不同濃度七氟醚后處理對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷的影響

潘 峰

（浙江大學醫學院附屬婦產科醫院，浙江 杭州 310000）

新生兒缺氧缺血性腦病是由圍產期多種原因造成腦缺血、缺氧所導致的腦損傷綜合征，疾病給患兒的生命健康和生活質量造成嚴重威脅，為家庭和社會帶來巨大負擔[1]。由于傳統療法以及神經保護劑的臨床應用效果并不十分顯著，近年來人們已轉向對大腦內源性保護機制的研究，即缺血預處理和缺血后處理。既往研究表明，七氟醚可以明顯減輕缺血缺氧大鼠的腦損傷程度，但對有效的七氟醚后處理濃度的相關研究較少，本實驗采用不同濃度七氟醚對新生大鼠腦缺血缺氧模型進行后處理，以期望探討有效的后處理藥物濃度。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

7 d齡SD大鼠180只，體重12～16 g之間，采用隨機數字表法，將180只新生SD大鼠隨機分為6組（n=30）：假手術組（sham組）；腦缺血缺氧組（HI組）；腦缺血缺氧+1%七氟醚后處理組（HI+1%sev組）；腦缺血缺氧+1.5%七氟醚后處理組（HI+1.5%sev組）；腦缺血缺氧+2%七氟醚后處理組（HI+2%sev組）；腦缺血缺氧+3%七氟醚后處理組（HI+3%sev組）。

1.2 模型制備

參考Balduini等的方法建立改良的HIBI（缺血缺氧性腦損傷）模型：將7d齡新生SD大鼠麻醉后，對其頸部皮膚采用0.2%碘伏棉球進行消毒處理，順著頸部正中線縱向切開，在解剖顯微鏡下將左側頸總動脈分離出來，用7-0絲線對左側頸總動脈進行兩次永久結扎；手術操作時間在5分鐘之內。待大鼠清醒后，將其放回母鼠所在籠中繼續喂哺2h，然后將實驗大鼠置于自制的半密閉箱內，在自制的半密閉箱底墊適量的鈉石灰，主要是為了將箱內的CO2和水蒸氣吸收，半密閉箱出氣口連接Ohmeda氣體監護儀，以監測半密閉箱中氣體的濃度，用2 L/min流量的8%氧氣與92%氮氣的濕化混合氣體，經進氣孔向箱內持續輸入低氧混合氣體兩小時。假手術組則不進行缺氧處理，僅呼吸室溫下空氣，模型組實驗動物低氧處理兩小時后，置于室溫下15 min，讓其自然恢復，然后放回到母鼠所在籠中繼續喂哺，假手術組不進行左側頸總動脈結扎，不吸入低氧的混合濕化氣體，其他操作同手術組。

1.3 七氟醚后處理

不同濃度七氟醚后處理：除sham組與HI組外，將其余四組實驗動物分別于腦缺血缺氧后即刻置于自制半密封箱內，分別吸入1%、1.5%、2%、3%七氟醚（由30%氧氣和70%氮氣的濕化混合氣體輸送）30分鐘，七氟醚后處理結束后，將實驗大鼠置于自然環境下恢復至完全清醒后歸于母鼠所在籠中繼續喂哺。

1.4 檢測指標

（1）大鼠死亡率、體重。

（2）大鼠左右腦半球質量及質量比。

（3）計數大鼠左右腦正常神經元數量及計算密度比。

1.5 統計學方法

研究得到的數據經由SPSS 17.0軟件實施統計分析，使用“±s”的形式對計量數據加以表示，利用單因素方差分析開展各組間的數據對比，樣本均數對比行LSD檢驗；死亡率對比行Z檢驗；同組左右大腦半球對比行t檢驗；若P＜0.05，代表數據間存在統計學差異。

2 結 果

2.1 缺血缺氧后28天，記錄各組大鼠死亡率及體重

各組新生大鼠體重變化無統計學差異（P＞0.05），除Sham組死亡率為0，其余各組死亡率無統計學差異（P＞0.05）。

2.2 左/右大腦半球質量比

于缺血缺氧后28 d分別稱取各組大鼠左、右側大腦半球質量，計算左右大腦半球質量比。見表1。

2.3 測神經元密度比

與s h a m組相比，其余各組神經元計數明顯減少（P＜0.05）；與HI組相比，HI+1.5%sev組、HI+2%sev組對腦損傷有明顯的保護作用，正常神經元數量明顯增多，神經元密度比值明顯增高（P＜0.05）；與HI組相比，HI+1sev組、HI+3%sev組對腦損傷無明確的保護作用，差別沒有統計學意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠左右大腦半球質量及比值（n=10，±s）

表1 各組大鼠左右大腦半球質量及比值（n=10，±s）

注：*P＜0.05與sham組相比，△P＜0.05與HI組比較，#P＜0.05與HI+1%sev組相比

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3 討 論

新生兒缺氧缺血性腦病是圍生期多種因素造成缺血、缺氧而導致的新生兒腦損傷，水腫、軟化、壞死和出血是腦組織發生的主要病變，新生7 d大鼠行左側頸總動脈結扎后，暴露于8%O2-92%N22 h，是最常用于模擬新生兒缺血缺氧性腦損傷動物模型[2，3]。大鼠腦發育的一個關鍵期為新生7 d，這一時期神經元通過數量增加和突觸發生進行發育。有研究指出，這一時期神經元的數量越多，腦損傷的程度越嚴重，而且在海馬區的神經元數量對大鼠學習、記憶功能有著直接的決定作用，且影響是長期存在的。因此，本實驗通過計算海馬CA1區和扣帶回皮層的左右側正常神經元密度比值，并測定左右側腦的質量比，以反映腦損傷程度。本實驗結果顯示，缺血缺氧性腦損傷新生大鼠，在腦缺血缺氧后即刻吸入1.5%和2%七氟醚30 min后，左側大腦半球質量及左右側大腦半球質量比較缺血缺氧組明顯升高，海馬CA1區和后扣帶回皮層左右側正常神經元密度比明顯升高，表明七氟醚后處理減輕了新生大鼠缺血缺氧性腦損傷，對腦損傷的新生大鼠具有腦保護作用。