭金槍魚、黃鰭金槍魚、長(zhǎng)鰭金槍魚、大目金槍魚、劍魚、鰹魚、鱸魚、鮐魚、大菱鲆、鯽魚、草魚、鳙魚、鯉魚、暗紋東方鲀、紅鰭東方鲀、旗魚、鱖魚、羅非魚、鮟鱇魚、鰱魚、大黃魚35 種實(shí)驗(yàn)樣品由本室收集保存。

海洋動(dòng)物組織DNA提取試劑盒 天根生化科技 （北京）有限公司；PremixExTaq（2×） 寶生物工程（大連）有限公司；引物與探針的合成及DNA測(cè)序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成；其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

K15臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)Sigma公司；Light Cycler 480實(shí)時(shí)熒光PCR儀 瑞士Hoffmann-La Roche有限公司；DK-8D電熱恒溫水槽 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；WH2微型旋渦混合儀 上海滬西分析儀器廠；微量核酸蛋白測(cè)定儀 德國(guó)Implen公司。

1.3 方法

1.3.1 模板DNA制備

取30 mg魚肉組織剪碎后置于1.5 mL離心管中，用海洋動(dòng)物組織DNA提取試劑盒提取DNA，提取方法詳見試劑盒操作說明書。用微量核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定DNA濃度和純度，置于-20 ℃保存。

1.3.2 引物與探針的設(shè)計(jì)

表1 18 種鱈魚及其易混品種COI基因的代表性序列Table 1 Representative sequences of COI genes of 18 cod species and other species commonly used as adulterants

圖1 異鱗蛇鯖引物和探針位置圖 Fig. 1 Positions of the primers and probes for L. flavobrunneum

根據(jù)我國(guó)進(jìn)出口以及或消費(fèi)環(huán)節(jié)的調(diào)研，選擇異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖、大西洋鱈、太平洋鱈、狹鱈、黑線鱈、小鱗犬牙南極魚、莫氏犬牙南極魚、裸蓋魚、藍(lán)鱈、綠青鱈、細(xì)鱗壯鱈等18 個(gè)品種的“鱈魚”及其易摻假品種，在NCBI網(wǎng)站（https://www.ncbi.nlm.nih.gov）下載其COI基因的代表性序列（表1），用DNAMAN 8.0和BioEdit7.0軟件進(jìn)行序列比對(duì)、輸出，針對(duì)異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖的物種特異性片段分別設(shè)計(jì)上、下游引物與探針，引物、探針位置見圖1、2，引物及探針序列見表2。

圖2 棘鱗蛇鯖引物和探針位置圖 Fig. 2 Positions of the primers and probes for R. pretiosus

表2 引物及探針序列Table 2 Sequences of primers and probes used in this study

1.3.3 反應(yīng)體系及條件

反應(yīng)體系：PremixExTaq（2×）12.5 μL；上游引物、下游引物（10 μmol/L）各0.55 μL；探針（10 μmol/L） 0.3 μL；DNA模板5 μL，用無菌水補(bǔ)至總體系為25 μL。

反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火延伸1 min，40 個(gè)循環(huán)，收集熒光信號(hào)，擴(kuò)增曲線圖及擴(kuò)增效率圖由real-time PCR儀的自帶軟件Light Cycler 480 SW1.5.1生成。

1.3.4 特異性分析

利用異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖的引物、探針及檢測(cè)方法，分別以異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖、大西洋鱈、太平洋鱈、狹鱈、黑線鱈、小鱗犬牙南極魚、莫氏犬牙南極魚、裸蓋魚、藍(lán)鱈、綠青鱈、細(xì)鱗壯鱈、狹鱗庸鰈、阿根廷無須鱈、金槍魚等35 種樣品DNA為模板，無菌水為空白對(duì)照，依照1.3.3節(jié)方法分別進(jìn)行real-time PCR擴(kuò)增，驗(yàn)證方法的特異性。

1.3.5 靈敏度分析

1.3.5.1 絕對(duì)靈敏度

將提取的異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖DNA模板原液（質(zhì)量濃度20 ng/μL）用無菌水分別進(jìn)行10 倍梯度稀釋，即20、2、0.2、0.02、0.002、0.000 2 ng/μL和0.000 02 ng/μL 7 個(gè)質(zhì)量濃度梯度，依照1.3.3節(jié)方法分別進(jìn)行real-time PCR擴(kuò)增，每個(gè)質(zhì)量濃度設(shè)2 個(gè)平行。該實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，利用軟件SPSS 22.0計(jì)算Ct值的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）。

1.3.5.2 相對(duì)靈敏度

將異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖肌肉組織分別與太平洋鱈肌肉組織以一定比例混合，制成異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖添加量分別為10%、5%、1%、0.1%、0.01%和0.001%的混合樣品，提取DNA，依照1.3.3節(jié)方法分別進(jìn)行real-time PCR擴(kuò)增，每個(gè)含量設(shè)2 個(gè)平行。該實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.3.6 市售“鱈魚”制品檢測(cè)

利用本研究建立的方法對(duì)50 份市售“鱈魚”制品進(jìn)行檢測(cè)，分析其中是否含有異鱗蛇鯖或棘鱗蛇鯖成分。樣本的真實(shí)性成分按GB/T 35918—2018《動(dòng)物制品中動(dòng)物源性檢測(cè)基因條碼技術(shù) Sanger測(cè)序法》進(jìn)行分析[11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品DNA

所有樣品的DNA質(zhì)量濃度在20～70 ng/μL之間，A260nm/A280nm在1.8～2.0之間，滿足real-time PCR的要求。

2.2 特異性分析

基于異鱗蛇鯖特異性引物和探針建立的檢測(cè)方法對(duì)供試的35 種魚的DNA進(jìn)行real-time PCR擴(kuò)增，結(jié)果表明，該方法僅對(duì)異鱗蛇鯖有明顯擴(kuò)增，Ct平均值為16.50，呈典型的陽性結(jié)果，其他被測(cè)DNA及空白對(duì)照在40 個(gè)循環(huán)內(nèi)沒有擴(kuò)增，呈典型的陰性結(jié)果（圖3）。基于棘鱗蛇鯖特異性引物和探針建立的檢測(cè)方法對(duì)供試的35 種魚的DNA進(jìn)行real-time PCR擴(kuò)增，結(jié)果表明，該方法僅對(duì)棘鱗蛇鯖有明顯擴(kuò)增，Ct平均值為15.54，呈典型的陽性結(jié)果，其他被測(cè)DNA及空白對(duì)照在40 個(gè)循環(huán)內(nèi)沒有擴(kuò)增，呈典型的陰性結(jié)果（圖3）。說明異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖的檢測(cè)方法均具有良好的特異性。

圖3 異鱗蛇鯖（A）和棘鱗蛇鯖（B）real-time PCR特異性分析Fig. 3 Specificity evaluation of real-time PCR for L. flavobrunneum (A) and R. pretiosus (B)

2.3 靈敏度分析

2.3.1 絕對(duì)靈敏度

圖4 異鱗蛇鯖（A）和棘鱗蛇鯖（B）real-time PCR絕對(duì)靈敏度Fig. 4 Absolute sensitivities of real-time PCR for L. flavobrunneum (A) and R. pretiosus (B)

圖5 異鱗蛇鯖（A）和棘鱗蛇鯖（B）real- time PCR擴(kuò)增效率Fig. 5 Amplifciation effciiencies of real-time PCR for L. falvobrunneum (A) and R. pretiosus (B)

將質(zhì)量濃度20～0.000 02 ng/μL的異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖DNA分別進(jìn)行real-time PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增曲線如圖4所示，擴(kuò)增效率如圖5所示，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率分別為 -3.412和-3.324；相關(guān)系數(shù)R2分別為0.995 7和0.995 3；根據(jù)擴(kuò)增效率公式（擴(kuò)增效率/%＝（10（-1/斜率）-1）× 100））得到異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖的擴(kuò)增效率分別為96.38%、99.89%，均在可接受區(qū)間90%～110%內(nèi)。

當(dāng)異鱗蛇鯖DNA質(zhì)量濃度為20～0.002 ng/μL時(shí)，均出現(xiàn)明顯的擴(kuò)增曲線，當(dāng)其低于0.002 ng/μL，擴(kuò)增曲線在基線位置，說明異鱗蛇鯖的檢測(cè)方法靈敏度為0.002 ng/μL； 當(dāng) 棘 鱗 蛇 鯖D N A 質(zhì) 量 濃 度 為2 0 ～0.0 0 0 2 n g/μ L 時(shí)，出現(xiàn)明顯的擴(kuò)增曲線，當(dāng)其低于0.000 2 ng/μL，擴(kuò)增曲線在基線位置，說明棘鱗蛇鯖的檢測(cè)方法靈敏度為0.000 2 ng/μL。

表3 real-time PCR重復(fù)性Table 3 Repeatability of the real-time PCR method

real-time PCR重復(fù)性見表3。隨著異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖樣品DNA含量降低，Ct值呈增高趨勢(shì)，異鱗蛇鯖5 個(gè)質(zhì)量濃度樣品Ct值的標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.10～0.74之間，RSD在0.61%～2.64%之間；棘鱗蛇鯖6 個(gè)質(zhì)量濃度樣品Ct值的標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.31～0.76之間，RSD在1.42%～2.50%之間，均在可接受范圍內(nèi)。因此，本實(shí)驗(yàn)建立的 real-time PCR檢測(cè)方法具有良好的重復(fù)性。

2.3.2 相對(duì)靈敏度

圖6 異鱗蛇鯖（A）和棘鱗蛇鯖（B）real-time PCR相對(duì)靈敏度檢測(cè)Fig. 6 Relative sensitivities of real-time PCR for L. flavobrunneum (A) and R. pretiosus (B)

利用建立的方法分別檢測(cè)混有不同質(zhì)量比的異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖肌肉的太平洋鱈魚肉，擴(kuò)增結(jié)果如圖6所示。當(dāng)異鱗蛇鯖添加量在0.01%及以上時(shí)出現(xiàn)明顯的擴(kuò)增曲線，當(dāng)添加量低于0.01%時(shí)，熒光擴(kuò)增曲線在基線位置，說明異鱗蛇鯖real-time PCR的檢測(cè)相對(duì)靈敏度為0.01%；當(dāng)棘鱗蛇鯖添加量在0.01%及以上時(shí)出現(xiàn)明顯的擴(kuò)增曲線，當(dāng)添加量低于0.01%時(shí)，熒光擴(kuò)增曲線在基線位置，說明棘鱗蛇鯖real-time PCR的檢測(cè)相對(duì)靈敏度也為0.01%。

2.4 市售“鱈魚”制品檢測(cè)結(jié)果

利用建立的real-time PCR法對(duì)50 份市售“鱈魚”制品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在1 份標(biāo)稱“水鱈魚”的樣品中檢測(cè)出異鱗蛇鯖成分，在1 份標(biāo)稱“水鱈魚”的樣品中檢測(cè)出棘鱗蛇鯖成分，與標(biāo)簽不符，該結(jié)果與按GB/T 35918—2018的檢測(cè)結(jié)果一致（表4）。

表4 市售“鱈魚”制品中油魚成分檢測(cè)結(jié)果Table 4 Results of detection of R. pretiosus- and L. flavobrunneum- derived ingredients in commercial cod products

3 討 論

近年來，“以油充鱈”現(xiàn)象頻發(fā)，嚴(yán)重侵害了消費(fèi)者的權(quán)益，擾亂了行業(yè)的的正常經(jīng)營(yíng)秩序，由此帶來的食品安全風(fēng)險(xiǎn)不容忽視。建立一種準(zhǔn)確、快速的“油魚”檢測(cè)方法已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。高值鱈魚的捕撈加工方式，決定了該類產(chǎn)品主要以去頭、去內(nèi)臟、切段和切片的方式銷售，缺乏傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定所需的外部特征。因此多數(shù)研究者重點(diǎn)關(guān)注基于蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的檢測(cè)方法。

Ochiai等[12]基于蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的不同，通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）技術(shù)對(duì)“油魚”進(jìn)行鑒別。該方法將異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖、無須鱈及裸蓋魚等29 種魚類的可溶性肌肉蛋白分別進(jìn)行SDS-PAGE分析，得到具有“油魚”物種特異性的蛋白指紋圖譜，從而將“油魚”與其他魚區(qū)分開。該方法雖具有檢測(cè)成本低、較準(zhǔn)確的特點(diǎn)，但當(dāng)魚肉經(jīng)過加熱等環(huán)節(jié)后將導(dǎo)致部分特征性蛋白變性或降解，從而使原有的指紋圖譜發(fā)生變化，導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性的結(jié)果[13]，因此該方法僅能對(duì)新鮮樣品進(jìn)行鑒別。此外，該方法的靈敏度較低，對(duì)摻有“油魚”的魚肉混合樣品進(jìn)行鑒別的分辨率有限，也限制了該方法的實(shí)際應(yīng)用。

此外，由于大型分析儀器的快速發(fā)展，色譜分析技術(shù)在食品安全檢測(cè)方面的應(yīng)用已較為廣泛，成功實(shí)現(xiàn)了鮭魚、鱘魚和金槍魚[14]等物種的鑒別，并呈現(xiàn)出高靈敏、高分辨等技術(shù)優(yōu)勢(shì)[15]。Ling等[7]利用蠟酯的極性低和熱穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用并結(jié)合薄層色譜技術(shù)分析異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖、大西洋鱈和裸蓋魚等30 個(gè)魚類樣品中的蠟酯成分。結(jié)果表明僅在異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖的樣品中存在C32～C36的蠟酯特征峰，熱處理樣本與新鮮樣本的分析結(jié)果一致，說明該方法可用于鑒定熱加工后的樣品。然而該類分析方法儀器成本較高，操作過程繁瑣，標(biāo)準(zhǔn)化與推廣應(yīng)用前景均具有一定的局限性，一般不作為生物大分子靶標(biāo)的首選檢測(cè)和仲裁鑒定方法[16]。

DNA在動(dòng)物不同組織器官中完全相同，其完整性受食品加工過程的影響較小等優(yōu)點(diǎn)已成為物種鑒別的主要研究對(duì)象[16-18]。Park等[19]利用16S rRNA序列設(shè)計(jì)了兩對(duì)特異性引物，通過PCR結(jié)合測(cè)序比對(duì)檢測(cè)異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖成分，但該方法過程繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，在PCR產(chǎn)物處理過程中容易造成污染從而產(chǎn)生假陽性的結(jié)果。Dalama等[10]利用線粒體COI基因設(shè)計(jì)了一組特異性引物和探針，通過多重real-time PCR的方法鑒定“油魚”，該方法可以對(duì)異鱗蛇鯖和棘鱗蛇鯖的同時(shí)檢測(cè)，無需PCR產(chǎn)物的后續(xù)處理等步驟。然而多重real-time PCR在擴(kuò)增過程中各檢測(cè)通道波長(zhǎng)容易互相干擾導(dǎo)致擴(kuò)增效率降低，易產(chǎn)生假陽性結(jié)果等缺陷。real-time PCR方法具有準(zhǔn)確度和靈敏度高、可靠性和特異性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)[20-22]，目前已廣泛應(yīng)用于食品中鮭科魚類[23]、轉(zhuǎn)基因鮭魚[24]以及大西洋鱈、太平洋鱈和狹鱈[25]等物種鑒別、食品原料摻假、成分檢測(cè)等領(lǐng)域，顯示了其良好的應(yīng)用前景。

物種特異性基因片段的選擇是real-time PCR法進(jìn)行物種鑒別的關(guān)鍵。本研究在預(yù)實(shí)驗(yàn)中針對(duì)16S rRNA、COI和Cyt b等基因分別設(shè)計(jì)了異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖的物種特異性引物與探針，在驗(yàn)證了各個(gè)靶標(biāo)的特異性后最終選定針對(duì)COI基因設(shè)計(jì)的特異性引物及探針。線粒體COI基因具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、相對(duì)保守、覆蓋了更廣泛的分類單元，進(jìn)化速率和長(zhǎng)度適中等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于海洋生物的的鑒定和分類[26]。許多學(xué)者將線粒體COI基因用于動(dòng)物尤其是魚類的鑒別研究中[27-30]。此外，COI基因還被成功應(yīng)用于鑒別市場(chǎng)上出售的食用魚片真?zhèn)蝃31]。

本研究建立的real-time PCR檢測(cè)方法具有很好的重復(fù)性，最低可檢出0.002 ng/μL（異鱗蛇鯖）和0.000 2 ng/μL （棘鱗蛇鯖）的目標(biāo)DNA，與Dalama等[10]建立的多重real-time PCR方法檢出限為0.003 ng/μL（異鱗蛇鯖）和0.004 ng/μL（棘鱗蛇鯖）相比具有一定優(yōu)勢(shì)。本研究還將異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖魚肉與太平洋鱈魚肉按不同比例混合，模擬摻雜使假的樣本，評(píng)價(jià)檢測(cè)方法的相對(duì)靈敏度。結(jié)果表明，兩個(gè)方法相對(duì)靈敏度均可達(dá)0.01%，即在1 kg魚肉中添加0.1 g異鱗蛇鯖或棘鱗蛇鯖魚肉也可被本方法檢測(cè)出來，說明該方法不僅可以檢測(cè)魚段、魚片的原料是否為“油魚”，而且可以檢測(cè)魚糜等制品中是否摻雜“油魚”肉，顯示了該方法具有良好的應(yīng)用前景。此外，為了驗(yàn)證本方法的實(shí)用性，利用兩種方法分別對(duì)50 份市售“鱈魚”制品進(jìn)行檢測(cè)，有2 份樣品分別檢出了異鱗蛇鯖、棘鱗蛇鯖的成分，并且檢測(cè)結(jié)果與傳統(tǒng)的測(cè)序結(jié)果一致，表明本方法具有良好的準(zhǔn)確性及實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)也在一個(gè)側(cè)面反映出，盡管主管部門不斷加強(qiáng)監(jiān)管，市面上仍有用“油魚”假冒鱈魚的情況，本方法為主管部門精準(zhǔn)監(jiān)管、精準(zhǔn)執(zhí)法，保護(hù)消費(fèi)者權(quán)益，保障食品安全，維護(hù)水產(chǎn)行業(yè)的健康良性發(fā)展提供了可靠的技術(shù)支撐。