丙型肝炎臨床檢驗(yàn)技術(shù)分析

張雪溪

摘要：丙型肝炎的首個檢測方法是丙肝病毒（HCV）檢測法，經(jīng)過多年發(fā)展，HCV檢測方法有了極大的進(jìn)步。本文分析總結(jié)多種檢驗(yàn)技術(shù)，為加快HCV檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展提供參考。

關(guān)鍵詞：丙型肝炎;臨床檢驗(yàn);技術(shù)分析

【中圖分類號】 R446.11? ? 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2021）17--01

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染引起的傳染性疾病。HCV傳染的途徑較多，主要通過血液傳播，但仍未能明確一半以上HCV患者的傳染途徑。HCV病毒感染的人數(shù)已經(jīng)破億，且不斷的增加。由于乙肝病毒極易變異，尚未研制出專門有效的丙肝疫苗，因此，需要靈敏的檢驗(yàn)技術(shù)，積極預(yù)防及早發(fā)現(xiàn)HCV感染，避免丙肝發(fā)病影響健康。

1抗-HCV檢驗(yàn)技術(shù)

該技術(shù)是最早的HCV檢測技術(shù)，可以詳細(xì)劃分為進(jìn)行間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、蛋白質(zhì)芯片檢測法、重組免疫印記法等，其中重組免疫印跡法因靈敏度較高，已成為抗體檢測的標(biāo)準(zhǔn)。

當(dāng)前抗-HCV檢驗(yàn)技術(shù)可根據(jù)抗原類型和時間分為三代：第一代抗-丙型肝炎病毒IgG盒，該檢測技術(shù)使用的是病毒基組非結(jié)構(gòu)區(qū)，簡稱C100，該試劑由美國在1900年研發(fā)并公布。該技術(shù)的出現(xiàn)，降低了丙型肝炎病毒輸血感染率，總體上降低80%的輸血傳染。但因其靈敏度低、檢測時間長等缺陷，被二代抗-HCV試劑盒取代。第二代抗-HCV試劑盒是在原有基礎(chǔ)上，增加新抗原，如肽C22-3和非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原C33C，抗-C22-3和抗-C33C。此種類型的抗-HCV檢測技術(shù)能很快的檢測出丙型肝炎病毒，而且有良好的特異性，增加的新抗原能提升HCV病毒檢測率。第三代抗-HCV檢驗(yàn)試劑盒，減少了核心區(qū)抗原比例，提升了非結(jié)構(gòu)區(qū)的抗原比例，同時加入了NS5區(qū)抗原。

此種抗-HCV病毒檢測技術(shù)仍然具有改進(jìn)潛力。隨著丙型肝炎研究的深化，發(fā)現(xiàn)了其他丙型肝炎病毒蛋白，通過加入外膜蛋白以提升檢測靈敏度。此種檢測方法制作簡單，檢測有效，有較大的推廣價值。

蛋白質(zhì)芯片是今年伴隨基因芯片發(fā)展的新技術(shù)。該技術(shù)通過將蛋白質(zhì)的分析微縮到小型芯片上，利用熒光或酶顯色進(jìn)行檢測，用電腦分析結(jié)果。蛋白質(zhì)芯片是將HCV混合抗原、核心區(qū)抗原、NS3、NS4、NS5區(qū)抗原分別固定在玻璃載體上，用樣本稀釋液將檢測血清稀釋10倍，加入蛋白微陣列反應(yīng)孔中，37℃環(huán)境靜置30分鐘，洗滌后加入Cy3熒光標(biāo)記的兔抗人IgG。加樣檢測后，玻璃片用激光共聚掃描儀掃描成型，對比同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)品，得出檢測結(jié)果。此種方法具有較高的特異性和敏感性，具有高度擴(kuò)充整合能力，但需要用較昂貴的激光掃描儀，增加了應(yīng)用成本。

2丙肝病毒核酸（HCV-RNA）擴(kuò)增檢測技術(shù)

若患者感染丙型肝炎病已超過兩周，則能在血清中檢測到HCV-RNA。在感染完全恢復(fù)之前，血清中的HCV-RNA呈現(xiàn)第一個高峰，所以非常有必要應(yīng)用丙肝病毒核算擴(kuò)增檢測技術(shù)。該技術(shù)按照常規(guī)PCR方式進(jìn)行體外基因擴(kuò)增，通過熒光探針與被擴(kuò)增片段中的特異區(qū)域結(jié)合，當(dāng)引物沿模板延伸至結(jié)合處時，熒光報告集團(tuán)沿耐熱DNA聚合酶的3～5′外切酶活性將探針切下來，即釋放激光熒光。儀器根據(jù)實(shí)時檢測到的數(shù)據(jù)和熒光化學(xué)合為一體，PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物分析的全過程在單管封閉條件下進(jìn)行，減少產(chǎn)物污染和不能定量分析的問題，通過微機(jī)控制，實(shí)時進(jìn)行動態(tài)檢測擴(kuò)增產(chǎn)物并自動分析結(jié)果，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確。

因HCV-RNA在早期就會出現(xiàn)，并且HCV-RNA擴(kuò)增檢測技術(shù)具有非常高的靈敏性，可以用于早期診斷，降低丙型肝炎病毒感染的風(fēng)險。在血清學(xué)指標(biāo)不確定，無法得出準(zhǔn)確結(jié)論時，可以運(yùn)用該技術(shù)，增加了臨床確診的準(zhǔn)確性。血清學(xué)方法只能檢測該病原體的表型，無法明確診斷，而有些情況免疫學(xué)指標(biāo)不能完全的反應(yīng)病原體的感染狀況，醫(yī)院人員可以使用HCV-RNA擴(kuò)增檢測技術(shù)進(jìn)行檢測，查看患者是否存在病原體，為醫(yī)生準(zhǔn)確判斷病人病情提供相應(yīng)的準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。

病毒在樣品中穩(wěn)定性較差，血清在采集后應(yīng)立即檢測或快速冷凍，避免樣品失活或分解，減少其他影響因素。一般HCV-RNA檢測應(yīng)用的是聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，該技術(shù)的檢測靈敏度高，而且全自動定量測量。

3丙肝病毒抗原檢測技術(shù)

丙肝病毒核心抗原蛋白中有191個氨基酸，其中氨基酸序列非常嚴(yán)格，與丙型肝炎病毒中的氨基酸序列相比，有95%以上是同源，這一現(xiàn)象完全可以作為丙型肝炎病毒感染的典型標(biāo)志。通過檢測丙型肝炎病毒抗原，有利于患者及早發(fā)現(xiàn)病情。

HCV病毒抗原檢測分為以下兩種：

一種是肝組織中HCV病毒抗原檢測，以單克隆抗-HCV-N33直接酶標(biāo)記法測定石蠟包埋肝組織中丙型肝炎病毒抗原，該抗體系應(yīng)用于基因重組，表達(dá)丙肝抗原，具有簡便、快速、穩(wěn)定、特異性和靈敏性高的特點(diǎn)。但做肝臟穿刺對病人有一定損傷，難以推廣。

另一種是血液中HCV核心抗原（HCV-cAg）檢測，HCV核心抗原是HCV基因編碼的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)之一，其中21～61位氨基酸區(qū)域是高度保守免疫活性區(qū)。HCV-cAg是感染者體內(nèi)最早出現(xiàn)的血清標(biāo)志物，與HCV-RNA出現(xiàn)的時間相同。已知有兩種檢測HCV-cAg的雙抗體夾心法ELISA試劑，一種是在抗體產(chǎn)生之前直接檢測血清HCV游離核心抗原，另一種是在窗口期和抗體產(chǎn)生后的病毒復(fù)制期檢測總HCV核心抗原。后者不受檢測樣品中的抗HCV抗體影響，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于HCV血清學(xué)轉(zhuǎn)換前的早期急性丙型肝炎的診斷。

HCV-cAg ELISA檢測法具有較高的敏感度和精密度，不受其他疾病的影響，在感染初期即可檢測出HCV-cAg縮短“窗口期”。它和HCV-RNA核酸檢測技術(shù)具有較高的關(guān)聯(lián)性，操作簡便，敏感性好、特異性高、不需要特殊設(shè)備，費(fèi)用低廉，具有較高的應(yīng)用價值。

4結(jié)束語

綜上所述，丙型肝炎病毒檢測技術(shù)要遵守靈敏度高、準(zhǔn)確、有效的原則。所有檢測技術(shù)中抗-HCV病毒檢測因制作成本低、具有普遍性，適用于一般檢測。HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測因靈敏度高、測定時間長，適用于早期診斷和無法判斷的情況，病情能有準(zhǔn)確的判定。HCV-cAg檢測因操作簡便、靈敏度高，適用于急性丙型肝炎的診斷。HCV病毒檢測技術(shù)的發(fā)展方向是做到迅速、準(zhǔn)確、具有較高靈敏性;同時監(jiān)測患者治療和后期療效觀察。

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