電化學發(fā)光法測定NT-proBNP的效果及價值

王 靜

遼寧省鞍山市中心醫(yī)院檢驗科，遼寧鞍山 114001

N-末端腦利鈉肽（NT-proBNP）用于急性冠狀動脈綜合征分級、心衰治療和預后監(jiān)測、心源性呼吸困難、心衰疾病診斷、早期心功能不全等診斷中能夠提供準確、快速的診斷依據(jù)[1]。NT-proBNP 指標主要是通過心室肌合成且分泌而來，一旦出現(xiàn)心功能不全的癥狀，則會明顯升高血漿水平。越來越多的研究學者指出，NT-proBNP 在鑒別、診斷心功能不全患者的生化指標中有一定的敏感性，且在心臟功能評價方面的價值也較為明顯[2]。目前，我國臨床在NT-proBNP 檢測中主要是通過電化學發(fā)光法來完成，應該綜合分析以及評價其檢測性能以及評估價值，以便為臨床制定治療計劃奠定良好的基礎(chǔ)。本研究選取于鞍山市中心醫(yī)院開展NT-proBNP 測定的86例心血管疾病患者作為研究對象，探析NT-proBNP分別采取電化學發(fā)光法、快速測定法進行測定的效果以及評估價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月～2019年12月于鞍山市中心醫(yī)院開展NT-proBNP 測定的86例心血管疾病患者作為研究對象，其中男46例，女40例；年齡42～80歲，平均（68.65±5.12）歲。納入標準：①所有患者均需要開展NT-proBNP 檢測；②患者符合與美國紐約心臟病學會（NYHA）分級方案區(qū)分心臟功能的標準。排除標準：①患有內(nèi)分泌疾病者；②患有腎疾病者；③患有肺疾病者；④患有黃疸者；⑤患有脂血者；⑥溶血者。本研究經(jīng)鞍山市中心醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集 在清晨空腹的狀態(tài)下采集10 mL 血液，采集符合診斷標準的靜脈血標本之后按照3000 r/min 的速度進行15 min 的離心處理。

1.2.2 試劑選擇 選擇深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學工程有限公司制造的血清NT-proBNP 試劑[供應商：基蛋生物科技股份有限公司；注冊證號：蘇食藥械（準）字2014 第2400851號；國食藥監(jiān)械注冊號：蘇食藥械生產(chǎn)許20050035號]，根據(jù)試劑說明書完成全自動檢測以及定標。

1.2.3 檢測方法 ①電化學發(fā)光法：選擇邁格魯米-Maglumi1000型全自動化學發(fā)光免疫分析儀開展檢測。通過NT-proBNP 一株單克隆抗體作為ABEI 標記之后，選擇另外一株單克隆抗體對磁性微球作包被處理，混勻單克隆抗體之后變成免疫復合物，同時添加磁場使其沉淀，將上清液去掉。通過洗滌液對沉淀物進行3次洗滌之后，將發(fā)光底物A、發(fā)光底物B 自動添加到儀器內(nèi)，進行為期3 s 的自動檢測，隨后將光強度發(fā)出，對NT-proBNP的含量給予計算。②快速法：采取普朗N-端腦利鈉肽前體檢測試劑卡完成，同時有配套的FIA8000 系列免疫定量分析儀，選擇高濃度混合血清作為NT-proBNP的陽性對照標準。

1.2.4 試驗方法 ①準確度試驗：選擇高濃度的樣本給予倍比稀釋之后開展10次平行檢測，通過分析期望濃度以及實測濃度，計算檢測方法的稀釋回收率。②精密度試驗：選擇NT-proBNP 低水平、高水平含量標本，分別為330.13、588.42 pg/mL，給予20次的平行測定，計算平均變異系數(shù)。③靈敏度試驗：選擇領(lǐng)標準品進行20次的平行測定，計算2倍的平均偏差。

1.3 觀察指標及評價標準

快速檢測法：NT-proBNP的陽性判斷標準為數(shù)值>300 pg/mL。電化學發(fā)光法：根據(jù)試劑盒設(shè)定的臨界值，根據(jù)不同的年齡段進行陽性的判斷：≥75歲患者在NT-proBNP>610 pg/mL 的情況下為陽性；65～74歲患者在NT-proBNP>325 pg/mL 的情況下為陽性；55～64歲患者在NT-proBNP>225 pg/mL 的情況下為陽性；45～54歲患者在NT-proBNP>123 pg/mL 的情況下為陽性；18～44歲患者在NT-proBNP>96.5 pg/mL的情況下為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

電化學發(fā)光法的準確度、精密度、靈敏度（95.51%、97.67%、98.84%）均高于快速檢測法（88.37%、89.53%、87.21%），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1）。

表1 比較兩種檢測方法的準確度、精密度以及靈敏度[n（%）]

3 討論

心血管疾病對患者的心臟或者心室舒張功能有著一定的影響，作為臨床綜合征中常見的一種疾病，對患者的生存質(zhì)量會產(chǎn)生一定的影響，及時確診疾病對改善患者的治療預后有著積極的作用[3]。1988年，日本學者第一次在豬腦中分離出一種多肽類物質(zhì)，能夠發(fā)揮著擴張血管、排鈉、利尿等效果，將此作為腦鈉肽（BNP）物質(zhì)命名，緊接著在肺部、心臟、脊髓等組織中也明確了該物質(zhì)，而心臟中該物質(zhì)有著較高的水平。目前，可在脊髓動物中發(fā)現(xiàn)腎型肽尿擴張素、V型利鈉肽（VNP）、D型利鈉肽（DNP）、C型利鈉肽（CNP）、BNP、心鈉素（心房利鈉肽，ANP）等物質(zhì)，與NPR-C、NPR-B、NPR-A 等受體互相對應[4]。NPR-B、NPR-A的作用是通過結(jié)合利鈉肽物質(zhì)之后會出現(xiàn)抑制腎素血管緊張素、排鈉、擴張血管、利尿等生物學效應，NPR-C 的作用能促使利鈉肽分子得到有效清除。一旦心室容量負荷持續(xù)增加或者心室壁壓力逐漸增加，會導致心室心肌細胞BNP的表達受到快速誘導，生成134個氨基酸的前BNP 原，經(jīng)過酶將一個26-氨基酸信號肽全面切除之后，變成1800AA 的BNP 原（proBNP）[5]。proBNP 在血液內(nèi)釋放過后會受到內(nèi)肽酶裂分解，變成32個氨基酸組成的BNP 以及76個氨基酸組成的NT-proBNP 物質(zhì)。NT-proBNP 缺乏生物活性，而BNP 主要是通過一個和二流半胱氨基酸連接的特異性17-氨基酸環(huán)構(gòu)成，產(chǎn)生生物學活性[6]。NT-proBNP 屬于非活性的氨基酸片段，目前對于其生物學功能尚未明確。室壁張力以及左室牽張均能有效調(diào)節(jié)NT-proBNP的釋放，而健康人體中BNP 以及NT-proBNP 等摩爾分泌有著基本相同的血漿濃度，一旦機體出現(xiàn)心力衰竭癥狀，NT-proBNP 濃度上升速度較快，和BUP 相比至少多2～10倍[7]。

歐洲心臟病協(xié)會建議在對心血管疾病評價時利用BNP 作為主要的實驗室指標，但是BNP的生物半衰期只有20 min，所以BNP 在離開機體之后處于較不穩(wěn)定的狀態(tài)，但NT-proBNP的生物半衰期可維持在60～120 min，所以對NT-proBNP水平進行檢測的診斷意義較好[8]。大部分研究學者均指出，對于風濕性心臟病開展換瓣手術(shù)、既往心梗、高血壓、遺傳性心臟病、糖尿病等高危人群的篩查工作中能夠獲得指導的效果，需要對NT-proBNP 數(shù)值進行定期檢測，對心臟功能狀況進行全面了解[9-11]。

臨床上及時對NT-proBNP水平進行測定，能夠早期確診疾病，為疾病的治療提供良好的依據(jù)，同時為判斷危險分層以及治療預后奠定良好的基礎(chǔ)。NT-proBNP不但和患者的存活率有一定的關(guān)系，和體力活動受限情況的相關(guān)性較為明顯，而且能夠恢復循環(huán)穩(wěn)定能力以及對機體代償病理生理的變化進行反應[12]。但血漿中BUP 物質(zhì)具有較短的半衰期，僅能開展床旁快速檢測干預，而NT-proBNP水平具有較長的半衰期，有著較為穩(wěn)定的生理活性，能夠在-20℃的情況下長時間的保存血漿，適合在臨床批量測定中使用。有學者指出，相對于BNP 來說，心功能受損的情況下NT-proBNP水平會出現(xiàn)明顯增高，在早期心功能損害標志物發(fā)揮的意義較大，有著極大的敏感性[13-14]。目前，常見通過電化學發(fā)光法、快速免疫熒光法對NT-proBNP水平進行檢測。電化學發(fā)光法能夠在18 min 內(nèi)獲得檢測NTproBNP的結(jié)果，測試范圍在5～35 000 ng/L，選擇NTproBNP 測定的試劑盒，通過兩種多克隆抗體進行干預之后，通過電化學發(fā)光技術(shù)、夾心法免疫分析對樣本中NT-proBNP 濃度進行測定，屬于全自動分析方法[15]。快速免疫熒光法可在15 min 內(nèi)獲取結(jié)果，常用于床旁即時檢測工作中，測試區(qū)域在5～5000 ng/L。本研究結(jié)果顯示，電化學發(fā)光法的準確度、精密度、靈敏度 （95.51%、97.67%、98.84%） 均高于快速檢測法（88.37%、89.53%、87.21%），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。需要注意的是，NT-proBNP 檢測結(jié)果不會受到日常活動、時間、體位等影響，且有著長達60～120 min 的半衰期，其體外濃度在24 h 內(nèi)維持在不變的狀態(tài)，且外源性含BNP 成分的藥物不會產(chǎn)生影響，以上穩(wěn)定性較高的情況下能使檢測結(jié)果與BNP 藥物服用、標本運送等沒有關(guān)系，但是，為了確保結(jié)果的準確性，需要及時將血液標本送往檢測以及送檢。而腎功能、肥胖、性別、年齡等生理因素會影響NT-proBNP的濃度，而NT-proBNP 會伴隨著年齡的增加而出現(xiàn)升高的情況，主要是由于心舒張功能減退或者腎小球濾過率降低造成的。

綜上所述，應用電化學發(fā)光法測定NT-proBNP水平能夠有效地評估治療預后，有著完全自動化、快速可靠、無創(chuàng)傷等優(yōu)勢，值得全面推廣應用。