一例鴨坦布蘇病毒與大腸桿菌混合感染的診斷

唐華麗 馮小露 黃俊霖 江婷 林曉梅 王粲 楊飛燕 韋天超*

1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 530005

2.廣西柳州市柳北區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 545001

鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）病自2010年在我國(guó)中東部開始暴發(fā)以來，對(duì)我國(guó)的水禽養(yǎng)殖造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。DTMUV 可引起產(chǎn)蛋鴨產(chǎn)蛋量下降，一些病情較重的感染鴨預(yù)后不良且死亡率較高。發(fā)病肉鴨表現(xiàn)排黃綠色稀糞，精神沉郁，嚴(yán)重的可出現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)，繼而全身器官衰竭死亡。該病流行范圍廣，且感染宿主不僅僅局限于鴨，多數(shù)禽類都可感染該病毒。致病性大腸桿菌可通過多種水平傳播及垂直傳播途徑進(jìn)行傳播，發(fā)病率和死亡率較高；若與其它病原混合感染，則會(huì)加重病情。

2019年11 月底，廣西大學(xué)養(yǎng)禽與禽病研究所接診了廣西南寧市某養(yǎng)殖公司五個(gè)鴨場(chǎng)的疑似為鴨黃病毒、鴨呼腸孤病毒和大腸桿菌混合感染的病例，現(xiàn)詳細(xì)報(bào)告如下。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

來自南寧市某養(yǎng)殖公司的送檢病鴨共24 只，詳情見表1。

表1 送檢病鴨日齡和數(shù)量表

五個(gè)發(fā)病鴨場(chǎng)飼養(yǎng)的均為櫻桃谷肉鴨。發(fā)病期間出現(xiàn)排白綠色稀糞、發(fā)熱、同時(shí)伴有神經(jīng)癥狀，食欲減退，短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)一定數(shù)量的死亡。發(fā)病的五個(gè)鴨場(chǎng)先后免疫過鴨細(xì)小病毒和病毒性肝炎抗體、黃病毒凍干苗、新流腺油苗以及鴨傳染性漿膜炎油苗和禽流感疫苗。發(fā)病后使用過氟苯尼考、復(fù)方磺胺嘧啶、沙拉沙星和慶大霉素治療，但均不見好轉(zhuǎn)。

2 剖檢病變

剖檢24 只發(fā)病鴨均見肝、脾腫大、心包積液、腎臟花斑樣等特征性病變。第四、五群病鴨有明顯的腦出血現(xiàn)象。其他器官無明顯病變。

根據(jù)流行病學(xué)特征、臨床癥狀及剖檢病變，初步懷疑為鴨坦布蘇病毒、呼腸孤病毒和大腸桿菌感染，確診需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷。

3 實(shí)驗(yàn)室檢查

3.1 細(xì)菌學(xué)檢查經(jīng)無菌操作，采取送檢病鴨的肝臟做細(xì)菌培養(yǎng)，接種于麥康凱、鮮血瓊脂培養(yǎng)基，置于37℃溫箱培養(yǎng)。培養(yǎng)48h 后，麥康凱培養(yǎng)基上可見紅色菌落；鮮血瓊脂培養(yǎng)基上可見圓形凸起，光滑半透明的灰白色菌落。

3.2 RT-PCR 檢測(cè)根據(jù)文獻(xiàn)合成擴(kuò)增DTMUV 基因的特異性引物。采集送檢病死鴨的脾臟等組織，按常規(guī)方法制成勻漿后，12000r/min 離心5min，取上清。用Trizol 法抽提病毒的總RNA。再利用HiFiScript cDNA Syntheisis Kit試劑盒（北京天根公司）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，以cDNA 為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖電泳進(jìn)行檢測(cè)。另外用本實(shí)驗(yàn)室建立的番鴨呼腸孤病毒病的診斷方法檢測(cè)上述病料組織的核酸模板。

結(jié)果表明，用鴨坦布蘇病毒特異性的引物可擴(kuò)增到1 條大小約為358bp的特異性目的條帶（圖1），而未擴(kuò)增到番鴨呼腸孤病毒的特異性目的條帶，說明病死鴨感染了鴨坦布蘇病毒。

圖1 臨床樣品DTMUV 及番鴨呼腸孤病毒的PCR 檢測(cè)結(jié)果

3.3 藥敏試驗(yàn)無菌采取各組細(xì)菌純培養(yǎng)物200μL 置于TSA 平板上，用玻璃棒將其涂勻，然后用鑷子將阿莫西林等17 種藥物紙片貼在瓊脂上，置于37℃培養(yǎng) 24h，觀察到該菌對(duì)阿莫西林、氨芐西林、甲氧嘧啶、磺胺異噁唑等耐藥；對(duì)鏈霉素低敏；對(duì)頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢他定、慶大霉素、丁胺卡那等極敏。具體結(jié)果如表2。

表2 細(xì)菌分離物藥敏試驗(yàn)結(jié)果（單位：mm）

4 診斷與防治

4.1 診斷根據(jù)送檢鴨臨床癥狀及細(xì)菌學(xué)和病毒分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果，病鴨最后診斷為DTMUV 和大腸桿菌混合感染。

4.2 防控首先應(yīng)加強(qiáng)衛(wèi)生消毒等生物安全措施，尤其是病死鴨的無害化處理。發(fā)病鴨群首先采取適當(dāng)?shù)闹С中灾委煟陲嬎刑砑臃暇S生素和葡萄糖，以增強(qiáng)抵抗力。結(jié)合鴨群的具體情況，給予敏感抗生素，防治細(xì)菌混合感染。此外，用弱毒疫苗接種健康鴨，可使鴨群獲得免疫力，從而使發(fā)病鴨群得到控制。

5 結(jié)語(yǔ)

鴨群發(fā)病可能與養(yǎng)殖環(huán)境差，疫苗保護(hù)效果欠佳有關(guān)。送檢的五個(gè)不同鴨場(chǎng)同時(shí)發(fā)病，可能是其五個(gè)鴨場(chǎng)相隔不遠(yuǎn)，疫病易通過各種途徑傳播。另外五個(gè)鴨場(chǎng)同屬一家公司，故在平時(shí)飼養(yǎng)、管理不足方面都較為一致。而且廣西南寧夏季時(shí)間長(zhǎng)，蚊蟲較多，即使是十一月份氣候溫度仍較高，因此給作為蟲媒病毒的DTMUV 提供了有利的傳播條件。

DTMUV 可感染多個(gè)品種的產(chǎn)蛋鴨。此外，產(chǎn)蛋雞、鵝也曾有過發(fā)病的報(bào)道。鴨群在感染坦布蘇病毒后機(jī)體免疫力下降，易感染大腸桿菌，DTMUV和大腸桿菌混合感染將造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。鴨坦布蘇病毒主要是破壞鴨生殖系統(tǒng)，所以種鴨場(chǎng)和蛋鴨場(chǎng)應(yīng)以預(yù)防為主，開產(chǎn)前應(yīng)免疫鴨坦布蘇病毒病活疫苗，由于該病是由蟲媒傳播病毒，因此做好生物安全防疫措施是必要的。此外，應(yīng)該重視提升鴨群的免疫力和抵抗力，重視鴨場(chǎng)的環(huán)境衛(wèi)生和通風(fēng)條件。