高原地區(qū)藏、漢族輕度認(rèn)知障礙與阿爾茨海默病病人血清氧化低密度脂蛋白和髓過(guò)氧化物酶的水平

冀磊 鐘欣 杜燦 李國(guó)峰 李鴻娟 朱愛(ài)琴

AD是一種常見(jiàn)的老年神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。2020年AD報(bào)告[1]指出，美國(guó)65歲以上老年人有580萬(wàn)人患有AD，到本世紀(jì)中葉預(yù)計(jì)將增長(zhǎng)至1380萬(wàn)。輕度認(rèn)知障礙(mild cognitive impairment，MCI)作為正常衰老與早期癡呆之間的過(guò)渡階段，每年向癡呆的轉(zhuǎn)化率為8%～15%[2]，比正常人群高出近10倍。AD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，且尚未明確，但越來(lái)越多的研究證實(shí)，AD的發(fā)生與神經(jīng)炎癥反應(yīng)有關(guān)[3]。作為新型血管炎癥標(biāo)志物的氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)和髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)在高原地區(qū)藏、漢2個(gè)民族中與MCI和AD進(jìn)程的關(guān)系未見(jiàn)報(bào)道，故本研究以此作為研究目的，旨在為今后高原人群預(yù)防AD提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 入選對(duì)象均來(lái)自于青海省西寧地區(qū)(海拔2260 m)，在對(duì)當(dāng)?shù)鼐幼?0年以上的藏、漢族城鎮(zhèn)居民進(jìn)行的流行病學(xué)調(diào)查(2012～2015年)的基礎(chǔ)上，共選取180例進(jìn)行研究，年齡60～85歲。其中藏、漢族MCI組和AD組各30例，藏、漢族正常對(duì)照(normal control，NC)組各30例。MCI病人符合Petersen診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：主訴或知情者報(bào)告有認(rèn)知損害；神經(jīng)心理測(cè)試有一個(gè)或多個(gè)認(rèn)知領(lǐng)域損害(執(zhí)行功能、記憶、語(yǔ)言或視空間)；日常生活能力正常，未達(dá)到癡呆診斷標(biāo)準(zhǔn)。AD病人均符合美國(guó)國(guó)家衰老研究所和阿爾茨海默病學(xué)會(huì)(NIA-AA)AD診斷的2011版核心標(biāo)準(zhǔn)[5]，并結(jié)合MMSE評(píng)分結(jié)果判斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)失語(yǔ)、行動(dòng)不便、嚴(yán)重聽(tīng)力或視力障礙者；(2)有精神病史者或智力發(fā)育遲緩者；(3)合并感染性疾病等嚴(yán)重內(nèi)科疾病者；(4)合并可引起腦功能障礙的神經(jīng)系統(tǒng)疾病如腦卒中、腦血管性癡呆、高血壓腦病和腦外傷等病人；(5)合并抑郁癥等精神類疾病病人；(6)拒絕參加本次試驗(yàn)者。本研究已獲得青海省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審批同意。受試者及其監(jiān)護(hù)人同意參加本研究，均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 一般資料調(diào)查:制定統(tǒng)一的調(diào)查方法和調(diào)查問(wèn)卷，并對(duì)調(diào)查員進(jìn)行培訓(xùn)，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。采用問(wèn)卷調(diào)查方式，記錄一般人口學(xué)資料，包括：年齡、性別、世居海拔、民族、認(rèn)知狀態(tài)、日常生活能力、文化程度、居住地等。

1.2.2 神經(jīng)量表測(cè)定:采用MMSE進(jìn)行認(rèn)知功能評(píng)分，根據(jù)文盲、小學(xué)、中學(xué)、大學(xué)等不同的文化程度，分別以MMSE評(píng)分≤17、20、22、23分作為入選AD組的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 血液指標(biāo)檢測(cè)：所有受試者空腹采集靜脈血。一部分血液以4000 r/min離心，分離血清，置于-70 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫涣硪徊糠旨尤隕DTA-Na2抗凝，分離血漿，檢測(cè)血常規(guī)。采用ELISA法測(cè)定血清ox-LDL和MPO的水平，嚴(yán)格按照各試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行樣品處理、測(cè)定及質(zhì)量控制。所有試劑由上海瓦蘭生物科技有限公司(Wksu-BIO)供應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 基線資料比較 6組在人口學(xué)特征(性別、年齡、受教育程度)、RBC、Hb、肌酐、BUN、FPG、TC、TG等指標(biāo)上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但6組在MMSE評(píng)分、PLT、β2微量球蛋白、LDL等指標(biāo)上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，PLT在漢族人群中以AD組最低，MCI組最高；相反，在藏族人群中以MCI組最低，而AD組最高。β2微量球蛋白在漢族MCI組最低，AD組次之；而在藏族人群中，NC組最低，MCI組次之。不論藏族還是漢族，LDL均以MCI組最低，AD組最高。見(jiàn)表1。

表1 研究人群基線資料比較

2.2 6組血清oxLDL、MPO水平比較Kruskal-Wallis結(jié)果顯示，6組間血清oxLDL和MPO水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=39.746，P<0.001；χ2=13.039，P=0.023)。進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，與漢族NC組相比，藏族NC組oxLDL水平顯著增高(P<0.05)；與藏族AD組比較，漢族AD組、藏族NC組和藏族MCI組的oxLDL水平顯著減低(P<0.01)；在漢族中，AD組MPO水平顯著高于NC組(P<0.05)；藏族中，AD組MPO水平顯著高于MCI組(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 6組血清oxLDL、MPO水平比較[M(P25，P75)，n=30]

2.3 高原地區(qū)漢族血清oxLDL、MPO水平與MMSE評(píng)分的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，oxLDL水平與MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.737，P<0.001)，MPO水平與MMSE評(píng)分無(wú)明顯相關(guān)性(P=0.062)。

2.4 高原地區(qū)藏族血清oxLDL、MPO水平與MMSE評(píng)分的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，oxLDL評(píng)分與MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.794，P<0.001)，MPO水平與MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.742，P<0.001)。

2.5 高原地區(qū)漢族發(fā)生MCI和AD影響因素的多因素Logistic回歸分析 多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清oxLDL水平升高和高齡是高原地區(qū)漢族發(fā)生MCI的危險(xiǎn)因素；oxLDL和LDL水平升高是漢族發(fā)生AD的危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表3。

表3 影響高原地區(qū)漢族發(fā)生MCI和AD的多因素Logistic回歸分析

2.6 高原地區(qū)藏族發(fā)生MCI和AD影響因素的多因素Logistic回歸分析 多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，oxLDL、MPO水平升高，β2微球蛋白>0.18μg/mL是高原地區(qū)藏族發(fā)生MCI的危險(xiǎn)因素；oxLDL、MPO水平升高，受教育年限<6年、FPG>7.0 mmol/L是藏族發(fā)生AD的危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表4。

表4 影響高原地區(qū)藏族發(fā)生MCI和AD的多因素Logistic回歸分析

3 討論

隨著我國(guó)步入老齡化社會(huì)，AD發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)。高原具有低氧、低氣壓、強(qiáng)輻射的氣候特點(diǎn)，研究發(fā)現(xiàn)，高海拔地區(qū)老年人AD的發(fā)病率較內(nèi)地明顯升高[6]，可能的機(jī)制與低氧和間歇性低氧環(huán)境作為重要的環(huán)境因素和許多小膠質(zhì)誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的神經(jīng)退行病變有關(guān)[7]。樂(lè)衛(wèi)東教授課題組也發(fā)現(xiàn)低氧環(huán)境可能是AD發(fā)生的一個(gè)危險(xiǎn)因素[8]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，高壓氧治療可以降低3xTg-AD小鼠的神經(jīng)炎癥反應(yīng)，并改善其行為表現(xiàn)[9]。oxLDL是由血漿中的LDL經(jīng)過(guò)氧化修飾形成的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，通過(guò)脂質(zhì)調(diào)節(jié)產(chǎn)生多種不同的寡聚物亞型，使β-淀粉樣蛋白(Aβ)生成增加[10]，加速AD的發(fā)生發(fā)展。MPO是一種過(guò)氧化物酶超家族亞鐵血紅素酶，廣泛存在于中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中，具有過(guò)氧化物酶和溶酶體酶活性，能夠介導(dǎo)脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)、氧化損傷等過(guò)程[11-12]。已有研究表明，MPO可能與多種神經(jīng)退行性疾病有關(guān)。Tzikas等[13]發(fā)現(xiàn)，AD病人血漿中MPO水平明顯高于健康對(duì)照人群，提示MPO可能參與MCI和AD的發(fā)生發(fā)展。由于單一標(biāo)志物不可能真正涵蓋AD的全過(guò)程，因此聯(lián)合檢測(cè)這些生物標(biāo)志物將更有助于篩選和保護(hù)易感人群。

藏族是青藏高原地區(qū)聚居的主要民族。藏族經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的自然選擇，加之特殊文化生活方式，導(dǎo)致藏族很多疾病的發(fā)病率及其機(jī)制相較于其他民族有所不同。本研究通過(guò)比較180例藏、漢2個(gè)民族的血清oxLDL和MPO的水平發(fā)現(xiàn)，oxLDL和MPO在藏、漢族認(rèn)知功能減退不同階段中有著不同的表現(xiàn)；此外，在正常老年人群中，藏族oxLDL水平高于漢族。但這些現(xiàn)象的背后尚需更大樣本的流行病學(xué)調(diào)查以及相關(guān)研究來(lái)解釋。

本研究的Spearman相關(guān)分析結(jié)果提示，oxLDL水平升高可加重藏、漢族認(rèn)知功能損害的程度；在藏族中，隨著MPO水平的增加，MMSE評(píng)分越低，但在漢族中二者無(wú)相關(guān)性。多因素Logistic回歸分析結(jié)果提示，oxLDL水平升高可能是中高海拔地區(qū)藏、漢族發(fā)生MCI和AD的主要危險(xiǎn)因素，MPO水平升高是藏族發(fā)生MCI和AD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。可見(jiàn)oxLDL與藏、漢2個(gè)民族MCI和AD的發(fā)生發(fā)展均具有相關(guān)性，而MPO只在藏族認(rèn)知功能衰退過(guò)程中起作用。

本研究通過(guò)對(duì)藏、漢2個(gè)民族的基線資料比較發(fā)現(xiàn)，不論藏族還是漢族，LDL水平均以MCI組最低，AD組最高，提示LDL在癡呆的不同進(jìn)程中表現(xiàn)不一，其首先在MCI階段降低，然后在AD階段升高。多因素Logistic回歸分析結(jié)果提示，LDL水平升高是漢族發(fā)生AD的主要危險(xiǎn)因素，而這種危險(xiǎn)性并未在藏族中體現(xiàn)。目前研究關(guān)于血漿LDL水平升高對(duì)AD患病的風(fēng)險(xiǎn)影響結(jié)果并不一致[14-16]。本研究結(jié)果提示，LDL水平從正常人群到MCI到最后發(fā)展AD階段，出現(xiàn)了先下降后上升的趨勢(shì)，未來(lái)研究可進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，以期尋找一個(gè)折點(diǎn)，用以判斷MCI向AD的轉(zhuǎn)變。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)oxLDL和MPO在藏、漢族認(rèn)知功能減退的不同階段有著不同表現(xiàn)，oxLDL與藏、漢族MCI和AD的發(fā)生發(fā)展均具有相關(guān)性，而MPO只在藏族認(rèn)知功能衰退過(guò)程中起作用。但由于本研究樣本量較小，且未對(duì)MCI和AD病人進(jìn)行隨訪，對(duì)上述某些結(jié)果無(wú)法進(jìn)行深層次的解釋，有待下一步擴(kuò)大樣本量并延長(zhǎng)隨訪給出答案。