牛白血病的流行病學及常用診斷方法

劉偉彬/內蒙古錫林郭勒盟阿巴嘎旗吉爾嘎郎圖蘇木綜合保障和技術推廣中心 011499

牛白血病病毒是牛地方流行性白血?。ㄓ址Q牛白血?。┑牟≡?，是制約我國乃至全世界牛品種選育和牛養殖經濟健康持續發展的重要影響病原體之一。牛白血病在世界大部分國家的牛群中均有存在，在我國北京、上海、新疆等省市也報道過牛白血病病例存在。牛白血病病毒感染可導致多種臨床結果，大多數牛白血病病毒感染的牛是病毒的無癥狀攜帶動物，既沒有任何臨床癥狀，也沒有任何血液淋巴細胞生化變化。大量研究報道表明牛白血病病毒感染但臨床上表現正常的牛可能表現出一定程度的免疫失調、牛奶產量減少、傳染病高發和生殖效率低下從而導致經濟損失。大約1/3 的受感染牛會出現未轉化B 淋巴細胞的良性非惡性增殖形式，稱為持續性淋巴細胞增多癥。不到5%的受感染牛在相對較長的潛伏期后發展為惡性 B 細胞淋巴瘤，這種惡性 B 細胞淋巴瘤主要在4～5歲以上的牛中檢測到，惡性腫瘤會導致脾臟破裂和淋巴結顯著增大，這些病變可在皮膚下見的。牛白血病的腫瘤細胞可以滲透到胃、心臟、腸和子宮等器官，從而導致牛白血病的臨床癥狀多種多樣，主要常見癥狀包括消化障礙、病牛體重減輕、產奶量減少等。

1 牛白血病的流行病學

牛白血病病毒可感染多種反芻動物，但主要的易感宿主和產生經濟損失的動物為牛，包括奶牛、肉牛和牦牛，但相對比，奶牛受牛白血病病毒的影響更大。牛白血病可在各日齡的牛中出現，但以低日齡牛的易感性和臨床癥狀程度更為嚴重。目前，無人感染牛白血病病毒發病的有力證據。牛白血病病毒可通過水平和垂直兩種傳播途徑在牛群中傳播，對于犢牛來說，兩種途徑均可感染，一方面犢?？赏ㄟ^帶毒牛垂直感染牛白血病病毒，另一方面，犢牛也可通過帶有牛白血病的牛乳、呼吸道吸入病毒或直接接觸帶毒牛水平感染。由于牛白血病病毒感染后可出現無癥狀攜帶者，該種帶毒牛對牛群的威脅更大。此外，輸液、疫苗接種等操作也可導致牛白血病的傳播，使用未消毒的輸液等相關醫療器械，導致易感染接觸帶毒牛的血液造成感染。此外，蚊、蠅等吸血性昆蟲在牛白血病的傳播過程中也具有重要作用。

2 牛白血病在中國的流行情況

牛白血病病毒已經通過種畜貿易傳播到各大洲，并且在全世界的牛中很普遍。牛白血病病毒的感染水平在國家之間和國家內部地區之間有所不同。牛白血病在中國奶牛場中的流行率較高，牛白血病病毒感染率最高可達49.1%，而肉牛場的牛白血病病毒陽性率甚至不到1.6%。此外，血清學檢測顯示，中國20.1%的牦牛為 BLV 陽性。

3 牛白血病的診斷

目前，已有多種牛白血病病毒的檢測方法可供選擇，這些方法可分為兩種，一種是基于牛白血病病毒特異性抗體的血清學檢測方法，另一種為基于病毒核酸的分子生物學檢測方法。

3.1 血清學檢測牛白血病病毒的血清學檢測方法是臨床上較為常見的檢測方法之一，這些檢測方法基于牛白血病病毒特異性抗體，牛白血病病毒p24衣殼蛋白和細胞外gp51 蛋白的抗體是血清學檢測的目標。大多數血清學方法旨在檢測牛血清和牛奶中的抗體，以及牛白血病病毒感染細胞培養物的上清液。瓊脂免疫擴散試驗是一種相對于其他血清學檢測方法檢測成本更低，可用于同時篩查多個血清樣本的方法，但該檢測方法存在不夠靈敏并且不適合分析牛奶樣品的缺點。ELISA 是一種高度靈敏且易于實施的牛白血病病毒的血清學檢查方法，可用于分析血清和牛奶樣品，但是ELISA 需要許多對照，并且部分血清樣本中可能會產生假陰性結果?？偟膩碚f，這些基于抗體的血清學檢測方法不能用于檢測小于6個月大的小牛，因為小牛樣品中可存在母體抗體，這可能會引發假陽性結果。

3.2 基于病毒基因組的分子生物學檢測方法牛白血病病毒可以整合到宿主基因組內并可保留在宿主細胞基因組中，因此即使沒有檢測的牛白血病病毒抗體但仍可以檢測到病毒核酸。事實上，傳統檢測技術幾乎無法檢測到來自感染動物的新鮮腫瘤或外周血單核細胞樣本中牛白血病病毒基因組，但隨著分子生物學技術的發展使得從上述樣品中檢測牛白血病病毒基因組成為可可能。因此，除了使用上述常規血清學檢測技術對牛白血病病毒感染進行常規診斷外，基于核酸的 PCR 方法可以大大加速牛白血病流行的檢測進程。包括標準的PCR，巢式PCR，實時定量PCR（qPCR）和基于血液的直接PCR在內的多種PCR 檢測方法已在世界范圍內廣泛應用于牛白血病病毒檢測。然而，PCR 檢測方法需要昂貴PCR 儀器和試劑，并且樣品制作過程復雜且要求操作人員具有一定的科學背景和試驗基礎。最近，研發了一種新的基于血液的 PCR 檢測系統，該系統無需 DNA分離和純化即可擴增目標 DNA。該檢測方法可以以高特異性和低檢測牛白血病病毒的成本，有助于及時檢測出牛白血病病毒感染的牛。

如上所述，基于 PCR 的基因組篩選方法診斷牛白血病病毒對多種類型的樣品均可以進行檢測，并提高了檢測的靈敏度、特異性和效率，耗時更少。PCR 還可檢測出抗體前幾周內檢測易感牛的感染情況。然而，基于 PCR 的病毒篩查涉及復雜的樣品制備過程，可能會導致假陽性結果。此外，基于 PCR的牛白血病病毒檢測方法需要特定的實驗室設施，包括 PCR 儀，并且還需要設計特定的引物和探針。

4 結語

目前，仍無市售商品化的牛白血病病毒疫苗和特效治療藥物，大部分牛場對牛白血病病毒控制主要通過檢測、淘汰等方法。在牛白血病病毒的防控工作中，牛白血病病毒的診斷是防控工作的基礎。由于大部分感染牛白血病病毒的牛不表現任何臨床癥狀，這對臨床診斷造成可嚴重的障礙，但高度特異和靈敏的實驗室檢測方法可以解決該問題。由于對牛白血病病毒的知識上的欠缺，目前雖然已經有多種可用于牛白血病病毒的檢測方法，但仍存在技術上的欠缺。因此，在未來的研究中，一方面要應用現有的檢測技術了解牛群中牛白血病病毒的流行情況，定期監測牛群的抗原或抗體水平，尤其是在奶牛場。另一方面，應進一步加快對牛白血病病毒的致病機理、傳播方式等方面的基礎研究，從而針對性的開發牛白血病病毒的診斷方法和特效疫苗藥物等，進一步改進牛白血病病毒的防控方法，提高防控效果。