E2F1與LGR5在結直腸癌中的表達及臨床意義研究

韓 影，程 薇，刁文卓

（吉林省吉林市中心醫院1.病理科；2.神經外科，吉林 吉林 132011）

結直腸癌是消化道內最常見的惡性腫瘤之一，近年來隨著生活水平的提高及不健康的飲食習慣，其發病率也逐漸攀升，其危害非常大。資料顯示，該病在我國境內呈現出同比國際水平每年3%增速更高的漲幅，甚至可達5%，新發病例可高達40萬/年。臨床中，對于處于同樣年齡段、分期，甚至性別均相同的病例，經同樣藥物采用，所獲療效具較大差異性。鑒于此，基于同病異治理念的個體化靶向藥物治療，于患者及醫生均為佳選。

E2F1是調節細胞周期重要的影響因子之一，同時參與細胞的代謝、增殖及凋亡，是腫瘤發生、進展的關鍵中心環節，可作為一個潛在的治療靶點，對腫瘤的治療產生重要的影響[1]。LGR5在多種腫瘤組織中過表達，是腫瘤干細胞標記物中非常有影響力的一個標記物，特別是在結直腸癌中與腫瘤的發生、發展有一定關聯[2]。

1 材料與方法

1.1 材料

收集我院2016～2019年間手術及內鏡活檢的石蠟包埋標本200例，其中結直腸癌患者80例，腺瘤患者120例，所有病例均按照消化系統WHO標準進行分期，結直腸癌患者高分化25人、中分化30人、低分化25人進行分組，腺瘤患者低級別60人，高級別60人，隨機自腫瘤患者中采集20人癌旁正常組織進行檢測，并納入對照組。納入試驗者在術前均未接受放化療。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

北京中衫金橋生物技術有限公司所予提供的鼠抗人E2F1單克隆抗體，福州邁新生物技術有限公司所予提供的DAB試劑、SP染色試劑盒，LGR5鼠抗人多克隆抗體。

1.2.2 主要儀器

免疫組化配套儀器，石蠟切片機，電熱恒溫干燥箱，光學顯微鏡等。

1.2.3 免疫組化染色

針對所有病理切片進行連續切片，厚度保持在2.5 μm，從中擇取一組，遵HE染色程序行標準染色，經SP免疫組化法完成指標E2F1、LGR5的檢測工作。

1.2.4 結果判定

基于半定量雙盲法，結合顯微鏡下所觀測到的免疫組化陽性細胞染色情況予以結果評價，一抗E2F1抗體呈陽性反應判斷依據為細胞核呈現出棕黃色、棕褐色特征，LGR5抗體陽性反應判斷依據為細胞膜與細胞漿經觀測均有棕黃色顆粒呈現，陰性對照為PBS代替一抗，針對每張切片均予以5個高倍視野隨機觀察，每個視野內有200個腫瘤細胞呈現，其中陽性細胞數計數達50%及以上判定強陽性診斷（+++），介于49%～25%判定陽性（++），介于25%～5%范圍評定弱陽性（+），而低于5%即為陰性判定（—）。

1.2.5 統計方法

對研究所獲數據倶以全新數據模型構建，予以平均值±標準誤（MEAN±SE）表示，并經Graph Pad Instat 5.0完善統計學分析，多組間比較實施單因素方差分析，兩組間比較實施Student’st檢驗。結果以P＜0.05呈現，示意差異具統計學意義。

2 結 果

研究表明E2F1抗體陽性反應為細胞核著色，我們的研究結果表明，正常結直腸粘膜組織和結直腸腺瘤中陽性表達較明顯，在結直腸癌組織中低表達或不表達（P＜0.05），而腫瘤組織中高、中、低分化程度之間則沒有明顯的顯著差異。說明E2F1抗體的陽性表達與結直腸癌的惡性程度呈負相關。見表1。

表1 E2F1在結直腸癌及腺瘤中的表達

3 討 論

社會經濟、科技以及醫療水平的高速發展與大幅進步，使得近年臨床所予結直腸癌可實施的治療方案與手段呈現突飛猛進的發展態勢，但并不與之呈相應發展的民眾非健康生活方式，如飲食方式及飲食習慣等諸多問題的出現，結直腸癌的發病率逐年上升，且越來越年輕化。并且結直腸癌患者約占所有腸癌的90%左右，甚至占比更多，所以臨床醫生更迫切的需要尋找有效的診斷方法和治療手段，從而延長患者生命并提高其生活質量[3]。

（1）E2F1是Helin于1992年最先篩選出來的，也是轉錄因子E2F家族8個家族成員之一，E2F1作為轉錄因子能夠參與調節細胞周期，但是高表達的E2F1的也同樣能誘導諸多類型的細胞凋亡。在一些腫瘤如乳腺癌、肺癌等腫瘤中，E2F1是促進細胞癌變的。在我們的研究中，我們發現正常結直腸粘膜的E2F1表達明顯，在腺瘤中表達有所下降，特別是低級別瘤變的組織中，而癌組織中表達明顯減少，這就說明在結直腸癌患者中，E2F1起到一個腫瘤抑制的作用[4]。

（2）LGR5廣泛分布在人體多種器官，是G蛋白偶聯激素受體家族成員之一，也是一種獨立的G蛋白偶聯受體分子，亦被稱作G蛋白偶聯受體49（GPR49）。許多國內外研究均證實LGR5在多種腫瘤中高表達，如結直腸癌，肝細胞癌，卵巢癌，以及皮膚基底細胞癌等[5]。新近有研究表明LGR5在結直腸系膜隱窩的基底部高表達，提示此處可能為干細胞聚集的位置。也有文獻顯示在毛囊干細胞LGR5也會高表達，因此，我們推測LGR5在干細胞中可能起到重要作用。

結直腸癌的發生是一個復雜過程，可以有多種因素參與，E2F1、LGR5即為與其呈密切相關的因子，檢測所得數據顯示，前者與腫瘤惡性程度為正向相關關系，后者則為負相關。此外，本研究結果示，E2F1、LGR5在腫瘤發生中呈現出相互抑制特性。在臨床實踐中，E2F1、LGR5可視為結直腸癌檢測與診斷的突出且重要標志物，并經結合其他臨床參數，為治療方案制定與調整提供方向，且可評價預后[6]。采取有效方法實現對此兩種指標表達水平的控制，或可成為結直腸癌臨床有效治療的新思路與方向。