高效液相色譜測定食品包裝紙中三氯生和三氯卡班

□ 徐騰洋 牛燦杰 朱 帥 鄭仕劍 盛華棟 浙江方圓檢測集團股份有限公司

三氯生（TCS）和三氯卡班（TCC）是廣譜抗菌劑，抗菌劑機理主要是其既能夠作用于細菌的細胞壁[1]，阻礙細菌對于必需營養物質的攝入；又能夠穿透細胞壁進入到細胞內部，使細菌細胞質中的脂質、蛋白質發生不可逆變性，從而殺死細菌[2—4]。食品包裝紙由于和食品接觸，對其抗菌性要求較高，適當的向包裝紙中加入一定的抗菌劑，可以延長食品保質期。目前國內關于三氯生和三氯卡班的檢測方法研究主要集中在化妝品、洗滌用品方面，對食品中三氯生和三氯卡班的檢測方法也有一定的研究，但關于食品接觸材料方面的研究較少，本文建立了食品包裝紙中三氯生和三氯卡班的測定方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

三氯生、三氯卡班：美國Sigma公司。甲醇（色譜純），美國貝克（J.T.Baker）；乙腈（色譜純），美國貝克（J.T.Baker）；乙酸銨（分析純）廣州化學試劑廠。

LC—20AD 高 效 液 相 色 譜 儀（帶 二極管陣列檢測器），日本島津公司；高速冷凍離心機，美國Thermo 公司； 分 析 天 平（MS105DU）， 瑞 士METTLER TOLEDO 公 司； 超 聲 儀（DS—5510DTH），上海生析超聲儀器有限公司；Milli—Q 超純水制備器，美國Milipor 公司。

1.2 方法

1.2.1 標準曲線

分別稱取三氯生和三氯卡班10 mg放入10 mL 容量瓶中，加甲醇定容，配成1.0 mg/mL 標準儲備液；取適量標準儲備液，配制成標準混合工作液，濃度分別為三氯生0.2、1.0、5.0、20.0 mg/L與100.0 mg/L，三氯卡班0.05、0.5、2.0、20.0 mg/L 與100.0 mg/L。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：Accucore PFP（4.6 mm×10 mm，5 μm）；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL；掃描波長：190 ～400 nm。

1.2.3 樣品處理

稱取1 g 樣品于50 mL 離心管中，加入20 mL 乙腈，均質1 min，再超聲10 min，10 000 r/min 離心，將上清液轉移至雞心瓶中，旋蒸，1 mL 乙腈定容，過0.22 μm 微孔濾膜，濾液上機分析。

2 結果與分析

2.1 色譜條件優化

2.1.1 波長選擇

對三氯生和三氯卡班進行全波長掃描，吸收光譜如圖1。三氯卡班在205 nm 和264 nm 有特征吸收；三氯生在202 nm 和280 nm 有特征吸收。考慮到200 ～210 nm 波長下，有吸收的物質較多，故選擇264 nm 做為三氯卡班的檢測波長，280 nm 做為三氯生的檢測波長。

2.1.2 色譜柱及色譜條件選擇

比 較WondaSil C18（250 mm×4.6 μm，5 μm），Eclipse XDB—C18柱（250 mm×4.6 μm，5 μm），Accucore PFP（10 mm×4.6 μm，2.6 μm）3 根色譜柱對目標物的分離效果，發現對于前兩個色譜柱，改變甲醇乙腈和水的比例，三氯生和三氯卡班都無法完全分離。

而 采用Accucore PFP（10 mm×4.6 μm，2.6 μm）色譜柱，在甲醇水的比例在76 ∶24 的情況下，完全分離，見圖1，主要原因是三氯卡班和三氯生的結構非常相似，都含有3 個氯和2 個苯環，極性相近，一般的C18色譜柱很難分離它們，Accucore PFP 固定相中的氟化基團增強了對鹵代化合物的保留，從而較好分離三氯生和三氯卡班。

所以，最終采用的色譜柱為Accucore PFP（10 mm×4.6 μm，2.6 μm），流動相為甲醇∶水=76∶24。

2.2 樣品前處理過程優化

三氯生和三氯卡班的脂溶性較好，在水中溶解性較小，采用甲醇作為提取試劑。

本實驗研究C18柱、HLB 柱和NH2柱的凈化效果，從回收率來看，C18小柱和HLB 小柱的回收率都達到80%以上，NH2回收率較低。C18小柱的凈化效果更好，色譜圖上沒有干擾目標物質的雜峰，故選擇C18作為食品包裝紙中檢測三氯生和三氯卡班的凈化濃縮小柱。

圖1 采用Accucore PFP 時三氯生（TCS）和三氯卡班（TCC）色譜圖

2.3 方法學驗證

2.3.1 線性范圍、檢出限

為繪制標準曲線，針對1.2.1 所配制的標準溶液采用優化后的條件進行檢測。以峰面積為縱坐標Y，目標組分濃度為橫坐標X，計算線性回歸方程，以3 倍信噪比（S/N=3）計算檢出限，結果見表1。

2.3.2 方法回收率和精密度

在包裝紙中加標，TCS 的加標水平 為0.04、0.4、1.0 mg/kg，TCC 的加標水平為0.01、0.4、1.0 mg/kg，每個水平設6個平行，按照前述步驟處理，TCS 的回收率在80.2%～91.4%，相對標準偏差在1.3%～4.5%，TCC 的回收率在87.3%～95.6%，相對標準偏差在0.5%～2.1%。總體來說，回收較好，精密度較高，適用于一般樣品檢測。

表1 三氯生和三氯卡班的線性方程、線性范圍和相關系數及檢出限

3 結語

本文建立了食品包裝紙中三氯生和三氯卡班的固相萃取結合高效液相色譜檢測方法，并初步探索了三氯生和三氯卡班的遷移規律。食品包裝紙樣品經甲醇提取，C18柱富集凈化后， 通過Accucore PFP（10 mm×4.6 μm，2.6 μm）分 離，以甲醇和水為流動相進行梯度洗脫，采用二極管陣列檢測器定量。三氯生和三氯卡班分別在0.2 ～100 mg/L和0.05 ～100 mg/L 范圍內線性關系良好，相關系數（r2）均為0.999，方法定量限分別為0.04 mg/kg 和0.01 mg/kg。3 個水平的平均加標回收率為80.2%～90.6%，相對標準偏差為0.5%～4.5%（n=6）。本方法具有良好的靈敏度、回收率和重復性，適用于食品包裝紙中三氯生和三氯卡班的測定。