老年高血壓病人血漿蛋白Z水平變化及蛋白Z內含子FG79A基因多態性的臨床意義

王 霞，代紅偉，徐 丹

高血壓是老年人群的常見癥狀之一，我國老年高血壓發病率高達50%左右[1]。早期研究認為，高血壓是人體老齡化的生理現象，但隨著研究深入，臨床發現老年高血壓嚴重影響病人生活質量，而積極地治療可降低心血管事件發生率[2]。因此，分析老年高血壓發病機制并積極介入治療極其必要。血漿蛋白Z是抗凝血輔因子的一種，其基因具有14個單核苷酸基因多態性，有研究發現，這些基因位點突變與多種心血管事件密切相關[3]。本研究探討老年高血壓病人血漿蛋白Z水平變化及蛋白Z內含子FG79A基因多態性的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月—2019年1月在我院治療的老年高血壓病人220例作為觀察組，其中高血壓1級65例，高血壓2級110例，高血壓3級45例。納入標準：符合世界衛生組織制定的原發性高血壓診斷標準；年齡≥60歲，漢族；病人及家屬知情同意。排除標準：合并惡性腫瘤、肝腎功能障礙、甲狀腺疾病、自身免疫性疾病等其他基礎性疾病；近3個月內有出血史或手術史。選取同期健康體檢者220名作為對照組，兩組年齡和性別比較，差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 兩組年齡和性別比較

1.2 實驗方法 抽取兩組研究對象靜脈血5mL，采用Promega 全血DNA提取試劑盒進行DNA提取，之后選用賽默飛世爾科技ABI Veriti 梯度PCR儀進行擴增，反應體系：1 μL dNTP，2 μL 10×buffer，0.5 μL Taq酶，1 μL上下游引物(引物由上海桑尼生物科技有限公司提供)，2 μL DNA模板，12 μL 去離子水。反應條件：94 ℃，3 min；94 ℃，30 s；58 ℃，30 s；70 ℃，30 s；共32個循環，70 ℃，延伸5 min，采用2%瓊脂糖凝膠電泳PCR產物，之后進行酶切反應。體系如下：10 μL PCR產物，2 μL 10×buffer Tango，7 μL ddH2O，1 μL KspAI酶，將樣本置于37 ℃條件下水浴過夜，之后采用EB進行染色并電泳，采用英國馬爾文凝膠成像儀讀取結果。采用酶聯免疫吸附法測定兩組研究對象血漿蛋白Z表達水平，試劑盒由法國Stago公司生產。相關操作參照說明書進行。

2 結 果

2.1 蛋白Z內含子FG79A基因型 經KspA1酶酶切結果顯示：蛋白Z內含子FG79A基因型包括GG、GA、AA 3種基因型。詳見圖1。

圖1 蛋白Z內含子FG79A位點酶切結果電泳圖(M為Marker；1和4為GG型，2為GA型，3為AA型)

2.2 觀察組和對照組蛋白Z內含子FG79A基因型及等位基因比較 觀察組和對照組蛋白Z內含子FG79A基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(P>0.05)；觀察組和對照組蛋白Z內含子FG79A基因型和等位基因分布比較，差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 兩組蛋白Z內含子FG79A基因型及等位基因比較 單位：例(%)

2.3 觀察組不同高血壓分級病人性別、年齡、基因型比較 觀察組不同高血壓分級病人性別、年齡、蛋白Z內含子FG79A基因型分布比較，差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表3。

表3 觀察組不同高血壓分級病人性別、年齡、基因型比較

2.4 兩組血漿蛋白Z水平比較 觀察組血漿蛋白Z高于對照組(P<0.01)。詳見表4。

表4 兩組血漿蛋白Z水平比較(±s) 單位：g/L

2.5 觀察組不同高血壓分級病人血漿蛋白Z水平比較 高血壓分級越高病人血漿蛋白Z水平越高，其中高血壓分級3級病人血漿蛋白Z高于高血壓1級和2級病人(P<0.05)。詳見表5。

表5 觀察組不同高血壓分級病人血漿蛋白Z水平比較(±s) 單位：g/L

2.6 觀察組不同基因型病人血漿蛋白Z水平比較 觀察組血漿蛋白Z內含子FG79A不同基因型病人血漿蛋白Z水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表6。

表6 觀察組不同基因型病人血漿蛋白Z水平比較(±s) 單位：g/L

3 討 論

目前臨床未明確老年高血壓發病機制，相關研究認為，動脈壁內膜、中層變厚，脂質、鈣鹽沉積，凝血因素及遺傳等因素與疾病發生密切相關[4]。蛋白Z是肝臟合成的一種單鏈糖蛋白，是參與凝血、抗凝的重要因子。蛋白Z基因位于人體染色體13q34，有8個內含子和9個外顯子[5]。有研究發現，蛋白Z基因啟動子A-13G及內含子FG79A基因多態性與缺血性腦卒中密切相關，且蛋白Z基因FG79A基因具有保護缺血性腦卒中的作用，其機制可能與FG79A等位基因突變導致蛋白Z水平降低有關[6]。相關研究發現，蛋白Z基因FG79A位點頻率與蛋白Z蛋白水平降低有關[7]。關于蛋白Z基因FG79A位點多態性與老年高血壓之間關系的臨床研究較少。

本研究結果發現，觀察組和對照組蛋白Z內含子FG79A基因型和等位基因比較，差異無統計學意義(P>0.05)；觀察組不同高血壓分級病人蛋白Z內含子FG79A基因型分布比較，差異無統計學意義(P>0.05)，表明老年高血壓病人蛋白Z內含子FG79A基因型和等位基因與健康人群相似，提示蛋白Z內含子FG79A基因型和等位基因與老年高血壓關系不顯著。有研究發現，高血壓病人蛋白Z內含子FG79A基因多態性與健康對照組相似，蛋白Z內含子FG79A基因多態性與高血壓無關[8]，與本研究結果一致，提示可從其他基因多態性探討高血壓病機。相關研究發現，不同人種蛋白Z內含子FG79A基因型分布比例不同，歐洲人種蛋白Z內含子FG79A基因G→A突變比例低于漢族人種，表明不同種族蛋白Z基因多態性不同，對某些疾病的易感性可能不一樣[9]。

蛋白Z可誘導凝血酶與凝血因子Ⅹ結合并參與止血，促使蛋白Z依賴性蛋白酶抑制物抑制凝血因子Ⅹa活性[10-11]。機體蛋白Z表達不足，減弱蛋白Z對多種凝血因子抑制效應，病人血液處于高凝狀態，最終出現動脈粥樣硬化、高血壓等心腦血管疾病[12]。本研究結果顯示，觀察組血漿蛋白Z表達水平高于對照組，且高血壓分級越高的病人血漿蛋白Z水平越高，表明老年高血壓病人存在蛋白Z水平應激性高表達，對病人血液高凝狀態調節具有重要意義。蛋白Z高表達對維持機體抗凝平衡具有重要作用，較多研究認為，蛋白Z高表達是心腦血管缺血性疾病的獨立危險因素[13-14]。有研究發現，雖然高血壓人群蛋白Z表達水平升高，若病人曾發生心肌梗死或腦梗死，蛋白Z表達水平大幅下降，且低于健康人群，分析原因可能為該類病人血漿含有大量炎性因子，而炎性因子具有促蛋白Z低表達的作用[15]。本研究結果發現，觀察組蛋白Z內含子FG79A不同基因型病人血漿蛋白Z水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)，表明蛋白Z內含子FG79A基因多態性與血漿蛋白Z表達水平無關，分析心肌梗死或腦梗死病人蛋白Z低表達可能與自身消耗有關。

本研究亞組分析結果顯示，血漿蛋白Z水平高表達是老年高血壓的影響因素，但與蛋白Z內含子FG79A基因多態性無關，同時蛋白Z內含子FG79A基因多態性與老年高血壓無關。蛋白Z基因是以多態性還是聯合其他因子參與高血壓尚無結論，有待進一步研究。綜上所述，蛋白Z內含子FG79A基因多態性與老年高血壓疾病進展無關，而血漿蛋白Z水平在老年高血壓發病過程中可能發揮一定的作用。