HPLC法測定注射用帕瑞昔布鈉與5%葡萄糖注射液配伍后5-羥甲基糠醛的含量

張 俊，李湘萍，杜加秋

（瀚暉制藥有限公司，浙江 杭州 310016）

5-羥甲基糠醛是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產生的一個醛類化合物，該化合物對人體橫紋肌和內臟有損害，且可發生聚合導致葡萄糖注射液變色[1]。注射用帕瑞昔布鈉說明書中建議的配伍溶劑包含5%葡萄糖注射液，為了確保用藥安全，需控制配伍溶液中5-羥甲基糠醛的含量[2-3]。本研究探討HPLC法測定注射用帕瑞昔布鈉與5%葡萄糖注射液配伍后5-羥甲基糠醛的含量，并模擬臨床用藥對配伍后的溶液放置一定的時間后5-羥甲基糠醛的含量進行測定，報道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀[廠家：戴安、島津]；電子分析天平和pH計[廠家：梅特勒]。

1.2 試藥

5-羥甲基糠醛（廠家：中國食品藥品檢定研究院，批號：111626-201912，含量99.2%）；帕瑞昔布鈉雜質A、B、C、D、E，注射用帕瑞昔布鈉（規格：40mg；批號：6190401、6190403）均由浙江海正藥業股份有限公司提供；5%葡萄糖注射液（廠家：湖南科倫制藥有限公司；批號：E18100601-1）；注射器（廠家：玉升醫療器械；批號：20200226）；輸液管（廠家：湖南省綠洲惠康發展有限公司；批號：20190601）。甲醇和磷酸為色譜級，磷酸二氫鉀為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的配制

精密稱取5-羥甲基糠醛對照品適量，用稀釋劑（甲醇：水=50:50）溶解并稀釋制成1μg/ml的溶液，作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的配制

取注射用帕瑞昔布鈉適量，加5%的葡萄糖復溶；用稀釋劑（甲醇：水=50:50）配制成含葡萄糖約5mg/ml的溶液作為供試品溶液。

2.3 色譜條件

苯基鍵和硅膠柱（型號：YMC Pack Pheny 1；柱長：4.6mm×250mm；直徑：5μm）；緩沖鹽：0.01mol/L磷酸二氫鉀水溶液，用磷酸調節pH至3.0±0.1。流動相A：甲醇-緩沖鹽=50:50；流動相B：甲醇-緩沖鹽=70:30；梯度洗脫，洗脫程序見表1；檢測波長284nm；流速：1.0ml/min；進樣體積：10μl；柱溫40℃；。供試品溶液的高效液相色譜檢測圖見圖1。

表1 梯度洗脫表

圖1 供試品溶液的高效液相色譜檢測圖

2.4 5-羥甲基糠醛限度的確認

根據《中國藥典》2020年版二部中與葡萄糖相關的制劑中5-羥甲基糠醛的最嚴限度，制定本品與葡萄糖配伍溶液中5-羥甲基糠醛限度為不得過葡萄糖標示量的0.02%[4]，并按此限度開展分析方法驗證。

2.5 準確度

分別按照5%葡萄糖注射液中5-羥甲基糠醛限度含量的20%、50%、100%、150%制備準確度溶液，每個水平3份，每份溶液按照“2.3”項下色譜條件測定并計算回收率，結果顯示各濃度下的平均回收率分別為108%、104%、102%、102%。方法的回收率良好。

2.6 重復性試驗

按照“2.2”項下平行配制6份供試品并進樣，按外標法計算，結果6份供試品溶液中，5-羥甲基糠醛含量的平均值為0.006%，相對標準偏差（RSD%）為0.0%，表明本方法重復性良好。

2.7 專屬性

精密量取“2.1”項下的對照品溶液和“2.2”項下的供試品溶液適量，按照“2.3”項下色譜條件分別進樣稀釋劑、對照品溶液、帕瑞昔布鈉雜質A、B、C、D、E定位溶液及供試品溶液，結果空白溶液對5-羥甲基糠醛含量測定無干擾，各雜質與5-羥甲基糠醛的分離度均大于1.5。

2.8 定量限與檢測限

精密量取“2.1”項下的對照品溶液，逐級稀釋并檢測，當濃度為0.0079μg/ml時，信噪比在10～20之間，對應含量為1.6×10-4%，為定量限。當濃度為0.0024μg/ml時，信噪比在3～5之間，對應含量為4.8×10-5 %，為檢測限。

2.9 線性與范圍

取5-羥甲基糠醛適量，用稀釋劑依次稀釋成定量限、50%、100%、150%、200%限度濃度的溶液，按“2.3”項下色譜條件進行測定，將濃度和峰面積進行線性回歸分析，得線性回歸方程：y = 1.3237 x - 0.0004，相關系數r為1.0000，故5-羥甲基糠醛在0.0079μg/ml～1.5820μg/ml濃度范圍內，具有良好的線性關系。

2.10 配伍溶液中5-羥甲基糠醛含量測定結果

取兩批注射用帕瑞昔布鈉（批號：6190401、6190402），分別按“2.2”項下的方法用5%的葡萄糖溶液復溶，依次在放置0、6、12、18、24和30h后，稀釋至成含葡萄糖約5mg/ml的溶液，按“2.3”項下的色譜條件進行測定并計算5-羥甲基糠醛的含量，結果在30h內，5-羥甲基糠醛的含量均為0.006%，均未超過葡萄糖標示量的0.02%，且未發生明顯變化，說明配伍溶液的穩定性良好。

3 討 論

注射用帕瑞昔布鈉說明書中建議的配伍溶劑包含5%葡萄糖注射液，為了確保用藥安全，需控制配伍溶液中5-羥甲基糠醛的含量。本研究采用高效液相色譜法檢測配伍溶液中的5-羥甲基糠醛，方法驗證結果顯示，該方法準確度高、專屬性強、靈敏度高，適用于注射用帕瑞昔布鈉與葡萄糖注射液配伍后的5-羥甲基糠醛的檢測。

將注射用帕瑞昔布鈉與葡萄糖注射液配伍后的溶液放置0、6、12、18、24和30小時后進行檢測，5-羥甲基糠醛的含量沒有隨放置時間的延長而發生變化，一直保持在初始水平，遠低于限度要求。故注射用帕瑞昔布鈉與5%葡萄糖注射液配伍穩定性良好，5-羥甲基糠醛低于限度的要求。